Способ получения производных хлорамбуцила (его варианты)

Способ получения производных хлорамбуцила (его варианты)

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

ОП ИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ПАТЕНТУ (61) Дополнительный к патенту(22) Заявлено 13.08.79 (21) 2804752/23-04

Союз Советских

Социалистических

Республик (11)М 003 860

Ж нг.Ф.

3 (51) М. Кл.

С 07 J !/00 (32) 14.08.78 (23) Приоритет

Гюсуаарстееииый кемитет

СССР (31) 98795/1978 (33) Япония ло делам изобретений

4 етнрытиЙ

Опубликовано 28. 02. 83.Бюллетень М 8 (Б3) УДК 547.689. . 07(088. 8) Дата опубликования описания 28.02.83

Иностранцы

Киро Асано, Хумио Тамура, Хиромиф Тайака и Сатору Еномото : - 2- (Япония)! т ".. >.

Иностранная фирма

"Куреха Кагаку Когио Кабусики Майся .. - ;:: ;ц (Япония) (72) Авторы изобретения (7E) Заявитель (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРОИЗВОДНЫХ ХЛОРАМБУЦИЛА (ЕГО ВАРИАНТЫ) (сн,) „o(c M, c > (.н, (."н,й fi) О О

ll Il — б-б Н вЂ” С вЂ” бЗН7

kИзобретение относится к способу получения новых производных где к - водород или ацильная группа которые обладают противоопухолевой активностью.

Известно, что соединения, содержащее бис-(P-хлорэтил)-аминогруппу хлорамбуцила общей формулы 1

1 являются алкилирующими цитостатическими веществами и применяются в качестве противоопухолевых препаратов.

К таким препаратам относятся сарколизин, хлорбутин, хлорамбуцил и другие )" 1)и (2).

Бель изобретения - расширение ассортимента средств, воздействующих

2о на живой организм.

Поставленная цель достигается тем, что согласно способу получения производных хлорамбуцила формулы I эстрадиол или его ацилированное производное по 17 положению подвергают

3 10018 взаимодействию со связующим агентоммонобромуксусной кислотой или монобромацетилбромидом в присутствии органического растворителя, затем модиФицированный эстрадиол или его ацилированное производное подвергают взаимодействию с карбоксилатной группой хлорамбуцила в органическом растворителе с последующим выделением целевого продукта. I0

Вариант описываемого способа,зак" лючается в том, что хлорамбуцил подвергают взаимодействию по карбоксилатной группе со связующим агентом - монобромуксусной кислотой или монобром- 15 ацетилбромидом в присутствии органического растворителя, затем модифицированный хлорамбуцил подвергают взаимодействию с гидроксильной группой в 17 положении эстрадиола или его аци-щ лированного производного в органическом растворителе. Нелевой продукт выделяют известным способом.

Пример 1. З-гидрокси-1,3,5(107-эстратриен-17 P - 1-(п бис (2-хлорэтил) амино1фенил1бутирилокси j ацетат

Получение З-гидрокси-1,3,5(10)-эстратриен-17 Р-монобромацетата.

10 г 1,3,5(10)-эстратриен-3,17 P -äèола растворяют в 400 мл безводного тетрагидрофурана (ТГФ) и затем добавляют пиридин (8,8 r).

Затем раствор 22,5 r монобромацетилбромида в 74 r четыреххлористого углерода добавляют по каплям к полуо ченному раствору при -5-7 С. Смесь поддерживают при этой температуре s течение одной ночи. После реакции полученный осадок отделяют фильтрацией. Растворитель из фильтрата отгоняют. Осадок растворяют в эфире и перекристаллизовывают из эфира с получением 1,3,5(10)-эстратриен-3,17Р

-бис(ионобромацетата). 2 г продукта растворяют в 900 мл метанола и раствор охлаждают до -5"С. К полученному раствору добавляют по каплям раствор 0,24 г углекислого калия в 20 мл воды. После реакции в течение 30 мин добавляют 1000 мл воды и получающийся осадок отделяют и высушивают. Элементным анализом и ИК-спектрами подтверждено, что продуктом является 3-гидрокси-1,3,5(10) -эстрадиен- 17 -монобромацетат.

Получение З-гидрокси-1,3,5(10-эстратриен-171 - 4(п-- бис(2-хлорэтил) амино)фенил)бутирилокси)ацетата.(Co60 4 пряженное вещество хлорамбуцил-эст"радиол

200 мг серебро (4- I u 1Гис (2-хлорэтил) амино)фенил)бутирата)(серебряная соль хлорамбуцила) добавляют в 10 мл ДМСО с образованием белого коллоидного раствора.

Затем 190,8 мг З-гидрокси-1,3,5(1;;.

-эстратриен-17Я-монобромацетата добавляют и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 64 ч в темноте. Осадок меняет свой цвет от жел4 то-зеленого до темно-зеленого при облучении светом. Фильтрат бесцветный и прозрачный. ДМСО отгоняют при пониженном давлении на водяной бане при о

80 С и добавляют 100 мл для получения белых кристаллов. Кристаллы отстаивают в течение 1 ч для удаления

ДМСО и далее отделяют через фильтр

G-4, тщательно промывают дистиллированной водой и сушат при пониженном давлении в эксикаторе. Выход сырого продукта 330,5 мг.

Очистка продукта. 330,5 мг полученных кристаллов растворяют в смешанном растворителе из 50 об. ч. циклогексана и 10 ob. ч. этилацетата.

Раствор медленно пропускают через колонку, наполненную 40 г силикагеля, и продукт постепенно отделяют с получением 188,2 мг чистого продукта (выход 62,863), Результаты элементного анализа, температура плавления и ИК-спектры продукта следующие.

Найдено,й: С 66,0; H 7,0; и 2,3;

С1 11,0.

Рассчитано,t: С 66,22; Н 6,98;

N 2,27; С1 11,52

Т.пл. (полужидкий) 25 С. о

Пример 2. 3-бензоилокси-1,3,5(10)эстратриен-17$ -t4 |n-1 бис (2-хлорэтил)амино.1фенил|бутирилокси

-ацетат.

10 г 1,3,5(10)-эстратриен-3,17Р-диола растворяют в 100 мл ТГФ и добавляют 10 мл водного раствора, содержащего 1,47 гидроокиси натрия.

Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 30 мин ° Затем реакционную смесь концентрируют сушкой при пониженном давлении на водяной бане при 80 С для удаления воды. Остаток растворяют в безводном тетрагидрофуране, к полученному раствору добавляют по каплям 50 мл этилового эфира, содержащего 5,5 г бензоилхлорида, и реакцию проводят при

5 1 001 комнатной температуре в течение 16 ч.

После реакции получающийся хлористый натрий отделяют подходящим методом.

Фильтрат выпаривают досуха при пониженном давлении. Для . того, чтобы уда-S лить непрореагировавший бензоилхлорид добавляют 200 мл 0,1н. водного раствора гидроокиси натрия и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 15 мин. Получающиеся белые кристаллы отделяют с помощью фильтра

С-3 и тщательно промывают дистиллированной водой и высушивают при пониженном давлении в эксикаторе.

Продукт анализируют тонкослойной

1j хроматографией на силикагеле со смеэ шанным проявляющим растворителем (этилацетат и циклогексан в объемном соотношении 50:30) с получением основного пятна Rf:0,34, Сырые кристаллы перекристаллизовывают из этилацетата и получают 8,6 г белых кристаллов. Продуктом является

17Ð -гидрокси-1,3,5(10)-эстратриен-3-Гензоат согласно температуре плав;. ления, элементному анализу и ИК-спек трам.

7,0 г полученного продукта растворяют в тетрагидрофуране, добавляют

2,0 r пиридина и смесь охлаждают до

5 С.

К полученной смеси постепенно по каплям добавляют раствор, содержащий

15,5 r 30 -ного раствора монобромацетилбромида в четыреххлористом углеро- з де в 50 мл тетрагидрофурана. После добавления смесь перемешивают при -5 С в течение 2 ч и затем на ледяной бане ч и хранят в холодильнике 16 ч. После реакции полученный белый осадок от щ деляют с помощью фильтра 0-4, высушивают при пониженном давлении на водяной бане при 3AÐ С, добавляют 200 мл этилового эфира и смесь перемешивают „ с получением 5,3 r белых кристаллов.

Результаты элементного анализа и температуры плавления следующие.

Найдено,30: С 64,3; K 5,8; Вг 15,7

Рассчитано,4: С 64,23„ H 5,78;

Br 15,8.

Т.пл. 145-146 С.

182,3 мг 3-бензоилокси-1,3,5(10)-эстратриен-Я Р -монобромацетата и

148,5 мг серебро -4-п-бис(2-хлорэтил) амино-фенилГутирата добавляют в 5 мл ..

ДМСО и реакцию проводят при комнатной температуре в течение 3 дней в темноте. После реакции осадок бромида серебра отделяют фильтрацией и

860 4

400 мл воды добавляют к фильтрату. Получающийся белый осадок отделяют центрифугированием. Осадок растворяют в

50 мл ацетона и нерастворенное вещество отделяют фильтрацией через фильтр 0-4.

Фильтрат выпаривают досуха при пониженном давлении с получением 165 мг маслообразного продукта.

Продукт реакции хроматографируют на силикагеле со смешанным растворителем (этилацетат и циклогексан в объемном соотношении 10:50) с получением чистого продукта. Очищенный продукт - белое кристаллическое сое 1инение при 20 С. о

П р и,м е р 3. 3-пропионилокси-1,3,5(10)-эстратриен-17 - 4 -I п-бис(2-хлорэтил)амино фенил бутирилокси) ацетата.

10 г 1,3,5(10) -эстратриен-3,17P-диола растворяют в 100 мл тетрагидрофурана, добавляют 10 мл водного ра".. с вора, содержащего 1,47 гидроокиси натрия в 10 мл воды, и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 30 мин.Продукт реакции концентрируют досуха при пониженном давлении на водяной бане при 80 С для уда> пения воды. Остаток растворяют в бев водном тетрагидрофуране, раствор, содержащий 3,4 г пропионилхлорида в

50 мл безводного тетрагидрофурана, добавляют по каплям и реакцию проводят при комнатной температуре в течение

16 ч. После реакции осадок хлористого натрия отдаляют, фильтрат выпаривают досуха при пониженном давлении и остаток перекристаллизовывают из этанола с получением 9 г белых кристаллов.

Продуктом является 17 P гидрокси-1,3,5(10)-эстратриен-3-пропионат согласно элементному анализу и ИК-спектрам.

7 г продукта растворяют в 70 мл безводного тетрагидрофурана и 3,0 r пиридина добавляют к этому раствору и смесь охлаждают до -5 C., К полученной смеси по каплям добавляют раст» вор, содержащий 17,3 г 303-ного монобромацетилбромида в четыреххлористом углероде в 50 млтетрагидрофурана.После добавления смесь поддерживают при о

-5 С в течение 2 ч и затем в холодильнике втечение 16 ч для проведения реакции. После реакции полученный осадок отделяют фильтрацией. Фильтрат выпаривают досуха при пониженном

7 10018 давлении на водяной бане при 30 С, затем добавляют 200 мл этилового эфира и смесь перемешивают с получением 6,0 г белых кристаллов.фильтрат далее концентрируют с получени- S ем 3,5 г белых кристаллов. Кристаллы перекристаллизовывают из смешанного растворителя эфира с этанолом.

Результаты элементного анализа следующие.

Найдено,й: С 61,5; H 6,5;Br 17,9

Рассчитано,З". С 61,43; H 6,45;

Br 17,78.

Продуктом является 3-прогионилокси-1,3,5(10)-эстратриен-17Р -монобромацетат.

1 г продукта и 0,91 г сеоебро -4-(и-абис (2-хлорэтил) амино 1фенил)гутирата диспергируют и растворяют в

50 мг РНСО реакцию выполняют при комнатной температуре k течение 3 дней в темноте. После реакции осадок бромида серебра отделяют фильтрацией и добавляют 4 л воды. Осадок отделяют центрифугированием и белый осадок растворяют в 50 мл ацетона, а нерастворимь.е материалы отделяют фильтрацией через фильтр G-4. Фильтрат выпаривают досуха при пониженном давлении с получением 1,3 г маслообразного продукта.

Продукт хроматографируют на силикагеле со смешанным растворителем этил, ацетат-циклогексан в соотношении 10:50 по объему для его очистки. Очищенный продукт имеет вязкость маслообразногоз продукта при 20 С. о

Результаты элементного анализа и

ИК-спектры.

Найдено,ь: С 67,1; H 7,0; N 2 1;

Рассчитано,3: С 66,0; Н 6,99;

Y. 2,08; Cl 10,56.

Ghbv

П ри ме р 4.3-ацетокси-1,3,5 (1 О)-эстратриен-17 ф -(4(п-бис(2-хлорэтил) п амино фенил бутирилокси ацетат.

1,0 г З-ацетокси-1,3,5(10)-эстратриен-17 -монобромацетата, полученного таким же способом, как в примере

2, и 0,9 г серебро 4-L nôèñ(2-хлор". этил) амино)фенил)бутирата добавляют в 50 мл ДИСО и реакцию проводят при

25 С в течение 3 дней в темноте. После реакции осадок бромида серебра отделяют и к фильтрату добавляют 4л воды. Пояучающийся Белый осадок отделяют центрифугированием. Осадок растворяют в

50 мл ацетона. Нерастворимое вещество отделяют с помощью фильтра G-4 и фильт60 8 рат выпаривают досуха при пониженно 4 давлении с получением 1,2 г маслообразного продукта.Продуктхроматографируют на силикагеле со смешанным растворителем этнлацетат-циклогексан при соотношении 10: 50 по объему. Очищенный продукт имеет вязкость маслообразного о материала при 20

Результат элементного анализа следуюший.

Найдено,б: С 66,0; Н 6,9; и 2,0

С1 10,9.

Рассчитано,ь: С 65,64; H 6,84; 1 2„13; Сl 10,79.

Пример 5. 1 r 3-ацетокси-1,3,5(107-эстратриен-17, -моноГромацетата и 0,8 г натрий 4- п— бис(2-хлорэтил) амино Женил бутирата добавляют к 50 мл тетрагидрофурана и проводят реакцию при 60 C в течение 24 ч.

После реакции осадок отделяют фильтрацией и фильтрат концентрируют и высушивают. Продукт отделяют и очишают с помошью колонки с силикагелем со смешанным растворителем этилацетатциклогексан с получением

О, г. очищенного продукта.3-ацетокси-t,3,5(10)-эстратриен-17 Ъ вЂ” Ь-(п-бис (2-хлорэтил) -амино Женил) Гутирилокси) ацетат.

Пример 6. 3-аветокси-1,3,5(10)

-эстратриен-17 P — 4+- бис (2-хлорэтил)амино1 Фенил)бутирилокси1 ацетат.

200 мг серебро 4-(n-1бис (2-хлорэтил) амино1шенил j бутирата (серебрян ная соль хлорамбуцила) добавляют в

10 мл PPICO с образованием белого коллоидного раствора. алее 190,8 мг

З-гидрокси-1,3,5(10)-эстратриен-ljP-монобромацетата добавляют к коллоидному раствору и смесь перемешивают гри комнатной температуре в течение

64 ч. Осадок меняет цвет до желтовато-зеленого. К осадку добавляют небол ьшое коли чест во ацетона и осадок отделяют фильтрацией через фильтр

G-4. Фильтрат бесцветный и прозрачный, Р>1СО отгоняют на водяной бане при 80оC и затем добавляют 100 мл воды для осаждения белых кристаллов.

Смесь отстаивают в течение 1 ч и затем ДМСО отгоняют. Белые кристаллы отделяют фильтрацией через фильтр

G-4, затем промывают дистиллированной водой и высушивают при пониженном давлении в эксикаторе. Выход сырого продукта 330,5 мг.

9 1001

330,5 мг сырого продукта растворяют в смешанном растворителе циклогексана с этилацетатом в соотношении 50:10 по объему. Раствор медленно пропускают через колонку, на- S полненную 40 г силикагеля для постепенного отделения продукта. Получают

188,2 мг (выход 62,86 1)чистого продукта.

Результаты элементного анализа и температура плавления продукта следующие.

Найдено,3: С 66,0; H 7,0; М 2,3;

CE 11,0.

Рассчитано,/: С 66,22; Н 6,98;

l5

Н 2,27; С1 11,52.

Температура кипения при 25 С в о расплавленном состоянии.

Подтверждено, что продуктом является З-гидрокси-1,3,5(10)-эстратриен

17 Р -(4-(и- бис (2-хлорэтил) амино фенил -Fyтирилокcи) ацетат, 50 мг продукта растворяют в 1 мл безводного пиридина, к этому раство" ру добавляют 1 мл уксусного ангидрида и проводят реакцию в холодильнике в течение 16 ч. Затем реакционную смесь концентрируют и высушивают при пониженном давлении на водяной бане при 30 С. Остаток смешивают с дистил- ЗО лированной водой и смесь отстаивают.

1 ч для осаждения маслообразного продукта в виде белой коллоидной пены.

Пирядин и уксусную кислоту удаляют с дистиллированной водой и продукт промывают водой, которая была нейтральной. Маслообразный продукт от деляют от водного раствора, концентрируют и высушивают в эксикаторе при пониженном давлении с получением 45 мг щ маслообразного продукта.

Продукт анализируют тонкослойной хроматографией на силикагеле со смешанным проявляющим растворителем этилацетатциклогексан в соотношении 30..50

45 по объему с получением одного пятна

RF : 0,78.

Продукт хроматографируют на силикагеле со смешанным растворителем этилацетат-циклогексан при соотношении

10:50 по объему для очистки продукта.

Очищенный продукт имеет вязкость маслообразного соединения при 20 С.

Результаты элементного анализа следующие.

Найдено,Ж: С 66,0; Н 6,5; М 2,0;

С1 10,9.

Рассчитано,4: С 65,64; Н 6,84;

М 2 13; 10 79

860 10

Пример 7,. 3-пропионилокси-1,3,5 (1О) -эстратриен-17 p -.Ã4-рп-(бис (2-хлорэтил) амино) г .енил 1бутирилокси ацетата.

50 мг З-гидрокси-1,3,5(10)-эстратриен-17,> -(4-(и- бис- (2-хлорэтил) амино фенил бутирилокси)- ацетата растворяют в 1 мл безводного пиридйна, добавляют 1,5 мл пропионового ангидрида и смесь держат в холодильнике в течение дня. Реакционную смесь выпаривают досуха при пониженном давлении на водяной бане при 30 С. Остаток смешивают сдистиллированной водой и смесь держат в течение 2 ч с образованием коллоидального маслообразного продукта. Пиридин и уксусную кислоту удаляют дистиллированной водой и продукт промывают нейтральной водой. Водную фазу отделяют и масляную .фазу высушивают при пониженном давлении и эксикаторе с получением 40 мг маслообразного продукта.

Продукт хроматографируют на силикагеле со смешанным растворителем этилацетат-циклогексан в соотношении 10:50 по объему для его очистки.

В результате подтверждено, что продуктом является 3-пропионилокси-1,3,5(10) -эстратриен-17 (-1 4- п( бис-(2-хлорэтил) амино)фенил)бутирилокси)-ацетат.

Пример 8. 3-бензоилокси-1,3,5 (10)-эстратриен-17Р-(4-(и-абис(2-хлорэтил) амино3фенил Рутирилокси)-ацетат.

50 мг 3-гидрокси-1,3,5(10)-эстратриен-17 (- п- бис (2-хлорэтил)амино фенил)бутирилокси ацетата растворяют в 1 мл безводного пиридина и добавляют 2 г бензойного ангидрида и смесь держат в холодильнике 1 день. Реакционную смесь выпаривают досуха при пониженном давлении на водяной бане при 30ОС. Остаток смешивают с дистиллированной водой и смесь отстаивают в течение 1,5 ч до получения коллоидного маслообразного продукта.

Пиридин и уксусную кислоту удаляют дистиллированной водой и продукт промывают нейтральной водой. Вбдную фазу отделяют и маслообразную фазу выпаривают досуха при пониженном давлении в эксикаторе с получением 45 мг мас-лообразного продукта.

Продукт хроматографируют на силикагеле со смешанным растворителем этилацетат-циклогексан в соотношении 10:50 по объему для очистки продукта. Очи11 1001860 12 щенный продукт имеет вязкость масло- лапку мыши (5 недельный возраст) для образного соединения. образования твердых опухолей. Через

В ИК-спектре полосы поглощения 24 ч после имплантации раствор ак3200-3600 см не обнаружено. В ре-1 тивного ингредиента вводят подкожно зультате подтверждено, что продуктом S или орально мышам каждый день в теявляется З-бензоилокси-1,3,5(10)- чение 10 дней, Через двадцать пять

-эстратриен-17$ -t 4-(n-pt.ac- 2-хлор- дней после имплантации опухоли выэтил) амино1фенил)бутирилокси 1-ацетат. Резают. Эффективность ингиГирования

Испытание, токсичности и антиопу- опухоли измеряют для каждой среднехолевой активности (in чi vo) произ- 1 весовой опухоли для 10 мышей (активный инводных хлорамбуцила. гредиент введен)и каждой средневесовой токсичность (LD . ) . В измеРениЯх опУхоли длЯ 10 контРольных мышей.

LD более 90 . При введении производных после 7 дней получают для них величи- изобретения все мыши остались живы. ны LCyg графическим методом. Резуль- После введения хлорамбуцила в таты Ы хлорамбуцила составляют для наблюдениях после вскрытия обнаруинтраперитональной инъекции жены сильные изменения селезенки, мг/кг, орального введения 80 мг/кг матки и тимуса, в то время как после и подкожного введения 26 мг/кг. введения предлагаемых образцов измеРнтмопухолевое испытание (in vivo). нения не обнаружены.

Образцы раковых клеток груди чело- Формула изобретения века, имеющих стероидные гормональные 1, Способ получения производных рецепторы, подкожно имплантируют в 30 хлорамбуцила формулы 1 где R - водород или ацильная Груп- 4g отличающийся тем, что эстрадиол или его ацилированное про50 изводное по 17 положению подвергают взаимодействию со связывающим агентом — монобромуксусной кислотой или монобромацетилбромидом в присутствии органического растворителя, затем модифицированный эстрадиол или его ацилированное производное подвергают взаимодействию с карбоксильной группой хлорамбуцила в органическом растворителе с последующим выделением целевдго продукта.

2. Способ получения производных хлорамбуцила формулы 1

О О

II

Рб Ф -C-dзн7

Составитель Л. Иоффе

Редактор А. Фролова Техред.Т.Фанта Корректор И. Шулла

Заказ 1463/78 Тираж 385 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Рауаская наб., д. 4/5 филиал ППП "Патент", r. Ужгород, ул. Проектная, 4

13 10 где Р. - водород или ацильная группаотличающийся тем, что хлорамбуцил подвергают взаимодействию по карбоксиатной группе со связующим агентом - монобромуксусной кислотой или монобромацетилбромидом в

0186О 14 присутствии органического растворителя, затем модифицированный хлорамбуцил подвергают взаимодействию с гидроксильной группой в 17 положении эстрадиола или его ацилированного производного в органическом растворителе с последующим выделением целевого продукта.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Патент СССР И 379088, кл. С 07 J 1/00, опублик. 1974, выданный инофирме Сандос АГ, Швейцария.

2. Иашковский Н. Д. Лекарственные средства. Т. 2, 1972, с. 485.