Способ получения очищенного и адсорбированного на гидроокись алюминия дифтерийного анатоксина

Способ получения очищенного и адсорбированного на гидроокись алюминия дифтерийного анатоксина

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

№ 100668

Класс 3011, б

ССС Р опиоьние изовеетеиия—

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Н, И. Апанащенко, Е. И. Нехотенова и А. Н. Помянкевич

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ОЧИЩЕННОГО И АДСОРБИРОВАННОГО

НА ГИДРООКИСИ АЛЮМИНИЯ ДИФТЕРИЙНОГО АНАТОКСИНА

Заявлено 24 февраля 1954 г. за № 102/13-1256/449909 в Министерство здравоохранения СССР

Предметом изобретения является способ получения очищенного концентрированного дифтерийного анатоксина, адсорбированного на гидро окиси алюминия.

Предлагаемый способ позволяет получать дифтерийный анатоксин для целей профилактической иммунизации против дифтерита, содержащий 60 АЕ в 1 мл и на 97 — 99% очищенный от балластных азотистых веществ питательной среды.

Способ этот заключается в том, что обычный анатоксин осаждают

".îëÿíîé кислотэй при pH=3,8 — 3,9.

Образующийся при этом осадок отделяют и растворяют в боратно-бу:ферном растворе. Затем добавлением активированного угля освобождают раствор от пигментов и центрифугируют. После этого анатоксин адсорбируют на гидрат окиси алюминия, добавляемый в количестве 0,25 /, от анатоксина, выпадающий осадок дважды декантируют и промывают физиологическим раствором. Далее добавляют 0,25 /o карболовой кислоты и получают готовый препарат с активностью не менее 60 АЕ в 1 лл.

Способ осуществляется следующим образом.

Подлежащий осаждению анатоксин наливают в фарфоровый или стеклянный сосуд соответствующего объема (с учетом вспенивания после добавления соляной кислоты), К анатоксину добавляют нормальный раствор соляной кислоты.

Добавление соляной кислоты к анатоксину производят медленно, при тщательном перемешивании.

Подкисленный до pH=3,8 — 3,9 анатоксин разливают в стерильные бутыли, из которых при помощи сифона подают в сепаратор или на центрифугу для отделения осадка.

Осадок растворяют в стерильном боратно-буферном растворе, взятом в количестве 1/10 первоначального объема анатоксина. Определяют его титр, Титр анатоксина доводят стерильной дистиллированной водой до

100 †1 АЕ.

К полученному концентрированному дифтерийному анатоксину с титром не выше 120 AE прибавляют

0,5 ", „акти ви ров а нного угля. Смесь тщательно перемешивают в течение

5 мин., после чего отделяют на сепараторе или центрифуге уголь. Ту часть дифтерийного анатоксина, которая остается в сепараторе, переносят на Бюхнеровскую воронку и фильтруют под вакуумом. При отсут ствии сепаратора уголь отделяют на

Бюхнеровской воронке с толстой фильтровальной бумагой.

¹ 100668

Отв. реаакт гр И. В. Макаров

Л!05014 от 23,1955 г. Стаяаарттиз. Объем О,!25 и. гк Тир, 400. Цена 25 коп.

Типография изт-ва «Московская правда», Потаповский пер., 3. Зак. 2585. После обработки углем вновь определяют титр анатоксина, который доводят добавлением дистиллирован ной воды до 80 АЕ. Очищенный от пигмента анатоксин фильтруют через свечи или фильтр Зейтца или Сальникова. Перед фильтрацией добавля1от 0,5% поваренной соли. После фильтрации определяют титр полученного анатоксина, подсчитывают его выход в AE и проверяют стерильность и безвредность на кроликах.

Проверенный на стерильность и безвредность анатоксин адсорбируют на гидроокиси алюминия. Для этого к анатоксину через сифон при непрерывном встряхивании добавляют суспензию гидрата окиси алюминия. в таком количестве, чтобы в готовом препарате было 0,25:- 0,005% гидроокиси алюминия. Затем бутыль с адсорбированным анатоксином тщательно встряхивают в течение 3—

5 мин. и оставляют при температуре

6 — 7 до следующего дня.

Спустя 18 — 20 час. производят двухкратную промывку адсорбированного анатоксина стерильным физиологическим раствором. Для этого осторожно, при помощи сифона, декантируют прозрачную часть. После удаления жидкости к осадку добавляют через сифон стерильный физиологический раствор. Бутыль хорошо встряхивают и оставляют при температуре 6 — 7 до следующего дня, после чего жидкость сифонируют, к осадку вторично добавляют физиологический раствор до первоначального объема и оставляют на 24 часа при температуре 6 — 7, после чего снова декантируют. К отмытому осадку добавляют физиологический раствор с 0,25% карболовой кислоты до первоначального объема. Готовый препарат имеет активность не менее

60 AE.

Предмет изобретения . 1. Способ получения очищенного и адсорбированного на гидроокиси алюминия дифтерийного анатоксина, отличающийся тем, что обычный анатоксин осаждают соляной кислотой при pH=3,8 — 3,9, образующийся осадок отделяют сепарированием или центрифугированием и растворяют в боратно-буферном растворе, взятом в количестве 1/10 от первоначального объема анатоксина, освобождают от пигментов добавлением активированного угля с последующим центрифугированием, после чего анатоксин адсорбируют на гидрат окиси алюминия, добавляемый в количестве 0,25%, выпадающий осадок дважды промывают физиологическим раствором, затем добавля от

0,25% карооловой кислоты.