Способ идентификации вирусов

Способ идентификации вирусов

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

СПСХЮБ ИЫДЕНТИФИКАЦИИ ВИРУСОВ, включающий инкубирование стафилококков со стандартной сывороткой с последующим добавлением к полученному диагност1куму исследуй« ого вируса и повторным инкубированием полученной смеси, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа , стафилококки инкубируют совместно со стандартной и индикаторной сыворотками , взятыми в соотношении 1:1, после ин1дгбирования диагностикума с исследуемым вирусом добавляют индикаторный вирус и идентифицируют исследуемый вирус по количеству несвязавшегося индикаторного вируса. (Л

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИН

09) (И) 244 (д) С 12 К 7/00

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ABTOPCHOMV СВИДЕТЕЛЬСТВУ

@@4kQ й3, ;.

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

IlO ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3304211/28-13 (22 ) 19.06.81 (46) 30.03.83. Бкд. М 12 (72) О. А. Аксенов, И. Л. Коган, В. А. Евграфов, С. Л. Хазенсон и В. С. Авраменко (71) Ленинградский ордена "Знак Почета" научно-исследовательский институт детских инфекций (53) Ь 616-07(088.8) (56) 1. Horowitz B., Moods K.R.

Development оФ hemaglutinat ion assays

1.Ahachment of antibody to stabil izied erithrocytes. Vox Sand, 1977, с.33, и б, р.324-334.

2. Еа1ап Е., Milson С. А new method for rapid identification of influenza ч1rus isolates. - "Canadian

Nedical association Journal", 1976, ч.115, р.1002-1003 (прототип). (54)(57) СПОСОБ ИНДЕНТИФИКАЦИИ

ВИРУСОВ, включающий инкубирование ста. филококков со стандартной сывороткой с последующим добавлением к полученно: му диагностгкуму.исследуемого вируса и повторным инкубированием полученной смеси, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа, стафилококки инкубируют совместно со стандартной и индикаторной сыворотками, взятыми в соотношении 1:1, после . инкубирования диагностикума с исследуемым вирусом добавляют индикаторный вирус и идентифицируют исследуемый вирус по количеству несвяэавшегося индикаторного вируса.

244 2 трехкратном объеме ФБР и к осадку добавляют 1,0 мл индикаторного вируса с титром не менее 256 ГАЕ, Через 20 мин контакта при комнатной температуре смесь цеитрифугируют и определяют остаточный гемагглютинирующий титр в надосадочной жидкости. Наличие искомого вируса оценивают по разнице остаточной активности индикаторного вируса в опыте и контроле.

Пример 1. Две пробы биологической жидкости исследуются на наличие вируса гриппа В. Les этого использован стафилококковый диагностикум с антителами к вирусам гриппа В и А1. Для адсорбции использованы гипериммунные кроличьи сыворотки с титрами антител к вирусу А1 и В 1:10240 и 1:640 соответственно. Лля соединения со стафилококком сыворотки взяты в разведении

1:100 и 1:5 соответственно с целью получения равной антивирусной активности (102 и 108 единиц).

После соединения диагностикума с пробой N 1 и наслоения индикаторного вируса А1 (с активностью 204В ГАЕ/

/0,2 мл) остаточный титр его в надо— свдочной жидкости 204В ГАЕ/0,2 мл.

В контрольной пробе (диагностикум с индикаторным вирусом) оста точная активность последнего составляет 32 ГАЕ/

/ 0,2 мл так, как в опыте не произошло снижение титра исследуемой жидкости со. держится вирус гриппа В.

Пример 2. При постановке опы .. та с пробой биологической жидкости М 2 остаточная активность индикаторного вируса составляет 32 ГАЕ/0,2 мл, как и в контроле. Значит не произошло перекрытие активных центров антител к индикаторному вирусу. и следует,. сделать вывод об отсутствии в данной пробе вируса гриппа B. При дополнительном исследовании пробы Л" 2 в ней обнаружен вирус парагриппа 1-ro типа.

Использование способа позволяет значительно повысить точность идентификации, так как для большинства гемагглютинирующих вирусов распираторной групйы базовый способ выявляет не менее 64 гемагглютинируюших доэ вируса, а предлагаемый обнаруживает 0,5-0,25 гемагглютинируюшей дозы. Для вирусов, не обладающих гемагглютинацией, сохраняется аналогичное соотношение s перерасчете на тканевые цитопатогенные дозы.

1 1008

Изобретение относится к вирусологии, и касается идентификации вирусов в раз,личных биологических жидкостях.

Известен способ идентификации вирусов с помощью эритроцитов, сенсибилиэированных антител&ми 1 ° .

Известен способ иденгификации вирусов, включающий инкубирование ствфилококков со стандартной сывороткой с последующим добавлением к полученному 10 диагностикуму исследуемого вируса и повторным инкубированием полученной сме« си, и по агглютинации стафилококков определяют наличие вируса, идентичного спепифическим антителом (2) .

1$

Однако известные способы не обесI печивают высокой точности.

Бель изобретения — повышение точности способа.

Поставленная цель достигается тем,. р0 что в способе идентификации вирусов, включающем инкубирование стафилококков со стандартной сывороткой с последуюшпм добавлением к полученному диагнос тикуму исследуемого вируса и повторным 2S инкубированием полученной смеси, стафилококки инкубируют совместно со стан .дартной и индикаторной сыворотками,взятыми в соотношении 1:1, после инкубироввния диагностикума с исследуемым ви- Э0 русом добавляют индикаторный вирус и идентифицируют исследуемый вирус по количеству несвязавшенося индикаторного вируса.

Способ осуществляют следующим образом.

10%ная взвесь золотистого стафилококка штамм COWoll 1 инактивированная, 0,5%-ным формвльдегидом, соединяется гипериммунными сыворотками против двух видов вирусов в соотношении 1:1 (по однотипным реакциям).

После 45 мин контакта сывороток со стафилококком при комнатной температуре диагностикум дважды отмывают в трехтном объеме фосфатного буферного раствора (ФБР) рН = 7,2-7,4 с центрифугированием при 1500 об./мин, в течение 15 мин.,Пля работы используется

10%-ная взвесь полученного стафилококко

sore диагностикумв в ФБР, 0,5 мл диаг- 50 иостикума и 0,5 мл исследуемой биологической жидкости соединяют и инкубируют в гечение 20 мин при комнатной температуре, осаждают при 1500 об./мии в течение 15 мин, дважды отмывают в 53

ВНИИПИ Заказ 2272/35 Тираж 521. Подписное

Филиал ППП "Патент, r. Ужгород, ул. Проектная, 4