Способ определения цитотоксичности пыли

Способ определения цитотоксичности пыли

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

СПОСОБ СШРЕДНЛЕНИЯ ШТОТОКСИЧНОСТИ ПЫЛИ путем исследования действия про пыли ва клетки крови, отличающийся тем, . что, с целью ускорения и ловышення точности способа, к смеси пыпн н лейкоцитов добавляют люминол, нзмеряктг н тенсивность хемнлюминесценшга и по ее 1величине определяют цитотоксичность пыли. .

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

09) (И) 5 1 А

3 р G 01 H 33/48

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н АВТОРСКОМ .К СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЬПЪЙ (21) 3311 708/28-13 (22) 02.07.81

;(46) 07.04.:83. Вкала. М 13 (72) Б. Т. Величковский, Ю. А. Владимиров, Л. Г. Коркина и Т. Б. Суслова (71) 2-й Московский ордена Ленина государственный медицинский институт им..Н. И. Пирогова (53) 576.345 (088.8) (56) 1. Методические рекомендации, М., МЗ РСФСР,. 1979, с. .7-9 (rrpmo- . тип) . (54) (57) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕКИЯ ЦИ

ТОТОКСИЧНОСТИ ПЫЛИ путем исследо-вания действия пробы пыли йа клетки крови, о т л и ч а ю щ s и с я тем, . . что, с целью ускорения и повышения .:точности способа, к смеси пыли.и лейкоцитов добавляют люминол, иэмеряуот интенсивность хемилкминесценции и по ее величине определяют цнтотоксичность пыли.

1010561

50 ль Е. Житникова аточка Корректор И. Шулла

Заказ 2482/35 Тираж 871 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делал изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал Г!ПП "Патент", г. Ужгород, уп. Проектная, 4

Способ относичся к гигиене и может, быть применен в целях гигиенического нормирования предельно допустимых концентраций промышленный пылей, а также в целях профилактики профессиональных пылевых заболеваний легких.

Известе. способ определения цитотоксичности пыли путем исследования действия пробы пыли на клетки крови(1).

Недостатками известного способа являются длительноств проведения ана- лиза, неспецифичность взаимодействия зритроцитов с инородными частицами, из-за чего точность анализа определения цитотоксичесих свойств пыли невелика.

Цель изобретения — ускорение и повышение точности способа.

Указанная цель достигается тем, что в способе определения цитотоксичности. пыли путем исследования действия пробы пыли на клетки крови отличительной особенностью является то, что к смеси пыли и лейкоцитов добавляют люминол, измеряют интенсивность хемилюминесценпии и по ее величине определя|от цитотоксичность пыли.

Способ осушествляют с ледуюшим образом.

Гепаринизированную кровь наслаивают на градиент фиколла- верографина плоч ностью 1,068 и центрифугируют. при

1500 об/мин в течение 40 мин. После центрифугирования лейкоциты собирают с интерфазы, промывают один раз 0,9%-м раствором хлористого натрия (pH 7,4) .

Окончательно клетки суспендируют в этом жо растворе в кokIIIekIEpапии 1,52 ° 10 клеток/мл, определяют их жизне.способность в тесте с трипановым синим. Суспензию выделенных лейкоцитов хранят B силиконированной посуде на льду в течение 3-4 ч, при этом жизнеспособность клеток сохраняется. Среда для хемилюминесцентных измерений со-4 держит 5,5. 10 М люминола. Суспензию клеток, взвесь пыли в физиологическом растворе вводят в измерительную о термостатированную при 37 С кювету непосредственно во время измерений в определенной последовательности.

Coc т авите

Редактор В. Пилипенко Техред Т.М

5 !

О

\0

2

Пример . 2 мл гепаринизированной крови наслаивают на градиент фиколла-верографина, центрифугируют при

1500 об/мин в течение 40 мин. После центрифугирования собранные лейкоциты однократно промывают 0,9% раствором хлористого натрия. Отмытые клетки суспендируют в 0,9% растворе хлористого натрия. Так, чтобы концентрация клеток в. суспензии составляла 2,5 °

° 10 мл . Затем 0 1 мл полученной клев т точной суспензии вводят в измерительную кювету хемилюминометра. Предварительно кювету заполняют 2 мл раствора, содержащего МОС 0,9%у глюкозы

- 5 мМ,hhg С8 2,5 мМ и люминога

0,065 мМ. Раствор в кювете термостатируется при 37 С и перемешивается.

Закрывают кювету хемилюминометра светоизолирующим кожухом, подают на фотоэлектронный умножитель напряжение

640 B и непрерывно в течение 10-.

15 мин измеряют интенсивность хемилюминесценции клеточной суспензии интенсивность такой спонтанной ХЛ составляет 10-15 отн. ед. Через 5 мин после начала измерений через специальную трубку, не нарушая светоизоляции в кювете, вводят в нее 0,2 мл взвеси пылевых частиц Люберецкого кварца в физиологическом растворе. Через 20-30 с наблюдают быстрое увеличение интенсивности хемилюминесценции, которая достигает максимума через 1 мин. Величина максимальной интенсивности свечения составляет 190-210 отн. ед. Пылевые частицы Люберецкого кварца обладают высокой цитотоксичностью. Если в кювету вместо Люберецкого кварца ввести пыль малоцитотоксичную, например лунный грунт, то максймальная интенсив ность свечений составит только 1 5-18 отн. ед.

Таким образом, предлагаемый способ обеспечивает быстрое (за 10-15 мин) проведение анализа и его высокую точность (100%-ое совпадение с результатами морфологических, биохимических и других исследований цитотоксичности образцов).