Питательная среда для выращивания культур клеток животных

Питательная среда для выращивания культур клеток животных

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИН (19) (11) 3(51) С 12 N 1/00

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

0,25-0,30

5 -1О

Остальное е

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3354405/30-15 .(22) 30. 10 ° 81 (46) 30.06 83. Бюл. И 24 (72) Г.Е. Панкова, В.А. Сергеев, Л.П. Дьяконов, Д. Ф. Осидзе, А.П. Простяков, Н.Д. Скичко, В.И. Жестерев, С.П. Сергеева и А.А. Коломыцев (71) Всесоюзный научно-исследовательский институт ветеринарной вирусологии и микробиологии, Всесоюзный ордена Трудового Красного Знамени государственный научно-контрольный институт ветеринарных препаратов и

Всесоюзный ордена Ленина научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии им. P.ß. Ковален-. ко (53) 578.095.23 (088.8) (56) 1. Сергеев В.А. Репродукция и выращивание вирусов животных.

1976, с. 55-59.

2.Там же, с. 60. (54)(57) ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ВЫРАЩИВАНИЯ КУЛЬТУР КЛЕТОК ЖИВОТНЫХ, включающая гидролизат белка, солевой раствор и сыворотку крови, о т л ич а ю щ а я с я тем, что, с целью удешевления и повышения эффективности использования среды, в качестве гидролизата белков используют сухой ферментативный гидролизат белков мышц йри следующем соотношении компонен.тов, (,:

Сухой ферментативный гидролизат белков мышц

Сыворотка крови

Солевой раствор

1 10

Изобретение относится к ветеринарной вирусологии, в частности к оптимизации способов выращивания культуры ткани.

Известна серия синтетических пи, тательных средств 7С, в которых со" отношение аминокислот сбалансировано подобно животным тканям (1) .Недостатками этой среды являются сложность и трудоемкость ее приготов ления.

Наиболее близкой к предлагаемой является среда с ферментативным гидролизатом лактальбумина ГЛА f2).

Однако, в связи с тем, что ГЛА изготавливается фирмой Дифко (СВА) и импортируется в СССР, резко возрастает стоимость вирусных вакцин и других препаратов, сырьем для которых является ГЛА.

Цель изобретения - удешевление питательной среды и повышение эффективности ее использования.

Указанная цель достигается тем, что в качестве гидролизата белков используют сухой ферментативный гидролизат белков мышц при следующем соотношейии компонентов, 3:

Сухой ферментативный гидролизат белков мышц 0,25-0,30

Сыворотка крови 5 -10

Солевой раствор Остальное

Сухой ферментативный гидролизат белков мышц ФГМ-C) получают в резуль тате глубокого ферментативного гидролиза мышечной ткани крупного рогатого скота или свиней. Глубина гидролиза (коэффициент протеолиза составляет 0,9-1,0) достигается в результате тщательного измельчения мышечной ткани и поджелудочной железы на коллоидной мельнице. В качестве протеолитического фермента вместо подже- лудочной железы может быть использован панкреатин с активностью 45 ед.

По завершении гидролиза проводят осаждение высокомолекулярных соединений в изоэлектрической точке, препарат фильтруют и высушивают. ФГМ-С содержит не менее 18 аминокислот, в том числе все незаменимые, суммарное количество которых составляет 63-693, что в 1,2- 1,5 раза превышает их содер жание в ГЛА.

Содержание аминокислот в сухих

ФГМ-С и IllA приведено в табл. 1.

25722 2

Питательную среду с ФГМ-С (0,1; 0,.54) готовят на сбалансированном солевом растворе (например, Хенкса или

Эрла), стерилиэуют и проверяют ее ростовые свойства при выращивании перевиваемых клетОк почки поросят (ПП) в течение 3 последовательных пассажей, оценивая рост клеток через

Зи7дн.

10 Содержание ФГМ-С в питательной среде и характеристика роста в ней монослойной культуры .перевиваемых клеток ПП приведены в табл. 2.

Рабочая концентрация ФГМ-С 0,250,301.

Клетки культивируют также в среде с 0,5/ ГЛА или в среде Игла, модифицированной для выращивания клеток

20 ВНК-21. При одинаковой Посевной концентрации рост всех испытанных клеток в средах с ФГМ-С и ГЛА одинаков, сро" ки формирования монослоя и его сохранения одни и те же. Перевиваемые

25 клетки, выращенные в предлагаемой среде, сохраняют первоначальную морфологию и ростовые . свойства.

Среда с ФГМ-С может быть также

30 использована для длительного серийного выращивания перевиваемых линий клеток. Серийное пассирование перевиваемых клеток в новой среде требует предварительной адаптации.

8се испытанные клеточные системы (первичные и перевиваемые) сохраняют чувствительность к вирусам ящура, чумы, птиц, диареи крупного скота, 40 болезни Ауески, Ньюкасла и Тешена.

Показатели чувствительности клеток, выращиваемых в средах с ФГМ-C (0,25 ) и ГЛА (0,5Ж), к вирусам животных приведены в табл. 3.

45 . Замена в составе питательных сред импортного ГЛА на отечественный

ФГМ-С удешевляет стоимость питательных сред и производимых биопрепаратов, изготовление которых основано на

50 применении метода культуры тканей.

Изготовление ФГМ-С не требует сложного оборудования и может про.водиться на предприятиях биологической промышленности.

1025722

Аминокислоты

ГЛА

ФГИ-С

4,8-5,3

Следы

7,0-7,1

3,7-3,8

2 5

Следы

2,4

1,7

:3 3-3,5

Лейцин

7,3

Лизин

3,6

Метионин

Фенилаланин

2 3

Треонин

2,0

Триптофан

2, 0".2,: I

1,5

Тирозин

Валин

4,3

2,7

Серии

1,8

Пролин

2,0

Аланин

2,7

1,0. Глицин

45,5

Аргинин

Цистин (цистеин)

Глутаминовая кислота

Гистидин

Изолейцин

Аспарагиновая кислота

06цее содержание аминокислот

Содержание, Ф в

6 3-6,4

7,4-7,7

2,1-2,6

3, 1- 3,:7

3,2:3,:9

2 5 2;7

3,4-3,7

2,8-3,1

2,8-3,1

2,8-3,1

4,0-4,2

1,7-1,8

62,9-68,8

Таблица1 "5

1025722

Т а б л и ц а 2 е

Характеристика роста клеток ПП в среде с содержанием

Оценка роста клеток через, дн

0 53 ФГМ-С+99,53 ! солевого раствора

Оi254 ФГИ-С+99 75ь солевого раствора

0,13 ФГИ-C+99,9 солевого раствора

Ионослой

Частичный или полный монослой

Ионослой, начало деструкции

Ионослой

Частичная или полная деструкция монослоя

Монослой, начало деструкции

Т а б л и ц а 3

Тип вируса (1g ТЦД

Культура клеток диареи

KPC болезни

Ньюкасла болезни

Тешена болезни

Ауески сощура чумы птиц

7,4(6,7)

6,9(6,9) 7,1(7,2)

7,3(6 9) 7,1(?,2/

6,9(7,0)

6,9(7 0J

7,0 (?,0) 4,8(4,8) ПТ

ПЭТ

7,5(7,5) ПС

ПЭС

ЛеТ

ЛеС

7,4(7,?) 7,6(7,7) 5,3(5 2) КЭ

8,25(?,75/7,25(7,25) ПТ

Составитель Т. Чечеватова

Редактор А. Огар Гехред И. Гергель Корректор О. Билак

Заказ 4497/20 Тираж 523 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

ФилиаФ ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4 е 4ю

П р и м е ч а н и е . Первые цифры - титры вируса, полученные при использовании среды с ФГИ-С, в скобках даны, титры вируса при использовании среды с ГЛА.