Способ получения гепарина

Способ получения гепарина

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ГЕПАРИНА путем обработки животного сырья раствором поваренной соли с последующим его выделением известным путем,о т л и чающийся тем, что, с целью повышения чистоггы целевого продукта и упрощения способа, в качестве сырья используют освобожденные от слизи кишки.и обработку проводят твердой поваре;нной солью нли ее раст вором в нейтральной, среде при 1625 С .

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

PECOYSllHH (19) (1!) 3(5D A 6 1 К 31 7 2 5

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ПАТЕНТУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 2531003/28-13 (22) 19,10.77 (31) Р 2652272.5 (32) 12.11.76 (33) ФРГ (46) 07.07.83. Бюл. В 25 (72)Ханс-Ерг Видик (ФРГ) (71) Шеринг АГ (ФРГ) (53) 615.45:615.34(088.8) (56) 1. "Мясная индустрия СССР", 1963, В 4, с. 21-22. (54) (57) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ГЕПАРИНА путем обработки животного сырья раствором поваренной соли.с последующим его выделением известным путем,о т л и— ч а ю шийся тем, что, с целью повышения чистоты целевого продукта и упрощения способа, в качестве сырья используют освобожденные от слизи кишки и обработку проводят твердой поваренной солью или ее раствором в нейтральной. среде при 1625 С.

1028237

35 выделяют как в примере 3 и перера40 . батывают далее. Получают 796 мл ро45 рН 3,2 (около 50 мл). Через несколько часов выделяется осадок, котбрый после декантации прозрачной

Изобретение относится к медицинс кой промышленности и касается производства гепарина, который используется в медицине в качестве антикоагулирующего средства.

Известен способ получения герарина путем обработки животного сырья раствором поваренной соли с последующим его выделением известным путем f1).

Однако известный способ трудоемкйй, длительный и не обеспечивает высокой чистоты целевого продукта.

Цель изобретения - повышение чис" таты целевого продукта и упрощение способа.

Цель достигается тем, что при осуществлении способа получения гепарина путем обработки животного сырья раствором поваренной соли с последующим его выделением известным путем, в качестве сырья испольэуют освобожденные от слизи кишки и обработку проводят твердой поваренной солью -или ее раствором в нейтральной среде при 16-25ОС, С целью консервирования и обезвоживания кишок животных особенно пригодны растворы поватжнной соли с содержанием ее от 0,5 Ni до количества молей насыщения предпочтительно от 3 моль до количества молей насыщения. Под количеством молей насыщения подразумевается количество молей, которое содержит концентрированный водный раствор при комнатной температуре (резки на скотобойне) растворенной поваренной соли. Концентрированный водный раствор поваренной соли является пример-, но 26,4%-ным,его получают путем посыпания кишок животных поваренной солью.

Кишки животных после удаления слизи обрабатывают от 2 ч до 3 дней растворами поваренной соли. В боль- шинстве случаев обработка кишок животных завершается уже через 3- 24 ч .

После удаления консервированных и обезноженных кишок животных из раст. вора поваренной соли получают кишечный рассол, обладающий высоким ,содержанием гепарина.

Пример . 1. В 1500-литровой мешалке перемешивают в течение полу- часа при комнатной температуре

600 л рассола с 600 л метанола.

Затем продолжают перемешивание еще полчаса и оставляют на 1 ч. Затем (декантируют верхнюю жидкость во второй сосуд и дают выпасть осадку соли..Полученную суспензию оставляют на 2 дня. После этого снова декантируют, верхнюю жидкость выб-. расывают и осадок отделяют центрифугированиемс После сушки в вакууме получают 1,68 кг продукта, имею:

30 щего активность 11 USP-ед/мг. Он содержит еще около 60% поваренной соли.

Пример 2. 3 л рассола под-кисляют при перемешивании уксусной кислотой до рН 3,1-3,2 (около 50 мл).

Через несколько часов декантируют и остаток центрифугируют. Осадок выбрасывают и очищенные растворы нейтрализуют едким натрием и затем медленно при перемешивании смешивают с выпавшей поваренной солью. Эту суспензию оставляют на несколько часов, декантируют верхнюю жидкость и центрифугируют осадок, Осадок высушивают в вакууме и получают

3,76 r продукта с активностью

23 USP-ед/мг.

Пример 3. 3 л рассола разбавляют 14 л воды. Затем добавляют

50 r кизельгура и раствор 7 г безетониум хлорида в 100 мл воды.

Через несколько часов жидкость декантируют и остаток отсасывают.

После промывки водой еще влажный осадок экстрагируют три раза 200 мл

2 М раствора поваренной соли. Объединенные экстракты осалсцают 2 об.ч. метанола. Выделенный и высушенный остаток весит 560 мг и имеет активность 163 БЯР«ед/мг.

Пример 4. 3 л рассола доводят до рН 3,1-3,2 добавлением уксус ной кислоты при первмешивании. Через несколько часов раствор декантируют и остаток центрифугируют.

Объединенные растворы разбавляют водой до 15,5 л и добавляют 40 r кизельгура и 7 г бензентониум хлорида. Чере э несколько часов осадок,дукта с активностью 105;USPea/мг.

H p и м е р 5 ° 3 ;„и рассола разбавляют 13 л воды. Затем раствор подкисляют уксусной кислотой до жидкости центрифугируют„ После суш ки получают 16,6 г неочищенного гепарина с активностью 5,5 USP-ед/мг.

Пример 6. 10 л рассола разбавляют 50 л воды. Раствор пропускают с пом9щью насоса через фильтр в виде ионообменной колонки диаметром 26 мм и длиной 380 мм (около 3 л/ч). Применяют ионообменную микропористую смолу средней основности в хлорированной форме (леватит CA 9249) . Могут также применяться другие анионообменные смолы, например смола Довекс 1-Х-1.

Затем смолу удаляют из колонки, промывают 2 раза 500 мл 0,9 М раствора поваренной соли и. элюируют

400 мл 2 М раствора поваренной соли 5 ч при 40 С и перемешивании.

1028237

Этот раствор осаждают 1,5 ч объема метанола. Выделенный и высушенный осадок весит 1,5 r и имеет активность 152 USP- ед/мг.

П р g м е р 7. Аликвоту неочищенного гепарина из примера 1, соот. ветствующей активностью 425 OGUSP ep/мг или 38,65 г, экстрагируют

3 раза 200 мл 2 М раствора поваренной соли, причем каждый раз t доводят до 60 С. Объединенные экстракты разбавляют водой до содержания в растворе хлорионов 0,9 моль/л. Затем добавляют 200 мп аннонообменной смолы леватит CA 9249 в хлорированной форме и перемешивают 1 ч. 15

Смолу отсасывают и промывают 200 мл

0,9 М раствора поваренной соли. После этого ионообменную смолу элюируют 5 ч 2 M раствором поваренной соли при 40 С, отсасывают и промывают 2 М раствором поваренной соли.

Элюированный раствор объединяют с промывным раствором и осаждают

1,5 объемом метанола. Осадок центрифугируют, сначала промывают 50 мл 25 водного метанола (1:1,5 по объему) и получают 1,91 г генарината натрия с активностью 102 USP--ед/мг.

Пример 8. 15 r полученного согласно примеру 7 гепарината нат- З0 рия с активностью 200 ИЯР-ед/мг растворяют B 200 мл 2 М раствора поваренной соли. Раствор, отсасывают на нутче и остаток сначала промывают 30 мл 2 M раствора поваренной со- 35 ли и затем 250 мл полностью абессоленной воды. Объединенные растворы полностью обессоленной водой доводят до молярности 0,9 (по хлорид- ., иону) Затем аналогично примеру 7, очистку повторяют с 1 л леватита 40 . CA 9249.

Объединенный элюат и промывной раствор перерабатывают как указано.

После промывки и сушки осадка получают 11,1 r гепарината натрия 45 с активностью 254 USP"åä/мг.

Пример 9. 600 л рассола обрабатывают 600 л метанола в реакторе с мешалкой вместимостью

1500 л при перемешивании при комнат- 50 ной температуре в течение получаса.

Перемешивают еще в течение получаса, после чего смесь выдерживают примерно 1 ч.

Декантируют верхний мутный слой во вторую емкость и выпавший солевой остаток сливают обратно. Полученную суспензию выдерживают два дня. Затем ее снова декантируют, верхний отстой отбрасывают и оста- 60 ток отделяют центрифугированием.

После сушки под разрежением получают 1,44 м кг продукта, обладающего активностью около 10 CUSP-ед/мг..

Продукт еще содержит примерно 45% поваренной соли. Лликвотное количество полученного таким образом неочищенного гепарина (соответственно около 425000 )05Р-ед или 42,5 г) трижды экстрагируют, каждый раз применяя по 200 мл 2 М раствора поваренной соли, причем по мере надобности перемешивают 1 ч, при 60 С.

Объединенные экстракты. разбавляют водой до тех пор, пока раствор не будет содержать около 0,9 моль/л ионов хлорида. Затем прибавляют

200 мл анионообменной сЛЬлы1,еюоОФ

CA 9249) в форме хлорида и перемешивают 1 ч. Затем отфильтровывают под разрежением и проьывают примерно 200 мл 0,9 М раствора поваренной соли. Ионообменную смолу затем перемешивают 5 ч с 2 M раствором поваренной соли при 40 С, отфильтровывают под разрежением и промывают 2 И раствором поваренной соли. Вымываемый раствор объединяют с промывочной водой и высаждают 1,5-кратным объемом метанола.

Остаток отделяют на центрифуге, сначала промывают примерно 50 мл воды — метанола (1+1,5 об.ч), затем примерно 50 мл метанола и высушивают.

Получают 198 r Na-гепарината с

195 OSP-ед/мг. 15,5 г гепарината натрИя (200 ед, ОБР/мг), полученно го указанным спосОбом, растворяют . в 200 мл 2 М раствора поваренной соли ..

Раствор отсасывают через нутч-фильТр и остаток промывают сначала 300 мл

2 М раствора поваренной соли, затем примерно 250 мл полностью деминера» лизованной воды до молярности хлорид-иона . 0,9. Повторяют очистку действием 1 л Lewatit CA 9249 сбгласно описанному. . Объединенные вымываемый и промЫвочный раствор обрабатывают согласно описанному. После промывки и сушки осадок содержит 11,2 г гепарината натрия, обладающего активностью

251 ЮР-ед/мг.

Пример 10. 30 л рассола разбавляют 120 л воды до молярности хлорида около 0,85 М, затем подкисляют уксусной кислотой (около 50 мл) до рН 3,2. Через несколько часов выпадает остаток, который отделяют центрифугированием после декантации прозрачного верхнего отстоя. После сушки получают 111 г- неочищенного гепарина активностью 6,5 ОЫР-ед/мг.

Аликвотное количество полученного та-. ким образом неочищенного гепарина (соответственно около 425000IUSP-ед или 65,5 г) очищают сначала аналогично примеру 1.

После первой стадии очистки через ионообменную смолу получают

196 г гепарината натрия с 198 att

1028237

Составитель С. Малютина

Редактор О. Колесникова Техред И.Гайду Корректор Г. Огар

Заказ 47б1/61 Тираж 713 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП "Патент", r. Ужгород, ул. Проектная, 4 USP/ìã. 15 r гепарината натрия, полученного описанным способом, активностью около 200 ед OSP/мг растворяют в 200 мл 2 M раствора хлорида кальция. Раствор отделяют фильтрацией через нутч-фильтр и остаток промывают сначала 30 мл 2 н, раствора хлористого кальция, затем примерно 250 мл полностью деминералиэованной воды. Объединенные растворы промывают полностью деминира- 30 лизованной воды до молярности хлорида 0,9. Согласно описанному перемешивают с 1 л Lewatit СЛ 9249. Вымываемый и промывочный растворы обрабатывают вместо раствора поваренной f5 соли раствором 2 н. СаСВ .

Объединенные вымываемый и промывочный растворы обрабатывают согласно описанному. После промывки и сушки осадка получают 10,7 г гепарината кальция с активностью 260

USP" ед/мг.

Предложенный способ позволяет увеличить чистоту целевого продукта, получаемый гепарин обладает высокой активностью (250-290 JSPед/мг) по сравнению с известным способом (140-170 0SP-ед/мг), а также упростить и сократить обработку животного сырья (при низких температурах продолжительность обработки 24 М при повышенных до б ч) кроме того, после обработки животное сырье может быть пригодным для использования при производстве колбасных изделий.