Штамм 97 фага наг-вибрионов 0-41 серовара

Штамм 97 фага наг-вибрионов 0-41 серовара

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Штамм 97

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК 3(Я) C 12 N 7/00

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Й АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3281041/28-13 (22) 16. 03.81 . (46) 15-07.83. Бюл. И 26 (72) Н.М. Остроумова, В.П. Мороз, З.М. Агапова, Н.fl„ KoHHoB T.Ã. Фе" дотова (71) Всесоюзный ордена Трудового Красного Знамени научно-исследовательский противочумный институт "Микроб" (53) 576.8.093(088.8) (56) 1. Авторское свидетельство СССР

ll 701148, кл. C 12 N 1/00, 1979.

„SU„„1028? 18 А (54) ИТАММ 97 ФАГА НАГ-ВИЬРИОН()В 0-41

CFPOBAPA (57) Штамм 97 (1203/442) Фага НАГ-вибрионов 0-41 серовара РКацил NAG-97, специфически активный в отношении

НАГ-.вибрионов 0-41 серовара, хранится в коллекции Тбилисского НИИ вакцин и сывороток под номером Ф-100.

1 10287

Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть исполь-. зовано в лабораторной диагностике. . Известен штамм Phagum NAG-vibrioпощ f41-qегоtype 88, активный в отношении НАГ-вибрионов 0-41 серотипа $ 1), Однако фаг 88 отличается низкой стабильностью при хранении даже при о

4-10 С. R зтих условиях концентрация : живых частиц к 2ìåñ. хранения снижает-10 ся в 10 Раз. При более высокой тем-, пературе (370C) фаг погибает через

5 сут. Таким образом, препараты фага

S8 имеют срок годности не более двух месяцев. Низкая жизнеспособность Фа- 15 .га 88 ограничивает сферу его применечия с диагностической целью.

Целью изобретения является новый штамм специфического фага для иденти" 20 фикации энтеропатогенных НАГ-вибрио. нов серовара 0-41, пригодный для широкого использования в медицине..

Предложенный штамм выделен из воды открытых водоемов на территории 25

СССР.

В результате из культуры НАГ»виб" риона 1203-0-41 серовара получен умеренный Фаг 1.?03, из которого выделен вирулентный мутант 1203/442 на газоне, индикаторного штамма 422 0-41 серова"

I pa, Итамм 97 (1203-442) фага НАГ-вибрионов 0-41 серовара Рпаццш НАС 97, специфически активный в отношении

НАГ-вибрионов 0-41 серовара, хранит" З5 ся в коллекции Тбилисского НИИ вакцин и сывороток под номером Ф-100.

Полученный штамм 97 фага НАГ-вибрионов 0-41 серовара имеет следующие морфологическую и физиологическую характеристики.

-Величина негативных колоний на газоне НАГ-вибриона 442, выращенно. го на агаре Мартена, Равна 3,4 0,4 мм4 в диаметре. Край колоний ровный, дно прозрачное, по периферии - зона неполного лизиса.

В отличие от фага 88, относящегося к т серотипу фагов НАГ-вибрионов

0-41 серовара, фаг 97 относится к неизвестному ранее серотипу НАГ-pa " гов, который обозначен как ii серотип фагов НАГ-вибрионов 0-41 серовара„ с известными 10 серотипами холерных фагов и НАГ-фагом 88 серологического 55 родства не имеет. Его корпускулы имеют головку гексагональной Формы величиной 58ЖЯ В и длинный упругий хвос18 2 товой отросток без чехла. Длина отростка 1714 64 1.

При лабораторной проверке свойств фага 97 установлено, что он, так же как и фаг 88, обладает широким спектром специфического действия на вибрионы 0-41 сероварэ, но отличается от фага 88 серологическими свойствами, строением частиц и стабильностью в процессе хранения.

Препараты фага 97 при концентрации частиц И 10т лизируют 813 штаммов

0"41 сероварэ, не более 2,23 НАГ-виб" рионов других 54 сероваров, сохраняют неизменным свой титр (концентрацию

:живых частиц) в течение 2 лет хранения при 4-10 С и не менее 2 мес. при

37 С.

Нехолерные вибрионы (фосфоресцирующие) р микроорганизмы рода PsGUdofAO»

nas Acromonas и кишечной группы не чувствительны к действию Фага 97. фаг 97 активно репродуцируется на клетках НАГ-вибриона 442 в бульоне Мартена, рН 7,6. При посевной дозе

I0 микробных клеток на 1 мл среды и множественности инфекции 1:1 при инкубации в течение ? ч 30 мин при

37 С фаг накапливается до и 10 частиц на мл среды.

Для получения. диагностического препарата фага 97 используют агар и бульон Мартена с РН 7,6. Культуру штамма - продуцента Р 442 18-часового роста при 37 C на агаре Мартена - за. севают в бульон Мартена. Через 3 ч роста при 37 С бульонную культуру добавляют к питательной среде (бульон

Мартена) из расчета 1 10- м.т. на мл, у.: туда же одновременно вносят Фаг 97 из расчета множественности инфекции

1:1. Через 2 ч 30 мин культивирования фаголизат фильтруют через бактериальные фильтры марки Ф-3, Ф-5, фильтрат разливают по ампулам и контролируют на специфическую и общую стерильность ,и активность.

Готовый препарат используют для диагностики следующим методом.

Готовят газон исследуемого штамма в слое мягкого агара по Грациа, т.е. добавляют 0,2 мл бульонной культуры исследуемого штамма к 5 мл 0,7 -. ного расплавленного arapa (45 С, перемеши вают и выливают на агаровую (23) плас-. тинку в чашке Петри. После застывания второго слоя на его поверхность капают фаг 97. Чашку помещают в термо стат при 37 С. Учет результатов прово- .

3 10287 дят через 4-8 ч. При обнаружении на месте нанесения фага литического пятна исследуемый штамм относят к вибрионам

0-41 серовара.

Фаг 97 высокостабилен при хранении 5 не только в условиях,холодильника, но . и неблагоприятных температурных усло. виях (37 С).

В холодильнике 1,при 4"10С) его титр остается неизменным не менае 10

2 лет 1,срок наблюдения), при 37 С только через 3 мес. хранения было отмечено снижение концентрации частиц в 10 раз, тогда как фаг 88 при 37 С погибает через 5 сут., а при 4-1.0 С, 15 сохраняет диагностический титр не более 2 мес. В отличие от фага 88, который может применяться для диагности" ки в очень ограниченном .числе учреждений, имеющих условия и разрешение 20 для его размножения каждые 2 мес., 18 4 фаг. 97 может готовиться централизо".

Ю ванно, заранее в .одной из специализированных лабораторий и рассылаться для практического использования в периферические учреждения органов здра-. воохранения.

Применение фага 97 приведет к со.кращению расхода питательных сред и рабочего времени на приготовление диагностического препарата, применяемого для идентификации НРГ-вибрионов

0-41 серовара. Более широкое примене" ние диагностического метода, основанного на использовании Фага 97; позволит улучшить диагностику- вибрионов.

Применение фага 97 в лабораторной практике исключит необходимость. постаковки серологических реакций, которые в настоящее время являются единственным способом идентификации НАГ-вибрионов определенных серотипов.

Корректор Л. Бокшан

Подписное

Составитель С. Малютина

Редактор С. Лисина Техред К.Иыцьо

Заказ 4895/24 Тигъаж

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035 Москва W-35 Рамшская наб. д. 4/5 м4===k== А « -А

Филиал ППП "Патент", r. Ужгород, ул. Проектная,