Устройство для электрофореза микроколичеств белков

Устройство для электрофореза микроколичеств белков

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

УСТРОЙСТВО ДЛЯ ЭЛЕКТРОФОРЕЗА МИКРОКОЛИЧЕСТВ БЕЛКОВ, содержащее кювету для разделякзщего геля, соединенную с аноднш и катодньм .буферными сосудами, отличающееся тем, что, с целью повышения точности анализа и упрощения подготовительных операций, устройство дополнительно снабжено коническим капилляром для концентрирующего геля с возможностью его установки сверху кюветы, соосно с ней и с контактом его узкого конца с разделяющим гелем кюветы.

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИН

ÄÄSUÄÄ 1029064 А

3(50 С 01 И 27/26

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ т

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н ABTOPCHOMY СВИДЕТЕЛЬСТВ . Г (54) (57) устРОИСтВО ДЛя ЭЛЕКтрсфОРЕЗА МИКРОКОЛИЧЕСТВ БЕЛКОВ, содержащее кювету для разделяющего геля, соединенную с анодным и катодным ,буферными сосудами, о т л и ч а ющ е е с я тем, что, с целью повы шения точности анализа и упрощения подготовительных операций, устройство дополнительно снабжено коническим капилляром для концентрирующего геля с возможностью его установки сверху кюветы, соосно с ней и с контактом его узкого конца с разделяющим гелем кюветы. (2l) 3250119/18-25 (22) 05 ° 02.81 (46).15.07.83. Бюл. 9 26 (72) В.Т.Ларин, Б.Ф.Санталов и A.N.Õoõëîâ (71) Специальное конструкторское бюро. биологического приборостроения

AH СССР и Институт биологической физики АН СССР (53) 543.545(088.8) (56) 1. Маурер Г. Диск-электрофорез.

М., Мир, 1971 с.51.

2. Осборн Н.Н. Микрохимический анализ нервной ткани. М., Медицина, 1978, с.184-229.

1029064

Тираж 471 Подписное

ВНИИПИ Заказ 4967 41

Филиал ППП Патент, г. Ужгород,ул.Проектная, Изобретение относится к биохимии, а именно к устройствам электрофореза биологических макромолекул на клеточном уровне и может быть использовано в генетике, эмбриологии, энэимоло гии, клинической диагностике.

Известно устройство для электрофореза белков, содержащее кювету, заполненную разделяющим гелем, поверх которого расположен слой концентрирующего геля, анодный и ка- 10 тодный сосуды для буферных растворов(.1„), Однако проба белков, подлежащйх разделению, вводится в"карман" для проб, проделанный в слое концентрирующего геля. Так как площадь ос- 15 нования кармана :относительно велика и она определяет ширину зон разделяемых белков; то при анализа микраколичеств белков становится невозможным их денситометрирование. 7()

Наиболее близким к изобретению по техническому решению является устройство для электрофореза микро-. количеств белков, содержащее кювету (микрокапилляр) для разделяющего геля, соединенную с анодным и катодным буферными сосудами. Проба белков наслаивается над концентрирующим гелем, введенным в микрокапилляр над разделяющим гелем, но всему сечению капилляра 1,23.

Недостатком устройства является его низкая разрешающая способность, вследствие применения одного и того же микрокапилляра для концентриро вания и разделения белков. В микрокапиллярах, где отношение площади поверхности стенок к ограниченному ими объему геля велико, большое отрицательное влияние на качество раз деления оказывают пристеночные эф- 4О фекты, приводящие к неоднородности структуры геля по сечению капилляра.

В результате чего белковые зоны после раэгонки получаются размытыми, их детектирование затруднено. 45

Кроме того, применение тонких капилляров крайне усложняет операцию их заполнения гелями и введение пробы. Выполнение этих операций проводится е помощью микроманипулято- 5О в под микроскопом. Попытка умень-. ения пробы (менее 1 мкл) с целью ,уменьшения ее длины в капилляре, ведет к еще большему усложнению подготовительных операций. 55

Цель изобретения — повышение точности анализа микроколичеств белков и упрощение подготовительных операций.

Цель достигается тем, что в устрой» стве для электрофореза микроколичеств белков, содержащем кювету для разделякицего геля, соединенную с анодным и катодным буферными сосудами, устройство дополнительно снабжено коническим капилляром для концентрирующего геля с возможностью его установления сверху кюветы, соосно с

° ней и с контактом его узкого конца с разделяющим гелем кюветы.

На чертеже схематически изображено предлагаемое устройство, общий вид.

Устройство состоит из конического капилляра 1, для концентрирующего геля 2, кюветы 3 с разделяющим гелем

4. Поверх разделяющего геля в ней может находится одновременно и концентрирующий гель.

Устройство состоит также из анодного 5 и катодного б буферных сосудов, Устройство работает следующим образом.

Конический капилляр 1 с концентрирующим гелем 2 устанавливается в отверстии дна анодного буферного сосу. да 5 так, чтобы его верхняя часть сосуда б находилась под слоем буферного раствора. Нижняя коническая часть капилляра 1 вводится в катодный буферный сосуд б и так же покрывается раствором при заполнении сосуда 6. Проба белка наслаивается поверх геля (зачерненная полоска).

Подавая напряжение на электроды буферных сосудов, проводят электрофоретическое концентрирование пробы белков в концентрирующем геле 2. При этом в узкой части капилляра компактный по вертикали пакет белков подвергается сжатию по диаметру. Затем устанавливают конический капилляр 1 поверх кюветы 3 с разделяющим гелем

4 и проводят электрофоретическое разделение белков. При этом кювета может быть произвольной формы и размера и в ней может находится одновременно с разделяющим и концентрирующий гель, с которым в этом случае контактирует кончик капилляра 1. Поскольку разделение белков производят в толще геля, отсутствуют пристеночные эффекты, т.е. обеспечивается однородность геля по сечению кюветы.

С помощью предложенного устройства повышается точность определения и его чувствительность. Так в контрольном опыте о разделению белков бычьего альбумина, взятого в концентрации 0„025 мкГ/мкл и объеме пробы 1 мкл получено пять зон. Наименьшая из них содержала около 3 10 о г белка.

В предложенном устройстве можно работать с кюветами диаметром (толщиной) геля 1-2 и более мм, что зна- чительно повышает производительность | труда и делает ненужным применение микроманипуляторов.