Способ получения метиловых эфиров октапептидов

Патент 1041030

Авторы

Иллюстрации

Показать все

Реферат

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ МЕТИЛОВЫХ ЭФИРОВ ОКТАПЕПТИДОВ общей формулы I X-Arg-VaB-Tyr-lEe-HIs-Fro-Y-OMe, His(Dnp)-Y-OMe, где 1 - бензилоксйкарбонил; N02 нитрогруппа; BzB - бензил; Опр - динитрофенил; X, У имеют указанные значения, отщепля,ют динитрофенильную защитную группу путем обработки 2-меркаптоэтанолом , а затем удаляют ос- О) тальные защитные группы путем каталитического гидрогенолиза.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

„.80 „„1041030 А

ЭСВ:С 07 С 103/52 // A 61 К 37/02

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ CCCP l

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И OTHPblTHA

Ъ. - -е,.

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ/"" - .",,/

И ПАТЕНТУ где X-Sar, оксиацетил;

Y-I Ee, Thr(Me), Thr, А1а, е т л и ч а ю щ и и о я тем, что от защищенного метилового эфира ок" тапептида общей формулы П

Z""Arg(NO )-VaP-Tyr(Bzt)-I fe-", HIs(Dnp)-Y-ОМе, (21) 3226301/23-04 ,(22) 16. 01 .81 (31) 101/80 (32) 18,01.80 (33) ВНР (46) 07,09.83. Бюл. N 33 (72) Ольга Ньеки, Лайош Кишфалуди, Эгон Карпати и Ласло Спорни (ВНР) (71) Рихтер, Гедеон Ведьесети Дьяр, PT (BHP) (53) 547 ° 964.4.07(088,8) (56) 1. Патент СССР N 845773, кл. С 07 С 103/52, опублик. 1981.

2. Гринштейн Дж,, Виниц M. Химия аминокислот и пептидов. M., 1965, с. 692, (54)(57) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ МЕТИЛОВЫХ

ЭФИРОВ ОКТАПЕПТИДОВ общей формулы Х

Х-Arg-Ча 0-Tyr- I Fe-Н i s-Fro-У-ОМе, где Z - бензилоксикарбонил;

N0g - нитрогруппа;

8zf - бензил;

0np - динитрофенил;

Х, У имеют указанные значения, отщепляют динитрофенильную защитную группу путем обработки 2-меркаптоэтанолом, а затем удаляют ос- тальные защитные группы путем ката1 литического гидрогенолиза. формулы 25

Х-Arg-Ча E-Tyr-! Ee-Hi s-Pro-Y- OMe (1) где Х - Sar оксиацетил;

У - I Pe, Thr(Me), Thr, AEa, от метилового эфира защищенного октапептида общей формулы

Z-Ar g (N0>) -Va P-Tyr (Bz E) -1 PeHIs(Dnp)-Pro-Y-ОИе, 30 (П) где Z - бензилоксикарбонил; N02 - нитрогруппа;

-BzE - бензил;

Dnp - динитрофенил;

X u Y имеют указанные значения, отщепляют динитрофенильную защитную группу обработкой 2-меркаптоэтанолом, а затем удаляют остальные защитные группы путем каталитического гидрогенолиэа °

Используемые в качестве исходных веществ метиловые эфиры октапептидов общей формулы (II) получают известными методами пептидной химии .путем ступенчатого наращивания пептидной цепи с использованием пентафторфениловых эфиров защищен" ных аминокислот (1 ).

Для защиты боковых функциональ- .. ных rpynn применяют защитные группы, стабильные в условиях ацидолиза, проводимого для отщепления защит- . ных групп после завершения реакции образования пептидной связи. Для временной защиты гидроксильной груя

1 10410

Изобретение относится к.сяособу . получения новых соединений, а именно метиловых эфиров октапептидов, и может быть использовано в медицине. 5

Известен способ поручения пептидов путем отщепления динитрофенильной защитной группы .от соответствующего защищенного пептида в. среде диметилформамида под действием 2-мер- 10 каптоэтанола в течение 1,5-2,0 ч при комнатной температуре 1 1.

Известен также способ удаления защитных rpynn в пептидах путем каталитического гидрогенолиза в водноорганической среде в присутствии

103-ного палладия на активированном угле (2

Цель изобретения - получение но-: вых пептидов, обладающих ценными 20 фармакологическими свойствами.

Поставленная цель достигается тем, что согласно способу получения метиловых эфиров октапептидов общей

30, 2 пы тирозина используют бенэильную группу (ez E), для защиты имидаэольного цикла.гистидина - динитрофенильную группу (Dnp) и для защиты гуанидиногруппы аргинина - нитрогруппу (К02). Эти защитные группы устойчивы к действию кислот, вследствие чего трет-бутилоксикарбонильная группа (Вос), используемая для защиты о - аминогрупп в, процессе наращивания пептидной цепи, отщепля" ется селективно без затрагивания названных защитных групп.

Получение новых метиловых эфиров октапептидов общей формулы (1;) иллюстрируется приведенными примерами, где сокращение НОАА " оксиуксусная кислота.

Тонкослойную хроматографию проводят на пластинках с использованием следующих систем растворителей:

1. Этилацетат: (пиридин - уксусная кислота - вода 20:6:I1)=98:2, 2. Этилацетат: (пиридин - уксусная кислота - вода 20:6:11)=95:5.

3. Этилацетат: (пиридин вЂ” уксусная кислота - вода 20:6:11)=90:10.

4. Этилацетат: (пиридин - уксусная кислота вЂ” вода 20:6:11)=80:20.

5. Этилацетат: (пиридин - уксусная кислота - вода 20 6 11)=70 30.

6. Этилацетат: (пиридин - уксусная кислота " вода 20:6:11)=60:40, 7. н-Бутанол:уксусная кислота:вода=4:1:5.

8. н-Бутанол:уксусная кислота: пиридин:вода=30:6:20:24.

9.н-Бутанол:этилацетат..уксусная кислота: вода=1: 1: 1: 1.

10. н-Бутаэтилацетат:.(пиридинуксусная кислота - вода 20:6:11)=

-75:25.

Тонкослойные хроматограммы проявляют нингидрином или раствором хлортолидин с йодистым калием.

Очистку целевых продуктов проводят общепринятым методом: 0,5 г пепти-, да в 4 мл 0,01 М раствора ацетата аммония пропускают через колонку, содержащую 0,5 л карбоксиметилцеллюлозы (CMC-52) и предварительно уравновешенную 0,01 И раствором ацетата аммония. Продукт очищают градиентным элюированием с использованием

1,5 л.0,0.1 И раствора ацетата аммония и 1,5 л 0,4 И раствора ацетата аммония. С корость элюирования 25 мл/ч.

Собирают фракции по 10 мл и детектируют с помощью прибора "LKB 0vi3 1041

cord 11". - Очищенный целевой продукт получают лиофилизацией основной фрак ции.

Пример 1. Метиловый эфиР (Sar ", I Ре ) -ангиотензина 11 .

Стадия 1. Вос-Агд (NO ) -Va E-Tyr (Bz.t) ! Ee-Hi s (Опр) -Pro-1 Ee-OMe.

К 1,36 г (7,5 ммоль) хлоргидрата метилового эфира изолейцина в

30 мл хлороформа добавляют 1,05 мл 10 триэтиламина и 1,90 г (5 ммоль) пей- тафторфенилового эфира БОК-пролина.

Смесь перемешивают 30 мин при посто,. янном рН и экстрагируют водой,103-ным водным раствором лимонной кислоты и: водой. Органический слой сушат над сульфатом натрия и упаривают. Полу": ченный в остатке защищенный дипептид (R =0,8) растворяют в 5 мл 8 н. со(я ляйой кислоты в диоксане. Через

15 мин раствор разбавляют 20 мл безводного эфира и упаривают. Получен- ный в остатке хлоргидрат дипептида (кр0,46) растворяют в 30 мл хлоро- . ,51 форма, добавляют триэтиламин до рН 8 и 4,36 г (7,5 ммоль) пентафторфенилового эфира БОК-гистидина.

Через 1 ч к раствору добавляют

0,83 мл N,N-диметиламиноэтиламина и через 15 мин .экстрагируют 1ОФ-ным водным раствором лимонной кислоты, насыщенным раствором хлористого натрия, 1 н. раствором соляной кислоты, 54-ным водным раствором бикарбоната натрия и водой. Органическую фазу сушат над сульфатом натрия и упаривают. Полученный в остатке защищенный трипептид (R>=

Q1,.

=0,45) без очистки растворяют в

10 мл 8 н. раствора соляной кислоты . в диоксане. Через 15 мин раствор разбавляют безводным эфиром, выпав- ший в осадок хлоргидрат свободного трипептида отфильтровывают, промы-: вают эфиром и растворяют в 15 мл диметилформамида. K полученному раст- 45 вору добавляют триэтиламин до рН 8 . и 2,4 г (6 ммоль) пентафторфенилового эфира БОК-изолейцина. Смесь вы" держивают 30 мин при постоянном

РН и упаривают. Остаток растворяют в этилацетате. Раствор промывают

104-ным водным раствором лимонной кислоты, .1 н. раствором соляной ки .- слоты, водой, сушат над сульфатом натрия и упаривают. Остаток расти- 55 рают со смесью эфир - гексан (1:9), и отфильтровывают. Полученный защищенный тетрапептид (В -0,31) Pa(zp

030 . 4 створяют в 7 мл 8 н. раствора соляной кислоты в диоксане. Через 15 мин добавляют безводный эфир и выпавщий при этом в осадок хлоргидрат свободного тетрапептида отфильтровыва. ют. Полученный тетрапептид (Ф = 0,38) растворяют в смеси, состоящей из

10 мл диметилформамида и 20 мл хлороформа, добавляют триэтиламин до рН 8 и 2,96 r (5,5 ммоль) пентафторфенилового эфира БОК-0-бензил-тиро зина. Смесь выдерживают при постоянном рН 15 мин и упаривают. Остаток растворяют в этилацетате, добавляют 0,22 мл N,N-диметиламиноэтиламина и через 10 мин промывают 104-ным водным раствором лимонной кислоты, 1 н. раствором соляной кислоты и водой. Органическую фазу сушат над сульфатом натрия и упаривают. Остаток растирают с безводным эфиром и отфильтровывают. Полученный защищен" ный пентапептид (R<=0,52) растворяют в 10 мл 8 н. раствора соляной кислоты в диоксане, через 15 мин добавляют безводный эфир и выпавший осадок отфильтровывают и промывают эфиром, Полученный хлоргидрат свободного пентапептида (R5 вЂ” 0,8) растворяют в 20 мл диметил ормамида, добавляют триэтиламин до РН 8 и 2,3 г (6 ммоль) БОК-пентафторфенилового эфира EOK-валина. Смесь выдерживают при постоянном рН 1 ч и упаривают..

Остаток растворяют в хлороформе и по" лученный раствор промывают 10".ь-ным водным раствором лимонной кислоты, 1 н. раствором соляной кислоты, водой, сушат над сульфатом натрия и упаривают. Остаток растирают с безводным эфиром и отфильтровывают.

Полученный защищенный гексапептид (R 0 43) растворяют в 8 н. Растворе соляной кислоты в диоксане, через 15 мин добавляют безводный эфир и выпавший осадок отфильтровывают и .промывают эфиром. Полученный хлоргидрат свободного гексапептида растворяют в 15 мл диметилформамида, добавляют триэтиламин до

РН 8 и 2,6 г (6 ммоль) пентафторфенилового эфира БОК-NG-нитроаргинина. Смесь выдерживают при постоянном РН 30 мин, добавляют 45 мл хлороформа, промывают 1 н. раство" ром соляной кислоты и водой, сушат над сульфатом натрия и упаривают.

Остаток растирают с этилацетатом и отфильтровывают.

1041030

Получают 3,3 r Boc-Arg-(1 0 )ЧаР- Туг-(Bz P) - I Ре-Н1s(0np) -Рго-I йе:ОМе (выход 513 от теоретического в расчете на исходное соединениепентафторфениловый эфир БОК-пролина), R 0,37.

Стадия 2.. Z-Sar"Агд(НО )"Ча1"

Tyr(8z Р)-I 7e-His(Dnp) Ðãî-l те"ОМе.

3,3 r (2,5 ммоль) метилового эфи ра Вос-Arg(NO>) -Ча К-Tyr (Bz Р),-1 Ре» fQ

His(0np)-Pro-1 Ре растворяют в 15 мл, 8 н. раствора соляной кислоты в диоксане, через 20 мин добавляет без" водный эфир, выпавший продукт отфиль" тровывают и промывают эфиром. Полу- !5 ченный хлоргьу рат свободного гептапептида (К =0,7) растворяют в (»

15 мл диметилформамида, добавляют триэтиламин до рН 8 и 2,4 г(6 ммоль) пентафторфенилового эфира Z-Sar. 20

Смесь выдерживают при постоянном рН 30 мин, добавляют 45 мл хлороформа, промывают t н. раствором со" ляной кислоты и водой, сушат над сульфатом натрия и упаривают. Ос." 25 таток растирают .с этанолом и отфиль ровывают.

Получают 3, 17 г (893 от теоретического) защищенного октапептида

Z-Sar-Аrg(NO@)-Чаl-Tyr(Bzl)-1leН is(Dnp)-Pro"Ile-ОМе. Т.пл. 197"

209 С. R LO 82.

Стадия 3. Удаление защитных групп. 35

2,59 r (1,83 ммоль) Z-Sar-Arg(NO>)

Ча l -Tyr (Bz l ) - l lе-Hi s(Dnp)-Pro-I 1еОМе растворяют в 5 мл диметилформамида и к раствору добавляют 4,6 мл

2-меркаптоэтанола. Смесь перемешивают 1 ч и добавляют .безводный эфир. Выпавший осадок отфильтровы" вают. Получают 2,0 г (8» от теоре" тического) Z-Sar-Arg(NO )-Val-,Tyr

2 4.L . (Bz1) - I 1е-Hi s-Pro- I 1е-ОМе (Ф -0 42) 45

Продукт растворяют в 40 мл сме» си метанол - уксусная кислотавода 5:1:1, добавляют 1,0 r !0Ф-ного палладия на активированном угле и через раствор в течение 20 ч при интенсивном перемешивании пропускают водород. Затем катализатор отфильтровывают, фильтрат унаривают, Остаток смешивают с водным этанолом и упаривают. Операцию повторяют несколько раз. Затем остаток растирают с безводным эфиром, отфильтровывают и сушат.

Получают 1,56 г (983 от теоретического) метилового эфира (Sar ", 11е6)-ангиотензина !1. Продукт очищают как описано выше.

Конечный продукт имеет следующие характеристики: ф-0,19; R< â€ "0,59;

Rg0,38; Е „(рН=1, 9): 1, 00. Аминокислотный анализ: Pro 1,07(1)

Val 1,9 (1); Tyr 0,8 (1); His 1,03 1)

Arg 1,0 (1); 1lе 1,87 (2); Sar 1,0(1)

Пример 2. Метиловый эфир (OGly I lå )-ангиотензин 11.

Стадия 1. Z"OGly-Arg(NO )-ValTyr(BzI)-11e-Н1s(Dnp)-Pro-Ilе"ONe.

1,5 г (0,8 ммоль) Вос-.Arg(NO>)" .Val Òóã(Âк1)-(lе-His(0пр)-Pro-Ilе-ОМе (например 1, стадия 1) растворяют в 6 мл 8 н. раствора соляной кислоты в диоксане, через 20 мин добавляют безводный эфир, выпавший продукт о фильтровывают, Полученный хлор-< гидрат свободного гептапептида (Р = 0,7) растворяют в 10.мл диметилформамида, добавляют триэтиламин до рН 8 и 0,46 г (1,17 ммоль) пентафтор" фенилового эфира Z-ОС!у. Через 30 мин добавляют к смеси 30 мл хлороформа, промывают 103-ным водным раствором лимонной кислоты, 1 н, раствором соляной кислоты и водой, сушат над сульфатом натрия и упаривают.

Получают 1,05 г-(933 от теоретического) Z-061у-Arg(NOp)-Val-Tyr(Bzl)

Ilå-Нis(0np)-Pro-Ilе-ОМе; T.пл. 140145 С; К81=0,24, Стадия 2. Удаление защитных групп.

1,05 г (0,74 ммоль) Z-OGly-Arg(NO>)

Va1-Tyr(Bz1)-.I1е-Нis(Dnp)-Рro-I1е-ОМе растворяют в 5 мл диметилформамида, к раствору добавляют 2,3 мл 2-меркаптоэтанола, через 2 ч добавляют безводный эфир, выпавший продукт отфильтровывают, промывают эфиром.

Получают 0,85 г (853 от теоретического) Z-OGlу-Агд(NO2)-Val"Tyr(Bzl)lie-His-Pro-Ile-OMe (-0,40).

0,75 г (0,6 ммоль) этого продукта растворяют в 20 мл смеси метанолуксусная кислота - вода (5:1:1), добавляют 0,8 г 103-ного палладия на активированном угле и через раствор в течение 18 ч при интенсивном перемешивании..пропускают водород.

Затем катализатор отфильтровывают, .фильтрах упаривают. Остаток смешивают с водным этанолом и упаривают. Операцию повторяют несколько раз.

Затем остаток растирают с..безводным эфиром, отфильтровывают и сушат. гlт и

7 1.041030, 8

Получают 0,48 г (823 от теорети- ты в диоксане. Через 15 мин добавческого) метилового эфира (OG1у1,I1е8), ляют безводный эфир, выпавший проангиотензина 11, который очищают дукт. отфильтровывают и промывают как описано выше. эфиром. Полученный продукт (R -0 27) о

° йщ °

Конечныи продукт имеет следующие 5 растворяют в 10 л диметилформамида (тД 81

Р 1=0 60. характеристики: R<-0,29; R< 0,72, . " добавляют триэтиламин до рН 8 и

2,7 г (5 ммоль) пентафторфенилового

Аминокислотный анализ: Рго 1,0 (1:) эфира БОК-О.-бензил-тирозина, выдер. Чаl 1,0 (1); Ile 1.,7 (2); Tyr 0,88(1). живают 30 мин при рН 8, упаривают, His 1,02 (1); Arg 0,96 (1), 10 остаток растворяют в этилацетате. К

Пример 3. Иетиловый эфир полученному раствору добавляют (Sar", Thr(Me) )-ангиотезина 11.. 0,11 мл N,N-диметилэтиламина и через тадия 1. Z-Sar -Arg(NO )-Va 1- 15 мин промывают 103-ным водным ра«

Tyr(BzI)-Ile-HIs(Dnp)-Pro-Thr(He)-ONe створом лимонной кислоты, насыщен0,68 r (4,5 ммоль} метилового, 15 ным раствором хлористого натрия и эфира 0-метил-треонина растворяют в .. водой, сушат над сульфатом натрия и

10 мл хлороформа и добавляют 2,28 r упаривают. Полученный в остатке за(6 ммоль) пентафторфенилового эфира щищенный пентапептид (Rq=0,51) ра-,.

БОК-пролина. Раствор вь держивают . стирают . с безводным эфиром, отфиль30 мин при постоянном рН 8 и упари- 20 тровывают и растворяют в 5 мл 8 н. вают, Остаток растворяют в этилаце- . : раствора соляной кислоты в диоксане, тате, добавляют 0,22 мл N,N-диметил-, через 15 мин добавляют безводный аминоэтиламина и через 15 мин промы-, . эфир, выпавший продукт отфильтровы" гт ог. вают 10г-ным водным раствором лимон-.. вают, промывают эфиром. Полученный ной кислоты, насыщенным раствором 25 хло гидрат свободного пентапепти

1Й да хлористого натрия, 1 н.. раствором (R =0,48) растворяют в 20 мл диГ соляной кислоты и водой, сушат над . . метилформамида, добавляют триэтилсульфатом натрия и упаривают. Полу-, амин до рН 8 и 1,9 r (9 ммоль).пениенный защищенный дипептид (Й "0,?6) тафторфенипового эфира 60К-валина. растворяют в 3 мл 8 н. раствора со- j0 Раствор, выдерживают 30 мин при рН 8, ляной кислоты в диоксане. Через . .упаривают, остаток растворяют в хло15 мин добавляют безводный эфир и . роформе, промывают сушат и упаривают. упаривают. Полученный хлоргидрат своа Остаток растирают с безводным (3 ) бодного дипептида (к =0,18) раст- - эфиром и отфильтровывают, Полу-. воряют в 10 мл диметйлформамида, : ченный защищенный гексапептид добавляют триэтиламин до рН и 2,95 г .: .(R =0,44) растворяют в 1О мл 8 н.

35 д (5 ммоль) пентафторфенилового эфи- : раствора соляной кислоты в диоксара БОК-й" динитрофенил-гястидина. не и через 15 мин добавляют без1Щ

Раствор выдерживают 30 мин при рН 8 . водный эфир, выпавший продукт отфиль-. у аривают и остаток растворяют в этил тровывают и промывают эфиром. Полуацетате. К раствору добавляют 0,11 м т, . ченный хлоргидрат свободного гексаN,N-диметиламиноэтиламин, через > пептида (0/=0,36) растворяют в

10 мин промывают 103-ным водным - 15 мл диметилформамида, добавляют раствором лимонной кислоты, насыщен-:, триэтиламин до рН 8 и 2,25. г (5 ммоль) ным раствором хлористого натрия и, пентафторфенилового эфира БОК-f4 45 . водой, сушат над сульфатом натрия и .. -нитроаргинина. Раствор выдерживают упаривают. Полученный защищенный, 1 ч при рН 8 разбавляют хлороформом йЦ»

Э трипептид (к -0,3) растворяют в 10 йп и обрабатывают как описано выше. диметилфор.амида, добавляют триэтил- : Полученный в остатке продукт расти:амин дорН 8 и 2;0 г (5 ммоль) пен-; рают с этанолом и отфильтровывают. тафторфенилового эфира БОК-изолей- Получают 3,3 r (913 от теоретичес50 цина,выдерживают 30. мин при рН. 8 кого выхода, рассчитанного на треои упаривают. Остаток растворяют :- . нин) Вос-Arg(N0g) Val-Tyr(Bzl)-31ев этилацетате. Раствор промывают, -., Н1s(0np) -Рго.-ТЬг(ф) -OMe. T. пл. 188сушат и упаривают. Остаток расти- 193 С; R =0 38,8 =0 87. и 1 °, ° ° ° рают со.смесью эфир - гексан 3;7 . 1,95 г (1,5 ммоЬь) вышеуказаннои отфильтровывают, Полученный . --. ro метилового эфира защищенного гептетрапептид (R =0,28),. растворяют . тапептида растворяют в 10 мл 8 н. в 7 мл 8 н. раствора соляной кисло" раствора соляной кислоты в диокса-!

9 1о41о не и через 70 мин осаждают добавле нием безводного эфира продукт, кото- рый отфильтровывают и промывают эфиром. Полученный хлоргидрат свобод. ного гептапептида R<0,20;) раст(9> воряют в 15 мл диметилформамида, добавляют триэтиламин до рН 8 и

0,87 r (2,25 ммоль) пентафторфенилового эфира Z-Sar.

Раствор выдерживают 1 ч при рН 8, 10 разбавляют хлороформом и обрабатывают как описано выше.

Получают 1,85 r (873 от теоретичес

tcqro) метилового эфира защищенного октапептида Z-Sar -Arg (ИО2) -Чаl -Tyr 15 (Bz 1 )- I le-H i sIOnp) -Pre-Thr (Me)-0Me.

Т.пл. 202-208 С; К =0,20; RIAL=0,86.

Стадия 2. Удалейие защитных групп.

1,85 r (1,4 ммоль) Z-Sar Àãq(N02)

Va l-Tyr(8zl) -t1е-Нis(Dnp) -Pro,-Thr(Me) 20

ОМе растворяют в 8 мл диметилформамида, к раствору добавляют 2,6 мл 2-меркаптоэтанола, через 1 ч добавляют безводный эфир, Выпавший продукт отфильтровывают и промывают эфиром. 25

Получают 1,б г.2-Ser-Arg(NOz)-yefTyr Bz 1 ) вЂ” l le-Hi s-Pro-Thr (Me) -OMe, (R -0,82), Полученный продукт растворяют в 30 мл смеси метанол вЂ” уксусная кислота - вода (5".1:1), добав. щ0 ляют катализатор (103-ный палладий на активированном угле} и при интенсивном перемешивании в течение 30 ч пропускают водород. Затем катализатор отфильтровывают, фильтрат упаривают. Остаток растирают со смесью эфир вЂ” этанол (2:1) и отфильтровывают.

Получают 0,88 г (883 от теоретического метилоеого эФира (Sers, Thr(Me) )-ангиотенэина il, который очищают как описано выше.

Конечный продукт имеет следующие характеристики: R 0,29ф"=

0,55; К -0,27.

Аминокислотный анализ: His 1,03(1);

Arg 0,95 (1); Ile 0,93 (1); Pro

1, 03 (1); Уа1 1, 15 (1); Ile 1, 03 (1);

Tyr 0,9 (1); Sar 1, 0 (1) .

Пример 4. Метиловый эфир (0Gly, Thr(Me) )-ангиотензина 1)

С тадия 1. 2--OG I ó-Аг g (ИО ) "Va lThr(Вя1) - I I е-Н i s(Dnp)-Thr (Ме) -ОМе.

0,62 r (0,47 ммоль) Вос-Агу(ИО2) Va 1-Tyr (Вк1) - I l е-Н i s (Dnp) -Pr o- Thr(Me) "ОМе (пример 3, стадия 1) растворяют в

4 мл 8 н, раствора соляной кислоты в диоксане и через 15 мин осаждают

30 10 продукт добавлением безводного эфира, I отфильтровывают и промывают эфиром.

Полученный хлоргидрат свободного гептапептида (К =0,35) растворяют (5 в 10 мл диметилформамида, добавляют триэтиламин до рН 8 и 0,8 г (2 ммоль) пентафторфенилового эфира Z-OGlу.

Раствор выдерживают 1 ч при рН 8, разбавляют 30 мл хлороформа и обрабатывают как описано, выше, Остаток растирают со смесью эфир этанол (9:1) и отфильтровывают.

Получают 0,60 г (90у от теоретического) метилового эфира защищенного октапептида Z-OGly-Arg(N02)-ValTyr(Bzl)-Ile-His(Dnp)-Pro-Thr(Me)-ОМе.

T.në. 158-162 C; Ке=о 44.

Стадия 2. Удаление защитных групп, IsI T6 г (О, 42 ммоль) Z-OG I y-Arg (NO z)Va 1 -Tyr(Bz I) -. I le-.His(Dnp) -Pro-Thr (Me).

ОМе растворяют в 2 мл диметилформамида, к раствору добавляют 1,2 мл

2-меркаптоэтанола, через 1 ч добавляют безводный эфир, выпавший продукт отфильтровывают,- растворя(()т в метаноле. Раствор обрабатывают активированным углем, фильтруют и упаривают. Остаток растирают с эфиром и отфильтровывают. Получают 0,46 г

2-OG I y-Ar g (NO ) -Va 1-Tyr (Вл1) -! I eHi s-Thr (Ме)-ОМе. R =0,16; R< 0,52, Продукт растворяют в 25 мл смеси . метанол - уксусная кислота - вода (5:1:1), добавляют 0,3 г 10 -ного палладия на активированном угле и при интенсивном перемешивании пропускают в течение 17 ч водород. Затем катализатор отфильтровывают, фильтрат упаривают. Остаток смешивают с водным этанолом и упаривают.. Операцию повторяют несколько раз.

Получают 0,32 r (91/ от. теоретического) метилового эфира (0("1у-, А 1а)-ангиотензина 11, который очищает как описано выше. с

Конечный продукт имеет следующйЬ характеристики: R =O P22; R =0,73;

R =О, 56.

Аминокислотный анализ: Thr 0,02(1)

pro 1,03 (1); Va I 1,0 (1); His 1,0(1)

Arg 1,0 (1).

Пример 5. Метиловый эфир (Од1у", Thre)-ангиотензина 11.

Стадия 1. Boc-Arg(NO<)-Val-Tyr(Bzl)

I1å-Н(s(Dnp)-Pro-Thr-OMe.

3,8 r (20 ммоль) метилового эфира Ометил-тирозина хлоргидрата растворяют в 50 мл хлороформа, добавляют 2,3 мл (20 ммоль)триэтилами11 1041030

12 на и.3,8 r (10 ммоль) пентафторфени= го эфира БОК-валина. Раствор выдержилового эфира БОК-пролина. : вают 1 ч при рН.8 и упаривают. Оста-.

Раствор выдерживают при постоян- ток растворяют в хлороформе и растном рН 1 ч и обрабатывают как описа- вор обрабатывают. Остаток растирают

Но выше.,Полученный защищенный ди- 5 с эфиром отфильтровывают и промыва (э! ъ

1 пептид (8<=0,77) растворяют в 20 мл, ют эфиром. Полученный защищенный гек

8 н. раствора соляной кислоты в ди- сапептид (R = 0,55) растворяют в оксане, через 15 мин добавляют без- 8 мл 8 н, раствора соляной кислоты в водный эфир, выпавший продукт отфиль диоксане, через.l5 мин осаждают протровывают и промывают эфиром. Полу- !О дукт добавлением безводного эфира . у (5t ченный продукт (R<=0,2) растворяют продукт отфильтровывают, промывают в 30 мл хлороформа, добавляют три- эфиром, Полученный хлоргидрат свободэтиламин до рН 8 и 4,7 г (8 ммоль) ного гексапептида,(R =0,23) растfoal

1 пентафторфенилового эфира БОК-N" -A> . воряют в 20 мл диметилформамида, нитрофенил-гистидина. Раствор выдер- 15 добавляют триэтиламин до рН 8 и живают 1 ч при рН 8 и обрабатывают - .1,8 г (4 ммоль) пентафторфенило. как указано выше. Полученный в остат вого эфира БОК-N -нитроаргинина.

E5J ке защищенныи трипептид (R<=0,47) - ;. Раствор выдерживают 1 ч при рН 8, растворяют в 20 мл 8 н. раствора со- вЂ” упаривают, остаток растворяют в ляной кислоты в диоксане и через - 26 хлороформе, раствор обрабатывают

15 мин осаждают продукт, добавлением сушат и упаривают. Остаток расти безводного эфира. Полученный хлор- рают со смесью эфир - этанол (9:1), (5 гидрат свободного трипептида (й : =.. отфильтровывают и промывают выше=0,23) растворяют в 20 мл смеси хло" . указанной .смесью. роформ .- диметилформамид (5: 1), до- -:25 Получают 2,7 г (263 от теоретибавляют триэтиламин до рН 8 и 4,0 г . ческого выхода в расчете на гистидин) (10 ммоль) пентафторфенилового эфи . Вос-Агд(ИО2)-Ча1-Tyr(Bzl)-lie-His(Dnp) ра БОК"изолейцина..Раствор выдержи" . Pro-Thr-ОМе. Т.пл. 190-195 С (разловают 30 мин при рН 8, обрабатывают.. жения); R 41-0,47.

Остаток растирают с гексаном и от- :-30 Стадия 2. Z-OGEy-Arg(N02)-Valфильтровывают. Tyr(Bzl) вЂ” tlе-Нis(Dnp)-Pro-Thr-ОИе.

Полученный защищенный тетрапептид " :1,7 r (1,4 ммоль)Ьос-Аrg(NO>>-×àl(R<=0,45) растворяют в 15 мл 8 í. -Tyr(Bzl)-Ile-His(Dnp)-Pro-Thr-OMe раствора соляной кислоты в диоксане растворяют в 10 мл 8 н. раствора и через 15 мин осаждают продукт до- . соляной кислоты в диоксане через

1 бавлением безводного эфира. Полу- 15 мин осаждают продукт добавлением ченный хлоргидрат.,свободного тет- безводного эфира. Продукт отфильтро(s рапептида (R 0,25) растворяют e: вывают и промывают эфиром. Получен30 мл диметилформамида, добавляют ный хлоргидрат свободного гептапептриэтиламин до рМ 8 и 2,05 r 4О тида (К =0,21) растворяют в 20 мл

<э (3,8 ммоль) пентафторфенилового эфи-: диметилформамида, добавляют триэтилра 0-бензил-тирозина. Раствор,выдер- амин до рН 8 и 0,82 г (2,1 ммоль) живают 30 мин при рН 8, упаривают, пентафторфенилового эфира Z-OGly. остаток растворяют в этилацетате. - вЂ” Раствор выдерживают 30 мин при

К полученному раствору добавляют рН 8 разбавляют 40 мл хлороформа 45

0,11 мл М,N-диметиламиноэтиламина и - промывают 1 н. раствором соляной через 15 мин раствор обрабатывают. - кислоты и водой, сушат .и упаривают.

Остаток растирают с безводным эфи- Остаток растирают с безводным эфиром и отфильтровывают. Полученный за. ром и отфильтровывают. щищенный пентапептид (R>=0,57) ра- Получают 1,6 г (874 от теоретистворяют в 10 мл 8 н. раствора соля- ческого) метилового эфира защищен 50 ной кислоты в диоксане. Через 15 мин ного октапептида Z-OGly-Arg(NO )2 продукт осаждают добавлением безвод" . Val-Tyr(Bzl)-l le-His(Dnp)-Pro-Thrного эфира, отфильтровывают и промы» ONe. T.пл. 188-194 С; R4L0,43.-вают эфиром. . < Стадия 3. Удаление защитных

Полученный продукт (8 =0,27) ра- 55 групп. створяют в 20 мл диметилформамида, 1,6 r (1,2 ммоль)2-Sar-1-OGlyдобавляют триэтиламин до рН 8 и Al g(N02) -Ча 1-Tyr(Bzl) -1 E e-His(Dnp)1,75 г (4,5 ммоль) пентафторфенилово. Pro-Thr-ОМе растворяют в 5 мл димеI

104103

13 тилформамида, добавляют 3,8 мл

2-меркаптоэтанола.Через 1 ч продукт осаждают добавлением безводного эфира. Продукт отфильтровывают и промывают эфиром, растворяют в метаноле 5 и осаждают добавлением эфира.

Получают 1,3 г (9М от теоретичес кого) Z-0Gly-Arg(N02 ) -Vol-Tyr(Bzl)(4> . (5J

I }е"H I s-Pro"Thr-ОМе. R<0,,35; R == .

mmP 72 10

Полученный продукт растворяют .в смеси метанол - уксусная кислотавода(5:1:1), добавляют 0,6 г 103-ного палладия на активированном угле и при интенсивном перемешивании пропускают в течение 17,ч водород. 3а.-тем катализатор отфильтровывают, фильтрат упаривают. Остаток смешивают с водным этанолом и упаривают.

Операцию повторяют несколько раз. Ос- 2о таток растирают с эфиром, отфильтровывают и промывают эфиром, Получают 0,64 r метилового эфира (0Gly Thr )-ангиотензина 11, который очищают как описано выше.

Конечный продукт имеет следующие характеристики: Р вЂ” 0,22„ к< 0,73; =0,56.

Аминокислотный анализ: Thr 0,92(1)

Pro 1,03 (1); Ча1 1„0 (1); 11е 1,5(1); зо

Tyr 0,7 (1); His 1,0 (1), Arg 1,0 (1) Пример 6. Метиловый эфир (Sar", А1а ) -ангиотензин 11.

Стадия 1. Z-Sir-Arg{NO>) "Va)Tyr (Bz1) -11е-Н i s (Dnp) -Pro-А lа-ОМе.

0,7 г (5 ммоль) хлоргидрата метилового эфира аланина растворяют в 20 мл хлороформа, добавляют 0,7 мл триэтиламина и 1, 14 г (3 ммоль) пентафтор" фенилового эфира БОК-пролина. Раствор. выдерживают при постоянном рН 30 мин и .обрабатывают как описа, но выше. олученный защищенный дипептид (Р =0,61) растворяют в 5 мл г

8 н. раствора соляной кислоты в диоксане, через 10 мин. разбавляют безводным эфиром и упаривают. Полученный хлоргидрат свободного дипептида (Р =0,32) растворяют в 20 мл хлороформа, добавляют триэтиламин до рН 8 и 2,7 г (4,5 ммоль) пентафторфенилового эфира БОК-И динитро" фенилгистидина. Раствор выдерживают

1 ч при рН 8, добавляют 0,33 мл й,й-диметиламиноэтиламина и через

l5 мин обрабатывают, сушат и упаривают. Полученный защищенный трипептид (d 0,27) растворяют в 10 мл

0 14

8 н. раствора соляной кислоты в диоксане, через 15 мин осаждают продукт добавлением безводного эфира. Полученный хлоргидрат. свободного трипеп тида (Р =0,48) отфильтровывают, (9 I промывают эфиром и растворяют в смеси хлороформ .- диметилформамид (2:-1), добавляют триэтиламин до рН 8 и

2,4 г,(6 ммоль) пентафторфенилового эфира БОК-изолейцина. Раствор выдерживают 30 мин при рН 8 и упаривают

Остаток растворяют в этилацетате и полученный раствор обрабатывают как описано выше, сушат и упаривают.

Остаток растирают со смесью эфиргексан (1:9) и отфильтровывают. По(21 лученный защищенный тетрапептид (Р =

0,29) растворяют в 10 мл .8 н, раствора соляной кислоты в диоксане и через 10 мин осаждают продукт добавлением безводного эфира. Полученный хлоргидрат свободного тетрапеп (Я тида (Р =0,67) отфильтровывают, промывают эфиром, растворяют в смеси хлороформ вЂ” диметилформамид (2:1), прибавляют к раствору тризтиламин до рН 8 и 1,78 г (3,3 ммоль> пентафторфенилового эфира БОК-0-бензил-тирозина. Раствор выдерживают

15 мин при рН 8 и упаривают. Остаток растворяют в этилацетате и раствор обрабатывают, сушат и упаривают. Остаток растирают с безводным эфиром и отфильтровывают. Полученный защищенный пентапептид (Р -0,33) раст. воряют в 10 мл 8 н. раствора соляной ь кислоты в диоксане и через 10 мин осаждают продукт добавлением безвод.ного эфира. Полученный хлоргидрат свободного пентапептида.отфильтровывают и растворяют в 20 мл диметил- . формамида, добавляют триэтиламин до рН 8 и 1,55 r (4 ммоль) пентафторфенилового эфира БОК-валина. Раствор выдерживают 1 ч при рН и упари- . вают. Остаток растворяют в хлороформе и раствор обрабатывают сушат и упаривают. Остаток растирают с беэвод-. иым эфиром и отфильтровывают. Полу / (2! ченный защищенный гексапептид (к =

0,35) растворяют в 8 мл 8 н. раствора .соляной кислоты в диоксане и че рез 20 мин осаждают продукт добавле" нием безводного эфира. Полученный хлоргидрат свободного гексапептида (4<0 75) отфильтровывают, промывают эфиром, растворяют в 20 мл диметилформамида, добавляют триэтиламин ,до рН 8 и 2,64 г (6 ммоль) пентафтор45

1О4!О фенилового эфира БОК-М -нитроаргинйна

Раствор выдерживают I ч при рН 8, разбавляют 60 мл хлороформа,обрабатывают, сушат и упаривают. Остаток растирают со смесью этанол - эфир 5 (1:3),1отфильтровывают и промывают.

Полученный защищенный гексапептид (R =0,35) растворяют в 10 мл 8 н. раствора соляной кислоты в диоксане, через 15 мин осаждают продукт добавлением безводного эфира. Полученный хлоргидрат свободного гептапептида (R =0,15) отфильтровывают, промывают эфиром, растворяют в 20 мл диметилформамида, добавляют триэтиламин 15 до рН 8 и 1,27 r (3,3 ммоль) пентафторфенилового эфира Z-Sar.

Раствор выдерживают 15 мин при рН 8, разбавляют 60 мл хлороформа и обрабатывают,.сушат и упаривают. : 20

ОстатЬк растирают с-25 мл этанола, отфильтровывают и промывают.этанолом;

Получают .1,37 г (333 от теоретического выхода в расчете на пролин).

Z-Sar-Arg(NO )-Va1-Tyr,(Bzl.)-Ile- 25

His(Dnp)-Pro-Ala-OMe. T.ïë. 192-196 С

Стадия 2. Удаление защитных групп»

1,37 г (1 ммоль) Z-Sar -Arg(NO>)VaI Tóã(8zl)-tlе-His(Dnp)-Pro-Аlа- ; 30

ОИе растворяют в 3 мл диметилформамида, добавляют 1,9 мл 2-меркапто" этанола и через 1 ч добавляют безводный эфир. Выпавший продукт отфильтровывают и промывают эфиром. 35

Получают 1,2 r (99 от теоретического) Z-Sar-Arg(NOz)-Чаl-Tyr(Bz 1)

Ile-His-Pro-Ala-OMe (Я(410 .20) ф е

Полученный продукт растворяют в 20 мл смеси метанол - уксусная 40 кислота вЂ” вода (5:1:1), добавляют

0,6 г 103-ного палладия на активированном угле и при интенсивном перемешивании в течение 20 ч пропускают водород. Затем катализатор отфильтровывают, фильтрат упаривают. Ос" таток смешивают с водным этанолом и упаривают. Операцию повторяют несколько раэ. Остаток растирают со смесью этанол вЂ” эфир (1: 1) и отфильтровывают.

Получают 0,7 г (753 от теоретического) метилового. эфира (Sar", А1ав)-ангиотензина 11, который очищают как описано выше.

Конечныи продукт имеет следующие характеристики: В =0,23 RID 0,54;

Аминокислотный анализ: His 0р97(1), Arg 1,03 (1); Pro 1,06 (1); Val 1,03 (1) . 1 le 0,98 (1); Tyr 0,6 (1); Sar 1, 0 (1)

Описываемые метиловые эфиры октапептидов общей формулы изучены как антагонисты природного гормона ангиотензина 11, Антагонистическое действие новых соединений общей формулы (I ) исследуют на наркотизированных котах. При исследовании блуждающие нервы живот" ных подрезают на обеих сторонах шеи и после блокирования нервных узлов вводят животным гипертензии ("Ciba") путем вливания со скоростью

0,5 г/кг/мин. После стабилизации повышенного кровянного давления жи-

1 вотному вводят внутривенно или под- кожно исследуемое вещество в физиологическом растворе и измеряют вы" званное введением вещества уменьшение кровяного давления. Снижение кровяного давления регистрируется в миллиметрах ртутного столба и в процентах начального значения давления, измеренного до введения исследуемого вещества. Под продолжительностью действия отдельных исследован" ных .соединений понимается время до момента значительного понижения кровяного давления (Р=, 53). Для сравнения приведены данные, полученные при использовании известного антагониста ангиотензина 11 - сарализина (1-(й-метилглицин)-5-L- âàëèí, 8-аланин)-ангиотензина 11) в тех же условиях. .Полученные результаты представлены в таблице.

Из таблицы следует, что предлагаемые соединения при внутривенном .eee" дении существенно снижают кровяное давление.

При подкожном введении метиловые эфиры октепептийое общей формупы (II также проявляют способность снижать экспериментально вызванное повыше,1 ние. кровяного давления.

Укаэанные соединения могут найти применение в терапии как средства, понижающие кровяное давление.

1041030

Продолжительность, мин

Изменение кровяного давления при внутривенном введении, Доза

Исследуемое вещество

Метиловый эфир

11е8) -ангиотензина 11

Метиловый эфир (Sar ", A1à Е) -ангиатензина 11

Метиловый эфир (аг", Thr (M 8)

-ангиотенэина 11

Метиловый эфир (0G1y I le 8) ан гиотенэина 11

Сарализин

Составитель О. Галкин

Техред Т.фанта

Редактор M.Êåëåìåø

Корректор В. Гирняк Заказ 69б1/б0

Тираж 418 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москв@, Ж-35, Раушская наб., д..4/5

Филиал ППП "Патент", r. Ужгород, ул. Проектная, 4