Способ удаления цианэтильной защитной группы с производных монои динуклеотидов

Способ удаления цианэтильной защитной группы с производных монои динуклеотидов

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

СПОСОБ УДАЛЕНИЯ ЦИАНЭТИЛЬНОЙ ЗАЩИТНОЙ ГРУППЫ С ПРОИЗВОДНЫХ МОНОИ ДИНУКЛЕОТИДОВ общей формулы ОО IIII R-d(К О-Р-О ) О-Р-О-СН СНjCN, I OR OR где N - защищенный по гетероциклическому ядру нуклеозид,R - монометркситритильная или диметокситритильная 5-0защитная группа; хлорфенильная группа; или 1 путем обработки их органическим основанием в среде органического растворителя , отличающийся тем, что, с целью интенсификации процесса, в качестве органического основания используют 2%-ный раствор пентаметилгуанидина в безводном диок .сане.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗО6РЕТЕНИЙ ИОТНРЫТИЙ

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 3362826/23-04 (22).04.12.81 (46) 15.09.83. Бюл. Р 34 (72) А.Н.Синяков и С.Г.Попов (71) Всесоюзный научно-исследователь- ский институт молекулярной биологии (53) 547.963.3.07(088. 8) (54)(57) СПОСОБ УДАЛЕНИЯ ЦИАНЭТИЛЬНОЙ

ЗАЩИТНОЙ ГРУППЫ С ПРОИЗВОДНЫХ МОНОИ ДИНУКЛЕОТИДОВ общей формулы

0 0 и + II

К вЂ” d(W 0 — Р— 0 ) М вЂ” 0 — Р-0 — СН СН СИ

Ь 2 2

0R 09, „„SU„„1041547

3 l) <, 07 Н 21/04 // A 61 К 49/00 где М" — з ащище н ный по гетер оци кличе скому ядру нуклеозид;

R — мснометокситритильная или диметокситритильная 5 -01 защитная группа; хлорфенильная группа > п=О или 1 путем обработки их органическим основанием в среде органического растворителя, отличающийся тем, что, с целью интенсификации процесса, в качестве органического основания используют 2Ъ-ный раствор пентаметилгуанидина в безводном диок.сане.

1041547

Изобретение относится к химическому синте зу фрагментов нуклеиновых кислот, а именно к усовершенствованному способу удаления концевой цианэтильной защитной группы фосфата с производных моно- и динуклеотидов и бще и формулы

R — a(N 0 — P -O) И"-0 — р — Π— СИ СН Сц, П

ОР ОР (1)I 10 где N" — з ащищенный по гетероцикличе скому ядру нуклео з ид;

R — монбметокситритильная нли диметокситрнтильная 5 -Оз ащит н ая группа; . R — хлорфенил ь н ая группа, n=0 или 1.

Известен способ удаления циан. этильной защитной группы, основанный на обработке производных моно- и 20 олигонуклеотидов растворами неорганических оснований в безводных и водных органических растворителях.

Однако этот способ может привести к частичному удалению других защнтных25 групп и гидролизу лабильных связей, поэтому требует хроматографической очистки целевого продукта

Наиболее близким к предлагаемому по технической сущности и достигаемсг.30 му положительному эффекту явЛяется способ удаления цианэтильной группы, заключающийся в обработке моно- и олигонуклеотидов формулы (I) органическим основанием в среде органического растворителя. 50%-ный раствор триэтиламина в ацетонитриле. Выход— количественный. Время проведения .процесса 1 ч при комнатной температуре.

Недостатком этого способа являет(ся продолжительность процесса.

Цель изобретения — интенсификация процесса.

Поставленная цель достигается 45 тем, что согласно способу удаления цианэтильной защитной группы с производных моно- и динуклеотидов общей формулы (I) путем обработки их органическим основанием в средне органи" ческого растворителя, в качестве арганического основания используют

2%-ный раствор пентаметилгуанидина

s безводном. диоксане.

Выход количественный. Время проведения процесса 3 мин. 55

Пример 1. Получение 5 -0-диI метокситритил-Я-бензоилдезоксицитидин-3" -О- (п-хлорфенил f,ôoñôàòà.

К 40 мкмоль 5 -0-диметокситритил-N-бензоилдезоксицитидин-3 -0-(n-хлор.60 ( фенил) цианэ(тилфосфата в 1 мл безводного диоксана добавляют 20 Мкл чистого пентаметилгуанидина. Смесь выдерживают при комнатной температуре

3 мин и упаривают в вакууме. Выход. полученного хроматографически чистОго продукта количественный. Продукт анализируют методом жидкостной хроматографии на силанизированном сили- кагеле в системе 30-60%-ный водный ацетонитрил в 0,05 M ацетате триэтиламмония.

П р и и е р 2. Децианэтилирование полимер-5 -0-диметокситритилдезокси-! тимидин-3 -0- (n -хлорфенил) цианэтил- ( фосфата.

К 200 мг полистирольного полимера, содержащего 40 мкмоль ковалентно свя(/ занного 5 -0-диметокситритилдезок- ситимидин-3 -О-(n -хлорфенил)цианэтилфосфата, добавляют 1 мл безводного диоксана, дегазируют раствор и прибавляют 20 мкл чистого пентаметил-, гуанидина. Через 3 мин полимер отфильтровывают. Для проверки полноты децианэтилирования полимер-нуклеотид обрабатывают. 1%-ным раствором трифторуксусной кислоты в хлороформе (2-20 мл, 2 мин), промывают диоксаном (3 ° 10 мл). Объединенные вытяжки упаривают, растворяют в 10 мл 10Ъ-ного диоксана и хроматографируют на силанизированном снликагеле в системе

15-50%-ный водный ацетонитрил в

0,05 M ацетате триэтиламмония. Выход дезокситимидин-3 -О-(n -хлорфенил)фосфата количественный..

П р и и е р 3. Получение 5 -0-мо( нометокситритилдезокситимидилил (3 - 5 )дезоксимитидин-3 -0-(n-хлор4фенил Jфосфата.

" . K 40 мкиоль 5 -О-монометокситри( тилдезокситимидилил(3 -» 5 ) дезокситимидин-3 -0-((»-хлорфенил)цианэтилфосфата в 1 мл безводного дис ксана прибавляют 20 мкл чистого пентаметилгуанидина. Реакционную смесь выдерживают при комнатной температуре.

3 мин, разбавляют 20 мл 0,05 М ацетата триэтиламмония и анализируют методом жидкостной хроматографии .в системе 30-60»»-ный водный ацетонитрил в 0,05 M ацетате триэтиламмония.. Вы4. од продукта децианэтилирования колиественный.

Пример 4. Децианэтилирование

5 -0-диметокситритилдезоксицитидилил (3 - 5 )дезоксиаденозин-3 -О-(n-хлорфенил)цианэтилфосфата.

Смесь 30 мкмоль 5 -О-диметокситритилдезоксицитидилил(3 + 5 ) дезоксиаденозин-3 -О-(n -хлорфенил)цианэтилФС»сфата, 0,75 мл безвсщного диоксайа и 15 мкл чистого пентаметилгуанидина выдерживают 3 мин, разбавляют 20 мл

0,05 М ацетата триэтиламмония и хроматографируют на силанизированном си-. ликагеле в системе 30-60%-ный водный ацетонитрил в 0,05 M ацетате фнюэтиламмония.. Выход 5 -0-диметокситритнлдезоксицитидилил (3 -+ 5 )дезоксиаденозин-3 -О-(n-хлс(рфенил)фосфата 98,7%. 1041547.Составитель Г.Пальмбах

Редактор II.Киштулинец Техрад С.Мигунова Корректор B.Гирняк

Заказ 7059/25 Тираж 387 Подпи сное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д.4/5

Филиал ЛПП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4

П р. и м е р 5.. Получение 5 -0- диметокситритилдезокситимидилил(3 - 5 ) дезоксигуанозин-3 -0-(n -хлорфенил) ( фо сфата.. 30 мкмоль 5 -0-диметокситритилде- 5 зокситимидилил (3 -+ 5 ) дезоксигуанозин-3 -0-(ri-хлорфенил)цианэтилфос фата растворяют в 0,75 мл безводного диоксана, прибавляют 15 мкл чистого пентаметилгуанидина, выдерживают

3 мин и анализируют методом жидкостной хроматографии в системе 30-60%ный водный ацетонитрил в 0,05 N ацетате триэтиламмония. Выход продукта децианэтилирования количествейный..