3-(2-морфолиноэтилтио)-1,2,4-триазино[5,6-в]индола дигидрохлорид, обладающий противовоспалительной активностью с противогипоксическим действием

3-(2-морфолиноэтилтио)-1,2,4-триазино[5,6-в]индола дигидрохлорид, обладающий противовоспалительной активностью с противогипоксическим действием

Реферат

 

3-(2-Морфолиноэтилтио)-1,2,4-триазино[5,6-b]индола дигидрохлорид формулы обладающий противовоспалительной активностью и противогипоксическим действием.

Изобретение относится к новому биологически активному соединению, а именно к 3-(2-морфолиноэтилтио)-1,2,4-триазино[5,6-b]индола дигидрохлориду формулы I (препарат N 57) обладающему противовоспалительной активностью и противогипоксическим действием. Указанные свойства позволяют предполагать возможность применения этого соединения в медицине. В медицинской практике в качестве противовоспалительного препарата находит применение 1-(п-хлорбензоил)-5-метокси-2-метилиндол-3-уксусная кислота (индометацин) [1]. В качестве вещества, обладающего противогипоксическим действием, известен гутимин [2]. Целью изобретения является расширение арсенала средств воздействия на живой организм. Эта цель достигается соединением формулы I, обладающим противовоспалительной активностью и противогипоксическим действием. Способ получения соединения формулы I заключается во взаимодействии 3-меркапто-1,2,4-триазино[5,6-b] индола с гидробромидом 2-морфолиноэтилбромида в присутствии избытка щелочи и выделении целевого продукта в виде дигидрохлорида. Пример 1. К раствору 30 г (0,149 моль) 3-меркапто-1,2,4-триазино[5,6-b] индола в 360 мл 1 н. раствора едкого натра постепенно прибавляют при перемешивании раствор 43,2 г (0,157 моль) гидробромида 2-морфолиноэтилбромида в 120 мл воды. По окончании добавления выпадает мелкий желтый осадок. Суспензию оставляют при комнатной температуре на ночь, выливают в 1 л воды и фильтруют. Осадок промывают водой (2 х 36 мл) и сушат в вакууме над фосфорным ангидридом. Получают сырое основание 3-(2-морфолиноэтилтио)-1,2,4-триазино[5,6-b] индола в виде грязно-желтого порошка, выход 36,8 г (78,5% от теор.). Основание (34,7 г) смешивают при кипении с 18,8 мл концентрированной соляной кислоты, 40 мл изопропилового спирта и 38 мл воды и быстро фильтруют. После остывания до 20^oC выдерживают в холодильнике в течение ночи, выпавший осадок отфильтровывают, промывают изопропиловым спиртом (2 х 5 мл), эфиром и сушат при 100^oC. Выход при превращении основания в дигидрохлорид составляет 76,2%. Таким образом, общий выход сырого дигидрохлорида составляет 59,8%. После перекристаллизации из смеси изопропилового спирта и 0,5 н. соляной кислоты 1: 1 (3,02 мл/г) получают дигидрохлорид в виде ярко-желтого кристаллического вещества, т.пл. 241^oC (вносят в прибор при 230^oC). Выход при перекристаллизации 86,4%. Найдено, %: C 45,99; 46,07; H 5,20; 5,30; Cl 18,51; 18,65; N 18,44; 18,48; S 8,53; 8,39. C₁₅H₁₉Cl₂N₅OS. Вычислено,%: C 46,39; H 4,93; Cl 18,26; N 18,03; S 8,26; мол.м. 388. Пример 2. Опыт проводят так же, как в примере 1, но в отличие от него свободное основание превращают в дигидрохлорид действием газообразного хлористого водорода. Раствор 4,5 г сырого основания 3-(2-морфолиноэтилтио)-1,2,4-триазино[5,6-b] индола в 90 мл изопропилового спирта при кипении насыщают газообразным хлористым водородом, охлаждают до 20^oC и выдерживают при этой температуре 2 ч. Выпавший осадок отфильтровывают, промывают изопропиловым спиртом (2 мл), эфиром (2 х 2 мл) и сушат при 100^oC. При этом основание превращается в дигидрохлорид почти количественно. Далее опыт проводят, как указано в примере 1. Ниже приводятся результаты противовоспалительной активности, противогипоксического действия и токсичности соединения формулы I. Острая и хроническая токсичность соединения формулы I. Определение острой токсичности проводились на мышах массой 18-20 г при внутрибрюшинном введении вещества в виде 2%-ного водного раствора; крысам массой 180-190 г препарат N 57 вводили внутривенно. В данных условиях опыта ДЛ₅₀ для мышей составляет 835 мг/кг, для крыс 83 мг/кг. Кролики без летального исхода переносят внутривенное введение вещества в дозе 100 мг/кг. Внутрибрюшинное введение вещества в дозе 40 мг/кг в течение 6 дней мышам не сопровождалось какими-либо видимыми токсическими реакциями со стороны желудочно-кишечного тракта, а также общего состояния животных. Изъявлений слизистой желудка и кишечника отмечено не было. У животных, получавших индометацин, наблюдались диспепсические расстройства и изъявления слизистой желудочно-кишечного тракта. Мыши, которым вводили индометацин в дозе 20 мг/кг, погибли на 3-4 сутки. Ежедневное внутривенное введение крысам, кроликам и собакам препарата N 57 в дозе 10-15 мг/кг в течение 30 дней не сопровождалось изменениями в общих анализах крови и мочи, не наблюдалось также изменений в показателях трансаминаз, щелочной фосфатазы, холестерина, билирубина, остаточного азота, креатинина, глюкозы, натрия, калия и хлора, определяемых в сыворотке крови кроликов и собак. Установлено, что испытанное вещество не обладает мутагенным действием на хромосомный аппарат мышей. Противовоспалительная активность соединения формулы I. Противовоспалительное действие препарата N 57 изучалось на крысах-самцах массой 180-200 г на моделях асептического воспаления по методу ватная гранулема и термического ожога, а также на мышах массой 18-20 г на модели отека легких, вызванного подкожным введением адреналина гидрохлорида в дозе 5 мг/кг. Данные, полученные при введении изучаемого, соединения, сравнивалась с контролем и с результатами, полученными при использовании индометацина. При изучении влияния вещества на экссудативные и пролиферативные компоненты асептического воспаления по методу ватная гранула его вводили в дозах 10, 40 и 80 мг/кг в виде 1%-ного водного раствора с лечебной целью и в дозе 40 мг/кг использовали по схеме для лечебного и профилактического назначения. В первой серии экспериментов изучаемое вещество вводили в течение трех дней после операции, в второй - три дня до операции и три дня после. В конце опыта животных забивали, гранулемы взвешивали и высушивали до постоянной массы. Опыты проводились в сравнении с индометацином, который вводили внутрибрюшинно в 2,5%-ном растворе натрия карбоната в дозе 1 и 20 мг/кг. Препарат N 57 в дозах 10, 40 и 80 мг/кг значительно снижает образование жидкости и разрастание грануляционной ткани. Наиболее активно вещество в дозе 80 мг/кг. Изучаемое соединение, вводимое с лечебной целью в дозе 10 мг/кг, снижает образование жидкости во влажной гранулеме в 2 раза; в дозе 40 мг/кг - в 2,2 раза, а в дозе 80 мг/кг - в 2,8 раза. Вещество существенно влияет на пролиферативные компоненты асептического воспаления. В дозе 10 мг/кг образование грануляционной ткани снижается в 1,8 раза; в дозе 40 мг/кг - в 1,9 раза, а в дозе 80 мг/кг - в 2,9 раза в сравнении с контролем. При лечебном и профилактическом применении вещество в дозе 40 мг/кг снижает образование жидкости во влажной гранулеме в 1,5 раза, а разрастание соединительной ткани в 1,6 раза. Действие индометацина на указанные показатели определить на удалось, так как после 3-4-кратного введения препарата в дозе 20 мг/кг животные погибли от развившегося перитонита. На модели термического ожога о развитии воспаления судили по увеличению объема конечности после погружения ее на 1 мин в воду, нагретую до 51^oC. Объем конечности определяли онкометрически через 0,5; 1; 2; 4 и 24 ч. Объем конечности до ожога принимали за 100%. Вещество вводили однократно за час до ожога. Для сравнения был поставлен эксперимент на животных, которым вводили индометацин в дозе 20 мг/кг. Установлено, что изучаемое вещество в дозе 20 мг/кг обладает противовоспалительной активностью. Эффект проявляется через 0,5 ч после введения и сохраняется в течение 24 ч после моделирования термического ожога. Максимум прироста объема конечности наблюдается через 24 ч и составляет в контроле 393,7 46,6% от исходной. У животных, защищенных препаратом N 57, этот показатель равняется 196 10,5%, т.е. прирост объема конечности в опыте в 2 раза меньше, чем в контроле. При моделировании "адреналинового отека легких" также выявлено противовоспалительное действие вещества в дозе 20 мг/кг. Заключение о развитии воспаления делали по величине коэффициента отека легких, который представляет собой отношение массы легких в граммах к 100 г массы животного. Вещество вводилось внутрибрюшинно однократно за час до начала опыта. Отек легких вызывали подкожным введением раствора адреналина гидрохлорида в дозе 5 мг/кг. Установлено, что на фоне изучаемого вещества и индометацина (20 мг/кг) увеличение легочного коэффициента соответственно составило 32 и 63%. Иначе говоря, воспалительные изменения в ткани легкого животных при введении им препарата N 57 были в 2 раза меньше, чем у животных, получавших индометацин. Таким образом, установлено, что изучаемое соединение формулы I обладает выраженным противовоспалительным действием, превосходящим по активности индометацин. Отмечено, что при длительном введении вещества, в отличие от индометацина, не наблюдается отрицательного действия его на желудочно-кишечный тракт животных. Противогипоксическая активность соединения формулы I. Оценка противогипоксической активности объекта производилась на мышах, крысах и кроликах при моделировании гипоксической, циркуляторной и гистотоксической гипоксии. Гипоксическая гипоксия создавалась в барокамере с приточно-вытяжной вентиляцией. Подъем на высоту осуществлялся по следующей схеме: за первую минуту до 5000 м, в последующем 1000 м/мин. Мыши поднимались до 11 км, крысы - до 12 км, кролики - до 10,5 км. Циркуляторная гипоксия создавалась посредством 2-сторонней перевязки (и обязательной перерезке) каротид; гистотоксическая - подкожной инъекцией мышам цианистого калия в дозе 15 мг/кг. Всем группам контрольных животных инъецировался физиологический раствор. Опыты выполнены на мышах обоего пола массой 18-22 г, на крысах массой 150-170 г и кроликах массой 2-2,1 кг. Противогипоксическая активность препарата N 57 оценивалась по выживаемости и длительности жизни животных в условиях разреженной атмосферы, а также при других формах гипоксии. Эффективность вещества при гипоксической гипоксии сравнивалась с прототипом (гутимин), противогипоксическая активность которого твердо доказана на различного вида животных [2]. Наблюдение за животными велось в течение 20 мин, так как ранее показано, что мелкие лабораторные животные, пережившие этот срок, приобретают способность к поддержанию жизни на высоте 11 и 12 км длительное время (60, 90 и более минут). Следовательно, 20-минутная экспозиция животных на высоте является вполне достаточной для выявления противогипоксической активности у изучаемого вещества. В результате проведенных опытов установлено, что устойчивость контрольных мышей к пребыванию в условиях высоты очень вариабельна. Часть животных (5-10%) гибнет при подъеме на высоту (9-10 км). Основная масса мышей гибнет на высоте 11 км в течение 3-5 мин. Отдельные особи в состоянии поддерживать жизнь на указанной высоте 10-15 мин. Установлено, что самки более устойчивы к высоте, чем самцы. Описанная закономерность свойственна в определенной степени и крысам. После инъекции препарата N 57 мышам в дозах 2, 10, 25 и 50 мг/кг выживаемость животных соответственно составила 20, 60, 70 и 100% при гибели в контроле всех животных. Оптимальная доза гутимина обеспечила защиту животных на высоте 11000 м в 50% случаев, т.е. активность гутимина в 2 раза ниже, чем у препарата формулы I. Преимущество препарата N 57 выявлено также при введении его мышам в разные сроки до подъема животных на высоту 11000 м. Так, спустя 5, 10 и 15 мин после инъекции препарата выживаемость мышей на высоте соответственно составила 40, 80 и 90%; у гутимина эти показатели соответственно равнялись 30, 20 и 50%. В контроле выживаемости животных не отмечено. Различия в эффективности между препаратом N 57 и гутимином отмечены и по длительности жизни мышей на высоте. Длительность жизни мышей, защищенных препаратом N 57, была выше в 1,6; 3,7 и 1,5 раза, чем у гутимина. Сравнительные опыты на крысах также выявили преимущество препарата N 57. Внутривенное введение изучаемого вещества в дозе 25 мг/кг за час до подъема обеспечило защиту животных на высоте 12000 м в 80% случаев. Выживаемость после гутимина равнялась 40%. Защитный эффект препарата на крысах проявляется при введении его крысам в дозе 1/10 и 1/20 от ДЛ₅₀ за 10 мин до подъема. Выживаемость в этом случае на высоте 12 км соответственно равнялась 40 и 20%. Инъекция гутимина в дозе 1/10 ДЛ₅₀ обеспечила сохранение жизни 20% животных; доза 1/20 ДЛ₅₀ оказалась неэффективной. Длительность жизни контрольных кроликов на высоте 10,5 км равнялась 6,00,7 мин, подопытных 16,21,4 мин (p<0,01).

Формула изобретения

3-(2-морфолиноэтилтио)-1,2,4-триазино[5,6-в]индола дигидрохлорид формулы обладающий противовоспалительной активностью и противогипоксическим действием.