Способ индикации антигена

Способ индикации антигена

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

СПОСОБ ИНДИКАЦИИ АНТИГЕНА путем нейтрализации исследуемого материала набором иммунных сывороток с последующим добавлением диагностикумов , о тличающийс я тем, что, с целью повышения точности индикации антигена, нейтрализацию исследуемого материала осуществляют комплексными сыворотками в разведении 1:50 - 1:100, а в качестве диагностикума используют один комплексный антительный диагностикум .

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИК

3(51), A 61 К 39 00

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР (21) 3376958/28-13 (22) 05.01.82 (46) 15.10.83. Бюл. 9 38 (72) В.A.Шамардин, В.И.Жиглов, И.Н.Боброва, Б.В.Каральник и Й.Ж.Жанузаков (71) Казахский научно-исследовательский институт эпидемиологии, микробиологии и заразных болезней и Казахский научно-исследовательский ветеринарный институт (53) 615.373.3(088.8) (56) 1. Вязов О.В.,Лабораторная иммунология. M., "Медицина", 1967, с, 96-101, „„SU„„1047476 A (54)(57) СПОСОБ ИНДИКАЦИИ АНТИГЕНА путем нейтрализации исследуемого материала набором иммунных сыворо ток с последующим добавлением диагностикумов, о т л и ч а ю щ и йс я тем, что, с целью повышения точности индикации антигена, нейтрализацию исследуемого материала осуществляют комплексными сыворотками в разведении 1:50 — 1:100, а в качестве диагностикума используют один комплексный антительный диагностикум.

1047476

Изобретение относится к медицине и ветеринарии, в частности -к серологической диагностике.

Известен способ индикации антигена с помощью реакции торможения пассивной гемаглютинации (РТПГА ) с использованием иммунных сывороток и гомологичйых 1. антигенных эритроцитарных диагностикумов (1 1.

Однако известный способ характеризуется недостаточной чувствительностью и не обеспечивает точности определения антигенов, а также сло- жен в исполнении, так как возникает необходимость строгого предваритель. ного выбора и контроля адекватности минимальной агглютинирующей дозы для каждой иммунной сыворотки.

Цель изобретения — повышение точности (чувствительности и специфичности ) индикации антигена в исследуемом материале.

Указанная цель достигается тем, что при осуществлении способа путем нейтрализации исследуемого материала набором иммунных сывороток с последующим добавлением диагностикумов, нейтрализацию исследуемого материала осуществляют комплексными сыворотками в разведении 1:50-1:100, а в качестве диагностикума используют комплексный антительный диагностикум.

Способ осуществляется следующим образом.

К последовательным разведениям исследуемой пробы материала .добавляют набор (или комплекс ) известных иммунных сывороток (в разведении 1:50 или 1:100 ), смесь выдерживают в течение 30 мин при 18-20 С и затем в нее вносят идентичный по специфичности иммунным сывороткам антительный (комплексный) эритроцитарный диагностикум. Сущность способа индикации антигена заключается в сочетании однонаправленных (идентичных) по специфичности реагентов (иммунных сывороток- и антительных диагностикумов), а также использования комплексных антительного диагностикума и сывороток.

Комплексный антительный диагностикум должен содержать антитела к любому из антигенов, которые могут находиться в исследуемой пробе.

Комплексные сыворотки составляют таким образом, чтобы индикация антигенов достаточно большого набора специфичностей могла быть осуществлена в минимальном количестве рядов разведений исследуемой пробы.

Сочетание идентичных по специфичности реагенто позволяет значитель но повысить чувствительность реакций, основанных на торможении пассивной гемаглютинации, специфичность (эа счет взаимного контроля набора используемых сывороток, а использование комплексных препаратов позволяет упростить постановку реакции и сократить время получения результатов.

Пример. При лабораторном обследовании на коли -инфекцию проводят поиск антигена ешерихий

-6 наиболее распространенных серогрупп в фекалиях больного ребенка

10 с помощью известного и предлагаемого способов.

По предлагаемому способу готовят 3 одинаковых ряда (вместо 6 по известному способу ) разведений

15 исследуемого экстракта фекалий от

1:2 до 1:256 в объеме 0,25 мл. Ко всем разведениям первого ряда добавляют по 0,25 мл смеси сывороток

020, 026, 055, Ко всем разведениям второго ряда добавляют по 0,25 мл смеси сывороток 0,20, 0111 и 0126.

Ко всем разведениям третьего ряда, добавляют по 0,25 мл смеси сывороток

026, 0126 и 0127. Каждая иэ сывороток в смеси содержится в конечном разведении 1:50 или 1:100. Штативы встряхивают и выдерживают в течение 30 мин при 18-20 С для нейтра25 лизации определяемого антигена. 3атем во все лунки трех рядов вносят по 0,05 мл 2,5Ъ-ного антительного (например, комплексного, содержащего антитела специфичности 020, 026

055, 011, 0126 и 0127) эритроцитарного диагностикума. Штативы

З5 .встряхивают и оставляют на 1,5 ч при 18-25 С.

В таблице приведены результаты исследования пробы фекалий.

40 Результаты реакции по предлагаемому способу учитывают следующим образом. В случае. присутствия в исследуемой пробе антигена (в данном примере Е.copi026) во всех рядах разведений пробы с иммунными сыворотками, не содержащими гомоло.гичных антител (в данном примере

1.

026 ), реакция агглютинации после добавления комплексного антительного

0 эритроцитарного диагностикума положительна в титре, зависящем от количества антигена в пробе (a данном примере до 1:64). В рядах, где содержится гомологичная сыворотка (026),происходит нейтрализация антигена специфическими антителами и после добавления антительного . эритроцитарного диагностикума титр гемагглютинации будет отрицательным, В этом случае результат анализа по60 ложительный, .т.е. обнаружен антиген (в данном примере Е.соСт 026 до разведения 1:64). Если в исследу-. емой пробе антиген отсутствует, то к во всех рядах отрицательные реэуль

65 таты гемагглютинации, следовательно,, 1047476

1,64

020+0111ФО126

Антиген

Е соti.026 обнаружен до разведения исследуемой пробы 1:64

Отрицательный"

Отрицательный

1:64

Предлагаемый (вариант использования набора сывороток ) 020

Отрицательный

026

1:64

055

Антиген

Е соР 926 обнаружен до разведения исследуемой пробы 1:64

1:64

0111

0126

1:64

1:64

0127

Известный

Отрицательный".020

1:8

026

Отрицательный

055

АнтигенЕ соб 026 обнаружен до разведения исследуемой пробы 1:8

0111

То же

0126

0127

Ф

Титр РПГА с антительным диагностикумом.

Торможения реакции не обнаружено.

Разведение исследуемой пробы, где еще обнаружено торможение реакции.

ВНИИПИ Заказ 7793/4 Тираж 713 Подписное

Филиал ППП "Патент", r.Óæãîðîä, ул.Проектная,4 рез уль тат анали з а отрицатель ный, т. е. антиген не обнаружен.

В данном примере, показывакщем воэможность использования как набора, так и комплекса сывороток, чув ствительность индикации антигена по предлагаемому способу в 8 раз выше, чем по известному. Преимуществом предлагаемого способа является также возможность проведения анализа в трех (в данном примере) вместо обязательных шести по известному методу, что значительно упрощает проведение анализа. Следует отметить, что при возрастании числа антигенрв, подлежащих определению и при массовых обследованиях это преимущество еще более увеличивается.

По предлагаемому способу иммунные сыворотки используют в стандартных (1:50 или 1:100) разведениях, а

Предлагаемы (вариант использования комплекс- .020+026+055 ных.сывороток)

026+0126+0127 по известному способу требуются два обязательных сложных предварительных этапа — выбор рабочей (4 гемагглютннирующнх единицы) дозы каждой сыворотки для каждого диагностикума и контроль этой дозы каждым диагностикумом., что усложняет и удлиняет время исследования на

3-3,5 ч.

Таким Образом, предлагаемый спо () соб благодаря сочетанию идентичных по специфичности реагентов (антительных диагностикумов и набора иммунных сывороток) характеризуется более высокой чувствительностью

15 индикации и специфичностью (за счет взаимного контроля результата при использовании комплекса сывороток), а также простотой постановки и быстротой получения результата

;к) анализа.