Способ получения бактериального препарата мацерирующего действия для мочки льна

Способ получения бактериального препарата мацерирующего действия для мочки льна

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ БАКТЕРИАЛЬНОГО ПРЕПАРАТА МАЦЕРИРУЮЩЕГО ДЕЙСТВИЯ ДЛЯ МОЧКИ ЛЬНА, предусматривающий выращивание бектерий CEostridium feesirreym в анаэробных условиях на жидкой питательной среде , содержащей иdтoчник углерода, .сернокислый аммоний в качестве источника азота, источник кальция, хлорное железо и кукурузный экстракт в качестве стимулятора роста, с последующим вьщелениембактериальных спор из культуральноЯ жидкости сущкой и смешиванием полученного концентрата спор с мелом, отличающийся тем, что, с целью увеличения выхода целевого продукта и повышения его качества, в качестве источника углерода используют крахмал и кукурузную муку , а в качёстве источника кальция - природный мел, при содержании компонентов в питательной среде, г/л водопроводной воды: 10-30 , Крахмал 5-15 Кукурузная мука 0,5-1,0 Сернокислый аммоний 3-10 Мел природный (Л 2-10 Кукурузный экстракт 50%-ный раствор 0,16-0,3 мл хлорного железа при этом выращивание бактерий ведут при рН 5,8-7,2 и коэффициенте заполнения среды 0,7-0,9, а выделение спор из культуральной жидкости осуществляют распыл 1тельной сушкой в присутствии 1-2 обм.% хлористо4 СО го натрия.:, сл со СХ)

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

„„SU„„1049538 A

3(5П С 12 N 1/02; С 12 R 1 145

1 списочник изоьг т ния Н ABTOPCHOMV СВИДЕТЕЛЬЕТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ (21) 3409112/28-13 (22) 16.03.82 (46) 23.10.83. Бюл. Р 39 (72) Н. П.Аврова, Ю.М. Возняковская, A.Â.ÕoòÿHîâè÷, Н.П.Шурупова и и Н.С.Дерканосова (71) Всесоюзный научно-исследовательский институт сельскохозяйственной микробиологии (53) 576.8 ° 095.25(088.8) (56) 1.Аврова Н.П. Синтез пектолитических ферментов С1osсгidium fel

sineum и гидролиз ими пектоновых веществ льносоломы.- Прикладная биохимия и микробиология, 1975, Р 11, с. 735.

2. Авторское свидетельство СССР

М 293045, кл. С 12 N 1/02, 1969. (54) (57) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ БАКТЕРИАЛЬНОГО ПРЕПАРАТА МАПЕРИРУЮЩЕРО

ДЕЙСТВИЯ ДЛЯ МОЧКИ ЛЬНА, пРедУсматривающий выращивание бектерий COostгМ1цт Я е 0s irrå п в анаэробных условиях на жидкой питательной среде, содержащей источник углерода, сернокислый аммоний в качестве источника азота, источник кальция, хлорное железо и кукурузный экстракт в качестве стимулятора роста, с последующим выделением бактериальных спор из культуральной жидкости сушкой и смешиванием полученного концентрата спор с мелом, о т л и ч аюшийся тем, что, с целью увеличения выхода целевого продукта и повышения его качества, в качеств е источника углерода используют крахмал и кукурузную муку, а в качестве источника кальция — приро,".ный мел, при содержании компонентов в питательной среде, г/л водопроводной воды:

Крахмал 10-30

Кукурузная мука 5-1 5

Сернокислый аммоний О, 5-1,0

Мел природный 3-1 0

Кукурузный экс трак т 2-1 0

50%-ный раствор хлорного железа 0,16-0,3 мл при этом выращивание бактерий ведут при рН 5,8-7,2 и коэффициенте заполнения среды 0,7-0,9, а выделение спор из культуральной жидкости orуществляют распылительной сушкой в присутствии 1-2 обм.Ъ хлористо го натрия.

1049538

Изобретение относится к техни-ческой микробиологии, в частности к способам производства бактериальных препаратов, и может быть использовано для ускорения мочки льна, повышения выхода длинного волокна и улучшения его качества.

Известен способ получения бактериального препарата путем культиВ1-;рОВания CJ>Oc>t (! Д)() Пт f ЕРЭт П60Г>) j I (.

Недостаком этого способа является низ(<ий выход препарата.

Наиболее близким к изобретению по технической сущности и достигаемому эффекту является способ получения бактериального препарата мацерирующего действия для мочки льна, предусматривающий выращивание бактерий 0Яоз.Ьп-,) ()г- fеРэт r)еегп в анаэробных услов иях на жидкой пита тель кой среде, содержащей источник углерода, сернокисль(й аммоний в качестве истОчника àçîTà, источник кальция, хлорное железо и кукурузный экстракт в качестве стимулятора роста, с последующим выделением бак териалькых сгор из куль туральной жидкости су(ш-. ксй и сме:((ивание>м полученного кон—

ITCH Tðà Tà спор с мелом.

В качестве источника углерода используют сухую картофель ную мезгу, выделение концентрата спор осуществляют сепарированием с последующей калориферной сушкой (2, Недостатки известного способа основной компонент питательной среды (сухая картофельная мезга с содержанием крахмала 50 60Ъ) не вь1пускается заводским c(10.(Обом. г)озить для .рО изводства влажкую мезгу (70-80Ъ-кой влажности) экономически невыгодно.

Кроме того, картофель часто подвергается замораживанию при транс— портировке и заболеваниям при хранении. Ye3Tа из такого карт>эфеля вооб-. ще становится непригодной для выращивания микроорганизмов. ((езга не стандартна по соc òàâó, что также влияет на выход препарата.

Кроме того, применение сепарирования культуральной жидкости при((ттделении спор H.".еГь пе(тп) приводит к гибели 55-б8Ъ спор, так как

И.хе0в1пеип — строгий анаэроб, и воздействие кислорода воздуха на споры приводит к гибели большого их количества.

7»

При этом следующая за сепарирова-. . нием калориферная сушка также вызывает гибель 20-35Ъ спор. Общие потери спор при этом способе производства препарата составляют 80-90Ъ при среднем титре спор в ферментаторе

50-б0 млн. В 1 мл культуральной жидкости, т.е. выход спор в препарате очень низок . 65

ХОда. "=-Л()ВО Э 1)од K ) а И ()Ocr! IC- НИЕ

-- Го К; -rЕ-<),:а, !

10(та=> ле (н.">Я ттелh ) с - .: c>. . т (>> т " . 1 (С г"От- —;> 0110 -..OC," 1,0)(;,.Ч >3кия бак (- r(H:IH.(о j >- f,)- т--::"а(1>эр>и() тю дусм,"; рт ае::.-.el)y вы()а(т ика.:<ие бак терНН !г 7()с) .., г)» () rт), >>r>ñ! пе, -,—. в а (за э э(> .,Иых

;, C iI0-, я < К= j:; —,r(J<.< т !r —, а (с пьт>ой г

Д.Е > ССДЕРХ>< (Ей ИС т0>т - ИК У>!.. IC COT(3

Cr3PH0 1<È СЛЫй аМ >(ОНИ И В:(а ЧЕС В Е ИС тт )Ч, 1 1(Кс: с> 30 d » ИС тОЧ (>т скс >ллем цтс>Я, ХЛОРHoå железо и кукурузi!ый 31<с Tpiê T

В I< )Ч> От",1 B CT>1>,,IУ г>ст TO(>c= 1)OCTc г, 0 с л е (т у ю(тт и(с(в ыд е л е к и ем ба 1<:. е рва.пь11ЬС< CIIOP;(:. Ктглв УР;(т НОй )КИС(< ост(т с ушко:-"- и с":!!: ив а:(ием получе н нс го

К ОКIIЕI; TP -;т : >!QP С 1 .=.!.ОМ ° И:(ОЛЬЗУ

i) Y >)с,к><»„ . ".1 К»«) »3!l у,>Ю,><у "-гав -. Е :.:>3.:":.IСТL " — 11Ксiу"Г !C . :)С . >= . r 1»ЭЛ ПрИ

",>(-!Hr3й — В > а(С- -Е; . "0:Н, -; КаПЬ—

В СДЬI:

) C -30

1 L

>—

0 .-- т)1(;.) т(, (с(Ц > - . 0

2--1 0 а (, (cI. : Р = :. 1 rH (C. D:-

1!С . C ) := .".- : Зс ll ) б — 0 3 м(-Осщт>в= .->rr бак-r=PI и зев

OCÃ rCС >" 3):H>)"- ., С ;)1)т 1 т >-;0(r (r>r>.«OP в .1>)ис !тот -!111 . 1> 2 сб . ::, <)ри<) ГО, 0 а (Э с(;;

: i- — >,»rj;>jw,-:

Г -1 30 с. -(3ËI:1>ОЕ КО ЛИ 1;-- 1>ОСЕВ—

О. (Хатc:pиала . ..С>жЕ ° > Ь >>,с»ЭК «-,ШЕКО

>30 C — О . -. (>Оп>сС:>.:.—, )03 — -- с ЛИ в вс )рас..("(:..т 7-. . (. „--,;,т-,; 2) м .-.. или >

Т Ис(,т .!!)>3i!, " 3;i 3 I: Б 3 Ii>3 ) Е C Tc(. ИЬ т(ых (<.т(>3 TO <,-., .†. 1 )

НроOoñc -ыр- «в= : -i в фер: е 3 а пол к:-) н:" cr (.г) е ) i, (.:- 0 >:::; p! I с >Оеды прт>ме::(из=-.н)(я 1(аи иэб, —.o"-:-:0 (,-,33ëåнии О, 2-0, "(ати, В ripoн =-О-.:с::е paзв;г) -тг банте--рий среда .пот((:<ист(нетсн т ц, .=. УОP=åJ>(.-е -.иЯ среды .эре=> 30-с(8 =i .:---.ращ(гаакия и де тIе т(ере :, I- е-. б — i! — r 1(е;: =,;;;Огнив

Мг) 3?: Юс(с T: —. Icc".а(И< > „:(— М-. ° т ° дсбавляю" .. о,:-==:тый =-..-.риз в колиЧЕСТВЕ ). :: - == 1)рз> т а Ы Ст(:Tc>НИй этих Опера"и -; -ризе", = ы - "абт 2

3ТоТ спОсОб 13(= О.>нет пота>с.ти ri.

С Ухой " ОНI>e HT а > С СО!.. C . ()",--1 с ИЕ!» IOP

8- ). 5 1>(л>эд/) . -;OHii;-т-, -"-;;: т т "ге(1) а т

1049538

20 эуют мелом до содержания спор в ,нем 0,8-1,2 млрд/г.

Выращивание продуцента на предлагаемой среде и применение распылительного способа высушивания повышает жизнеспособность спор, увеличивает срок хранения препарата с 8 мес. до 1-1,5 лет без снижения количества спор и позволяет уменьшить дозу препарата в мочке льна с 1 до 0,5 кг льносоломы. 10

Влияние способа сушки спор И. få( 1 е и гп на сохранение йх титра в препарате показано в табл.3.

Влияние способа получения препарата на мочку льна показано в 15 табл. 4.

Пример 1 . Исходная культура

С6, feCSfheum хранится в ампулах под вакуумом в лиофильно высушенном состоянии.

Для приготовления посевного материала ампулу вскрывают, проверяют на чистоту посевом на мясо-пептонный бульон. Содержимое ампулы с>ь:вают 10 мл стерильной водопроводной воды и засевают по 8,1 об.Ъ в питательную среду, в которой выращивают культуру в анаэробных услов иях 2 сут. при 35-37 С.

Отбродившую культуру выни> ают из термостата, подсчитывают количество 30 спор с помощью камеры Горяева, микроскопируют и используют.в дальнейшем в качестве посевного материала для ферментеров.

Для массового выращивания С0.fef-,35 э1кеип в ферментерах применяется питательная среда следующего состава, г/JI: картофельный или кукурузный крахмал 19 (на абсолютно сухой вес); мука кукурузная 7 (на абсолют- 40 но сухой вес); экстракт кукурузный 4 (на технический вес); мел природный обогащенный б и аммоний

° сернокислый 1. Среда содержит также 0,3 мл 50Ъ-ного раствора хлорного железа и 1 л водопроводной воды.

Стерилизуют в течение 1 ч при 2 ати.

РН после стерилизации 5,8. Коэффициент заполнения среды в ферментере

0,8.

Для засева ферментера используют посевной материал в виде вегетативных клеток в количестве 2Ъ от объема среды в ферментере или в виде спор в количестве О, 1-О, 2Ъ

Выращивание ведут в анаэробных условиях без перемешивания среды при

35-37 С с избыточным давлением в ферментере 0,2-0,4 ати.

В процессе развития бактерий при 60 сбраживании крахмала, выделяются газообразные продукты (CO> и Н2) и среда подкисляется. Для усредне- ния среды через 30 ч выращиванип и далее через каждые б ч необходимо включать мешалку на 0,5 мин. В конце ферментации в 1 мл культуральной жидкости содержится 250-300 млн.спор

СC. f е0s nеum.

Затем в культуральную жидкость добавляют 1 об. Ъ хлористбго натрия и проводят распылительное высушивание.

Сухой концентрат с содержанием спор 8-15 млрдуг размалывают и разбавляют мелом. Количество спор в готовом препарате должносоставлять

0,8-1,2 млрд./r. Полученный сухой препарат расфасовывают в бумажные машк и .

Выход спор в препарате составляет

20-40 Ъ к титру спор в культуральной жидкости.

Пример 2. Для массового вы .ращивания И. feCsineum в ферметерах исполь зов алась п итатель на я среда следующего состава, г/л водопроводной воды: крахмал картофельный или кукурузный 10 (на абсолютно сухой вес), кукурузная мука 5 (на абсолютно сухой вес), кукурузный экстракт 2 (на технический вес),мел природный обогащенный 3 и аммоний сернокислый

О, 5. Среда содержит также 0,1 б мл 50Ъного раствора хлорного железа. Среду стерилизовали в течение 1 ч при

2 ати. рН после стерилизации 5,8-7,2.

Коэффициент заполнения среды в фер" ментере 0,9. !

В конце ферментации в 1 мл культуральной жидкости содержалось 140200 млн. апор "i fefsineum что в

2,8 — 4 раза больше по сравнению с известным способом.

Пример 3. Для массового выращивания Жfeesineum в ферментерах использовалась питательная среда следующего состава, г/л водопроводной во-. ды. крахмал картофельный или кукурузный 30 (на абсолютно сухой вес),кукурузная мука 15 (на абсолютно сухой вес), кукурузный экстракт 1 О (на тех ический вес), мел природный обогащенньй 10 и аммоний сернокислый 1.

Среда содержит также 0,3 мл 50Ъ-ного раствора. Среду стерилизовали в течение 1 ч при 2 ати. рН после стерилизации 5,8-7,2. Коэффициент заполнения среды в ферментере 0,7.

В конце ферментации в 1 мл культу.ральной жидкости содержалось 130200 млн. спор H,fefsineum, что в

2-4 раза больше по сравнению с известныч способом.

Таким образом, предлагаемый способ по сравнению с известным позволяет увеличить содержание спор и культуральной жидкости в 5-б раз, а в готовом препарате — в 4-6 раs.Срок хранения препарата увеличивается с 8 мес. до 1-1,5 лет, а время мочки льна сокращается на 10 ч.

1049538

Та б лица 1

Титр спор в ферментере млн/мл

Количество посевного материала, %

280

220

Споры

200

280

0,1

270

Таблица 2

Варил нт

Выход спор при калориферной сушке, %

Выход спор при распылительной сушке, %

1 5-17

25-30

15-17

17

Сушка

Титр спор через 1,5 года через 8 мес. через 1 год исходный

Калориферная

1,0

1,0

0,820

0,750

Распылительная

1,0

1,0

1,0

1,0.Вегетативные клетки

Без NaCC

С 1% NaCR

С 0,5% NaCC

С 2Ъ NaC

Таблица 3.

1049538

Таблица 4 °

I.Вариант

Доза препарата, кг

Скорость мочки, ч

Ускорение мочки

Контроль (без препарата) 72

Препарат по известному способу

14

1,0

Препарат по предлагаемому способу

24

0,5

Составитель В. Голимбет

Редактор Г. Безвершенко Техред И. Метелева Корректор B. Бутяга

Заказ 8361/28 Тираж 523 П эдп ис ное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д.4/5

Филиал ППП Патент, r.Óæãoðîä, ул.Проектная,4