Способ определения псоралена

Способ определения псоралена

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПСОРАЛЕНА , включающий обработку анализируемой пробы химическим реагентом с .последующим измерением физико-химических параметров полученной смеси, о т л и ч а ю ад и и с я тем, что, с целью пошлиения чувствительности и селективности способа, анализируемую пробу обрабатывают водноспиртовыми растворами брома и гидроокиси аммония, с последующим измерением Флуоресценция полученной смеси. (П С

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (19) (П) А

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ (21 ) 3363033/28-13 (22) 06.08.81 (46 ) 23.10.83. Бюл.939 (72) A.A. Хабаров, О.A. Григорьев, В.П. Георгиевский, Г.A. Дрозд и Л.П. Хабарова (71) Курский государстзенный медицинский институт и Харьковский научно-исследовательский химикофармацевтический институт (53)615.4(088.8) (56) 1. Фармакопейная статья. 42, 9254-72.

2. Фармацевтичный журнал, 1975, 94, с.45-47 (прототип) °

3(51) б 01 и 33 48, G 01 М 21/78 (54 ) (57 ) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ IICOPAJIE"

НА, включающий обработку анализируемой пробы химическим реагентом с последукицим измерением физико-химических параметров получейной смеси, отличающийся тем, что, с целью повышения чувствительности и селективности способа, анализируемую пробу обрабатывают водноспиртовцми растворами брома и гидроокиси аммония, с последующим измерением фпуоресценцив полученной смеси.

1049809

Изобретение относится к клинической биохимии,а именно к способу определения псоралена, и может. быть применено для анализа этого вещества в различных материаЛах для клинических, фармацевтических, санитарных и токсикологических исследований.

Известен способ определения псора-, лена методом нейтрализации после взаимодействия ceo с 0,5 н.спиртовым раствором гидроокиси калия с порошком!0 окиси цинка и нагревании с последую" щим титрованием 0,1 н. раствором серной кислоты в присутствии индикатора фенолового красного f1) .

Недостатками способа являются его 15 низкая чувствительность, так как для определения берут навеску 0,3 r u неиэбирательность, поскольку многие органические соединения определяются методом нейтрализации. 20

Наиболее близким к изобретению по технической сущности и достигаемому результату является способ количественного определения псоралена, включающий обработку анализируемой. 25 пробы химическим реагентом с последующим измерением физико-химических параметров полученной смеси f2) .Недостатки .способа состоят в его низкой избирательности, так как аналогичным образом реагируют фенолы, флавоноиды, оксикоричные кислоты и другие природные соединения,и невысокой точности(относительная ошибка составляет +4%1. Чувствительность способа, позволяющего олределять псорален в чистом виде и только.-после хроматографирования в растительном сырье, составляет 20 мкг/мл.

Целью изобретения является повь|шение чувствительности и селектив- 40 ности способа.

Поставленная цель достигается тем, что согласно способу опреде ления псоралена, заключающемуся в обработке анализируемой пробы хи- 45 мическим реагентом с последующим измерением физико-химических параметров полученной смеси, анализируе" мую пробу обрабатывают водно-спиртовыми растворами брома и гидроокиси 50 аммония с последующим измерением флуоресценции полученной смеси.

Способ осуществляют следующим образом.

Точную навеску.или исследуемый 55 раствор обрабатывают этиловым спиртом доводят этиловым спиртом до метки 100 мп в мерной колбе, аликвоту данного раствора обрабатывают водным раствором брома и гидроокиси 60 аьвюния и исследуемый раствор флуорн метрируют по отношению к стандартному раствору. Подобной реакции не дают близкие ho структуре соединения: кумарин, ксантотоксин, 7-оксикумарин,65 келлин, карбокромен, ксантотоксол и иэопимпинеллин .

Спектр возбуждения флуоресценции полученного раствора находится в об,ласти от 320 до 420 нм с максимумом

383 нм, а спектр излучения флуоресценции от 400 до 540 нм с максимумом

462 нм. Прямолинейная зависимость между интенсивностью флуоресценции и концентрацией псоралена лежит оТ

0,01 до 10 мкг/мл (табл.1.) . "

Зависимость интенсивности флуоресценции псоралена (С=10 мкг/мл) от количества раствора брома и гидроокиси аммония показана в табл.2 и 3. Результаты флуориметрического определения псоралена в таблетках по 10 мг представлены в табл.4.

Интенсивность флуоресценции псоралена после взаимодействия его с бромом и гидроокисью аммония не изменяется

2 ч . чувствительность предлагаемого способа составляет 0,01 мкг/мл.

IT p и м е р 1. Определение псоралена в таблетках по 0,01 г.

Точную навеску (0,05 r) порошка

Мелко измельченных таблеток перено- . сят в мерную колбу на 100 .мл прибав1 ляют 80-90 мл этилового спирта и энергично встряхивают 3 мин ° Затем добавляют этилового спирта до метки.

K 1 мл раствора прибавляют 8,8 мл дистиллированной воды, 0,1 .мл насыщенного водного раствора брома, перемешивают и добавляют 0,1 мл 25%-ного раствора гидроокиси аммония, перемешивают. Флуориметрируют исследуемые растворы по отношению к стандартному раствору с содержанием 5 мкг/мл, для чего к 1 мл стандартного раствора, содержащего 50 мкг/мл псоралена, прибавляют 8,8 мл дистиллированной води, 0,1 мл насыщенного водного раствора брома, перемешивают и прибавляют

0,1 мл 25%-ного раствора гидроокиси аммония. Флуориметрирование проводят одновременно с растворами исследуемых образцов.

Пример 2 ° Определение псоралена в 0,1%-ном растворе псоралена.

Переносят 0,5 мл исследуемого раствора в мерную колбу на 100 мя,прибавляют дистиллированной воды до метки. К 9,8 мл раствора прибавляют

0,1 мл насыщенного водного раствора брома, перемешивают, прибавляют

0,1 мл 25%-ного раствора гидроокиси аммония, перемешивают и флуориметрируют одновременно против стандартного раствора, содержащего 5 мкг/мл псоралена, для чего к 1 мп стандартного раствора, содержащего 50 мкг/мл псоралена, прибавляют 8,8 мл дистиллированной воды, 0,1 мл насыщенного водного раствора брома и 0,1 мл 25%-ного раствора гидроокиси аммония, перемешивают

1049809 и флуориметрируют одновременно с об . раэцами испытуемых растворов.

Результаты флуориметрического определения псоралена в 0,1%-ном растворе на определение взято 0,5.мл 0,1%-.ного ь

:раствора псоралена представлены в табл.5

Пример 3. Определение псора-, лена в лекарственном растении псоралее ° . Мелко измельченные плоды псоралеи ,(2 г) экстрагируют со 100 мл смеси . этилового спирта и хлороформа (3:7), Этот. раствор (0,1 ил) наносят на хроматограмму в тонком слое (закрепленном) силикагеля марки eCS 5/40р 35 13% гипса. Пластинку с нанесенной пробой высушивают на воздухе в течение 10 мин., помещают в камеру с системой растворителей диэтиловый эфир - петролейный эфир - этилаце- 20 тат (9:9:1) и хроматографируют восхо.дящим методом. После высушивания

Концентрация мкг/мл

1 г ) з

Относительная интенсивность флуоресценций (з

0,1

0,2

0,3, 0,4

0,5

0,6

0,7

0,8

17

16 |

30

36

42

3.5

41

53

0,9

1,0

° Ь е

Количество насыщенного раствора . Относительная интенсивность флуоресценции брома, мп бб

0,05

0,10

0,15

0,20

0,25

80 Табл и

0,10

0,15

0,20

0, 01

0,02

0,03

0,04

0,05

0,06

0,07

0,08.

0,09

0,10

1 10

2 16

3 . 22

4 .. .28

5 . 34

6 40

7 47

8 54

9 60

10 67 хроматограмм в течение 5 мин на воздухе, в ультрафиолетовом свете устанавливают локализацию пятна псоралена. Пятно с Й =0,56, отмеченное по стандарту псоралена, количественно переносят в пробирку, пРибавляют

9,8 мп дистиллированной воды, встряхивают и прибавляют 0,1 мл насыщенного водного раствора брома, перемешивают и добавляют 0,1 ил 25%-ного раствора гидроокиси аммония. Флуориметрируют исследуемые образцы по отношению к стандартному раствору с содержанием 0,1;0,5,1,0 и 5,0 мкг/мл псоралена, для чего к 9,8 мл стандартного раствора прибавляют 0,1 мл насыщенного, водного раствора брома, перемешивают и прибавляют 6,1 мл

25%-ного раствора гидроокиси аммо-. ния.

Флуориметрирование проводят одновременно с растворами исследуемых образцов.. !

Таблица

1049809

Продолжение табл. 3

0,25

0,30

63

Таблица 4 авиа

Иетрологические характеристики

Навеска из измельченных Найдено псорален таблеток, мг иг

Х=9,930 о =23 10-3 о =16,92 1.(Г

0=9930+16,92 10

А=+1,70%

Таблица 5

Найдено псоралена, г 10

Ю Ф

Иетрологические характеристики х=99,85 10 б =1,90 ° 10 5.,Я 9 =1,36 10198

6 = (99,85+1,36) - 1У

А= 1,36%

Составитель В. Кузьмичев

Редактор Н; Бобкова Техред Л. Пилипенко Корректор А.Зимокосов

Заказ 8407/41 Тираж 873 . Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открцтий

113035, Иосква, Ж-35, Рауыская наб., д. 4/5

56,1

55,4

55,3

54,0

51,7

51,1

49,7

49,3

48,6

48,2

97,5

98,5:

99,5

98,5

103,0

103,0

101,0

99,5

98 5

99,5

10,130

10,120

10,270

9, 810

9,980

9,920

9,830

9,410

9,820

9,970

Филиал ППП "Патент", г. ужгород, ул. Проектная, 4