Способ получения солей гепарина из материала тканей животных

Способ получения солей гепарина из материала тканей животных

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СОЛЕЙ ГЕПАРИНА ИЗ МАТЕРИАЛА ТКАНЕЙ ЖИВОТНЫХ , включающий обработку мат.ериала тканей, очистку гепариносодержащего продукта и выделение солей гепарина , отличающий ся тем, что, с целью упрощения способа и увеличения выхода солейгепарина, обработку материала тканей ведут путем добавления к пульпе ткани ионообменной смолы с последующим отделением ионообменной смолы от пульпы ткани, а очистку -гепарина ведут путем ионообменного извлечения гепарина из пульпы ткани при |рН 2-12 и .

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (19) (И) 3(Я) A 61 К 31 725

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

IlO ДЕЛАМ ИЗОВРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21 ) 3379342/30-15 (22) 29.12.81 (46) 07.11. 83., Бюл. 9 41 (72) В.Ф.Рассказов,, Г.Е.Лосев, В.В.Баньковский.и В.П.Антонов (53) 547.995(088.8) (56) 1. Патент Франции )) 2342991, кл. С 08 В 37/10,"1978

2. Лабораторный технологический. регламент 9. 25 на производство ге- . парина из слизистой оболочки тонкого кишечника свиней, 1979 (54)(57) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СОЛЕЙ ГЕПАРИНА ИЗ МАТЕРИАЛА ТКАНЕЙ ЖИВОТ-

НЫХ, включающий обработку материала

-тканей, очистку гепариносодержащего продукта и выделение солей гепарина, отличающийся тем, что, с целью упрощения способа и увеличения выхода солей гепарина, обработку материала тканей ведут путем добавления к пульпе ткани ионообменной смолы с последующим отделением ионообменной смолы от пульпы ткани, а очистку гепарина ведут путем ионообменйого извлечения гепарина из пульпы ткани при рН 2-12 и 0-1 0 С.

1052234

Изобретение относится к техноло" гии получения органопрепаратов из животной биомассы и может быть использовано на эндокринных заводах и мясокомбинатах для получения гепарина.

Известен способ производства гепарина, включающий следующие основные технологические операции: консервирование нативной мукозы (замораживание, обработка бисульфитом натрия, сушка); подготовку консервированной мукозы к процессу эк стракции гепарина (дефростация, -. отмывка: замачивание в воде и ðàcòворах щелочей, солей); экстракцию гепарина раствором хлористого натрия (1N) при РН 9,1-9,5. В процессе экстракции гепарина из слизистой оболочки тонкого кишечника свиней реакционную смесь нагреваЮт

10 мин до 50-55 С, выдерживают при

0 этои температуре 20 мин и затем температуру реакционных масс доводят до 95-100 С в течение 10-15 мин.

Охлажденную до 75".80 С смесь сбрао сывают на нутч-фильтр и фильтрацией отделяют экстрагент от скоагулировавшейся мукозы. Жмых мукоэы .на нутч-фильтре промтвают .1М раствором хлористого натрия и присоединяют к экстракту. Экстракт охлаждают, дают отстояться, освобождают от жира и направляют на ионообменное извлечение гепарина, которое осуществляют. в .статических условиях ионообменной смолой APA-N s Cf-форме.

Для этого в 70 л экстракта вводят

3 л анионообменной смолы и.при непрерывном перемешивании выдерживают 18-20 ч; Сорбент фильтруют и отмывают водой на нутч-фильтре. Затем проводят десорбцию гепарина. Отмы- . тую анионообменную смолу загружают в стеклянную колонку и элюируют ге-, парин 2,5 N раствором хлористого натрия при скорости элюирования

50 мл/см ч. Элюат охлаждают до 2-5 С

2 и направляют на выделение.гепарина сырца Щ .

Наиболее близ.ким к предлагаемому является способ производства, гедарина f2), который по своим основным технологическим операциям по вторяет аналог.

Изложенная выше технология asвлечения и производства гепарина обеспечивает выход формакопейного гепариыа 20000-25000 ед/кг сырья при eIo àêòèsaîñòa 130-140 ед/мг.

Известные способы производства гепарина характеризуются многостадийностью технологического процесса обеспечиваЮт получение гепари на-сырца; высокими энергозатратами на процесс нагревания реакционных масср использованием больших количеств солей хлористого аммония, хлорн сто го натрия, натрие вой щелочи, аммиака; использованием ионообменного извлечения гепарина из экстракта от выщелачивания биомассы; длительностью технологического процес"

5 са извлечения гепарина» низким выходом целевого продукта из-эа потерь со жмыхом мукозы и ферментативного разложения гепарина в процессах извлечения.

10 Цель изобретения - упрощение способа и увеличение выхода гепарина, Указанная цель достигается.согласно получения солей гепарина из материалов тканей животных, включа" ющему обработку материала тканей, очистку гепариносодержащего продукта и выделение: солей генарина, обработку материала тканей ведут путем .цобавления к пульпе ткани ионообменной смолы с последующим отделением ионообменной смолы от пульпы ткани, а очистку гепарина ведут путем ионообменного извлечения .гепарина из пульпы ткани при pH 2-12 и 0-1200С.

Пример 1. 200, г заморожен-: ной скоагулированной мукозы влажностью 89,4В после дефростации направ" .ляют. в гомогенизатор. и измельчают.

Измельченную биомассу разбавляют. водой 1:1 и дозируют со скоростью

100 мл/ч в аппарат для..противоточного сорбционного извлечения гепари- на анионитом. РН биомассы в- процес35 се извлечения гепарииа оддер щка- ют в,различных сериях эксперимента на уровне 7,0, а температуру реак- ционных масс.на уровне температуры окружающей среды (20 С}.. Объемный . Расход анионита, транспортируницего

40 в аппарате нротйвотоком биомассе,.: . поддерживайт равным 12 мл/ч. Обра.ботанная биомасса на выходе из. ионо- обменного аппарата практически не содержит гепарина. Иоиит, отмыаъф

45 в специальном отсеке аппарата, направляют в непрерывно действующий противоточный аппарат десорбции.

Десорбцию гепарина ведут 2,5 М .б раствором, хлористого натрия . При щ0 этом объемный расход сорбента поддерживают равным 12 мп/ч, а десорбирующего раствора - 24 л/ч. С целью перечистки гепарина элюат разбавляют вдвое и гепарин повтор-. но сорбируют из водного .Раствора на анионообменной смоле в указанны3с выше условиях. Очищенный гепарин элюируют в режиме концентрирования в аппарате противоточного типа

2,5 N раствором хлористого натрия.

40 Объемный расход ионита поддерживают равным 12 мп/ч, а десорбирующего раствора — 24 мп/ч. Концентрация гепарина в элюате в среднем составляет 152,5 ед/мл. РН элюата уста$5,навливают в пределах 6,0-6,5 и г

3 1052234

ВНИИПИ Заказ 8719/3 Тираж 713 Подписное

Филиал ППП, "Патент", г, ужгород,ул.Проектная,4 фильтруют раствор через мембранный

, фильтр с диаметром пор 0,22-0,45 мк. . Затем гепарин из элюата выделяют высаливанием, для чего элюат охлаждают до 0-50С; добавляют к нему охлажденный до 0-5 С этиловый спирт (96%) в соотношении к элюату 1:1 и оставляют в холодильнике на 1618 ч для отстаивания осадка; осадок. гепарина отделяют на центрифуге, промывают 4 раза этиловым спиртом,, 10 объем которого соответствует объему маточника, и высушивают на воздухе до постоянного веса„ гепарин сушат в сушильном шкафу при 55.60 С. Активность апирогенного гепа3 рина, полученного по приведенной .выше технологии, составляет 170 ед/мг, на выход — 76000 ед. на 1 кг биомассы.

Пример. 2. Получают гепарин как .в примере 1, но РН суспензии 2О животной биомассы поддерживают равным 2,0. Активность полученного апирогенного гепарина составляет

170 ед/мг, а выход 72000 ед на

1 кг биомассы. 25

Пример 3. Получают гепарин как в примере .1, но рН поддерживают равным 12. Активность похГученного

:апирогенного гепарина составляет

170 ед/мг, а выход 78000 ед на 1 кг. ЗО биомассы.

П р и .м е р 4. Получают гепарин как в примере 1, но температуру сускензии животной биомассы подцер.живают равной 0 С. Активность полу-. З5 о ченного апирогенного гепарина со ставляет 165 ед/мг, а выход 72000 ejt на 1 кг биомассы.

Пример 5. Получают гепарин как в примере 1, но температуру сус- 4О пензии животной биомассы и рН поддерживают равными соответственно

О C- и 2 ° Активность апирогенного гепарина и выход соответствуют данным примера 2.

Пример 6. Получают гепарин . 45 как.в примере 5, но температуру суспензии биомассы поддерживают равной 120 С. Активность получен0 ного апирогенного гепарина состав- . ляет 140 ед/мг, а выход 6500 ед,на. $Q

1 кг биомассы.

Пример 7; Получают гепарин, как в примере 1, но температуру и

РН суспензии жйвотной биомассы под,держивают Равными соответственно 55

120 С и 12. Активность полученного апирогенного гепарина составляет 140 ед/мг, а выход 60000 ед на 1 кг биомассы.

Пример 8. 200 г легких крупного рогатого скота измельчают и разбавляют водой в соотношении

1:1. Пульпу водной биомассы дозируют со скоростью 100 мл/ч в аппарат для противоточного сорбционного извлечения гепарина анионитом. рН биомассы в процессе извлечения гепарина поддерживают на уровне 7,0, а температуру реакционных масс — на уровне температуры окружающей среды (около 20 С). Объемный расход анионита, транспортирующегося.в аппарате противотоком биомассе, поддержи- вают равным 12 мл/ч. Обработанная биомасса на выходе из ионообменного аппарата практически не содержит гепарина. Ионит, отмытый в специальном отсеке аппарата, направляют в секцию десорбции того же аппарата.

Десорбцию гепарина ведут 2,5 И раствором хлористого натрия. При этом объеМный расход сорбента подцерживают равным 12 мл/ч,.а десорбирующего — 24 мл/ч. С целью перечистки гепарина элюат разбавляют вдвое и гепарин повторно сорбируют иэ водного раствора на анионообменной смоле в условиях, изложенных выше. Очищенный гепарин элюируют в режиме концентрирования в аппарате противоточного типа 2,5 М раствором хлористого кальция. Объемный расход ионита нодцерживают равным 12 мл/ч, а десорбирующего раствора — 24 мл/ч.

Концентрация гепарина в элюате в среднем составляет 52,78 ед/мг.

Далее процесс выделения кальцие= вой соли ведут так же, как выделение натриевой соли гепарина в примере 1..

Активность апирогенного кальципарина, полученного.по описанной выше технологии, составляет 150 ед/мг, а выход 27000 ед на 1 кг легких крупного рогатого скота.

Предложенное изобретение позволяет увеличить расход гепарина из животного сырья меньше, чем в 2,5 раза и наряду с сокращением затрат на производство гепарина получить с каждого килограмма биомассы дополнительно 300 мг. апирогенного гепарина. Таким образом, при потребнос-. ти страны в гепарине 8,0 10ю ед. в год зкономический эффект от внед- рения предложенного способа состав-: ляет 3,8 млн.руб.