Способ получения аденозин-5-монофосфата

Способ получения аденозин-5-монофосфата

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

1.СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АДЕНОЗИН-5 - МОНОФОСФАТА из мышц рыб, включающий экстракцию сырья водой, фильтрование, сорбцию на анионите с последующей элюцией соляной кислот ,ой, осаждением и проксяванием целевого продукта спиртом, отличающийся тем, что, с целью упрощения способа и повышения чистоты целевого продукта, предварительно проводят экстракцию сырья уксусной кислотой, а после элюции соляной кислотой фракцию, содержащую адвнозин5 -монофосфат, дополннтильно пропускают через активированный уголь, из которого элюируют Целевой продукт раствором подщелоченного спирта, полученный раствор упаривают, подкисляют и осаждают целевой продукт охлаждением раствора и после промывания cnhpTOM осадок высушивают. 2.Способ ПОП.1, отличающийся тем, что элюцию раствором подщелоченного спирта проводят при соотношении спирт I вода: аммиак 25: ( 22-24) :

П9) Ol) COOS СООЕТСНИХ

WINMW . РЕСПУБЛИН

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

flO ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И.ОТНРЫТИЙ

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИф :;:.,:," : (».

К ABTOPCHOMV СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 3279271/28-13 (22) 12.02.81 (46). 07 ° 11.83. Бюл. 9 41 (72) Y.Ä.Kóðñêèé,,В.A ° Tóãàé, Л;М.Эпштейн и И.Й.Пучкина (71) Ордена Трудового Красного

Энамени институт биохимии им. А.В.Палладина и Тихоокеанский научно-исследовательский институт рыбного хозяйства и,океанографии (53) 615 .45:547.857 .7 (56) 1, Авторское снидетельство СССР

9. 207348, кл. С 12 Р 19/32 1967, 2. Анторское свидетельство СССР по заявке 9 3212274/28-13, 25.08.80. (54)(57) 1.СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АДЕНОЗИН-5- — ИОНОФОСФАТА из мышц рыб, включающий экстракцию сырья водой, фильтрование, сорбцию на анионите с последующей элюцией соляной кислотой, осаждением и промыванием целевого продукта спиртом, о т л и ч аю шийся тем, что, с целью упрощения способа и повышения чистоты целевого продукта, предварительно

М50 61 K 35 60 . С 07 Н 19 20 проводят экстракцию сырья уксусной кислотой, а после элюции соляной кислотой фракцию, содержащую аденозинl

5 -монофосфат, дополнительно пропускают через активированный уголь, из которого элюируют целевой продукт раствором подщелоченного спирта, полученный раствор упаривают, подкисляют и осаждают целевой продукт охлаждением раствора и после промывания спйртом осадок нысушинают, 2. Способ по п.l, о т л и ч а ю щ н и с я тем, что элюцию раствором подщелоченного спирта проводят при соотношении спирт вода: аммиак

25з(22-24):(1з3)..

3 ° Способ по п.l о т л и ч а ю шийся тем,что упарннаниеосуществляют до 15-20%-ного содержания целевого продукта.

4. Способ по п.l, о т л и ч а ю шийся тем, что подкисление проIâîäÿT 10-15%-ной соляной кислотой Я до рН 1,75 -1,85.

5. Способ по п.1, о т л и ч а ю шийся тем, что охлаждение проводят при 1-4 С.

1052235

65

Изобретение относится. к биохимии, в частности к способу получения соединений из природных источников, и может быть использовано в медицине и биохимии.

Известен способ получения аденоэин-5 -монофосфата (AMP) из мышц кроликов, в котором после охлаждения мышц. осуществляют экстракцию трихлоруксусной кислотой .и фильтрование экстракта, при рН 8 осаждают адено- 10 эин-З-фосфат,(ATP) с помощью хлористого кальция. Монокальциевую соль

ATP растворяют и гидролизуют до AMP с помощью предварительно полученного

Фермента картофельной апиразы.Из гид-, 15 ролизата AMP осаждают в виде ацетата ртути, который в последующих операциях растворяют в серной кислоте, пропускают сероводород. Осадок сульфида ртути отфильтровывают, а иэ фильтрата после очистки осаждают

AMP с помощью ацетона (1) .

Недостатками данного способа являются использование фермента картофельной апиразы, получение кото- 25 рого требует осуществления дополнительной технологии, многостадийность процесса получения AMP, применение ядовитых веществ: трихлоруксусной кислоты, солей ртути и се-. роводорода использование дефицитных источнйков сырья: мышцы кроликов или говяжьего мяса.

Известен также способ получения аденозин -5 -монофосфата из мышц .рыб, включающий двухкратную водную экстракцию, отделение балластных белков, фильтрование, сорбцию на смоле, BAK с последующей сорбцией аденозиндифосфата и аденозинмонофосфата йа смоле АРО с элюцией соляной кис- 40 лотой, осаждением и промыванием целевого продукта спиртом j2) . .Однако известный способ не обеспечивает выделения целевого продукта достаточной чистоты, поскольку не 45 позволяет получить целевой продукт в чистом виде, а технологический процесс является продолжительным. . Цель изобретения — упрощение способа и повышение чистоты целевого продукта, Поставленная цель достигается тем, что согласно способу получения аденозин -5 -монофосфата из мышц рыб, 1 включающему экстракцию сырья водой, фильтрование, сорбцию на анионите с последующей элюцией соляной кислотой, осаждением и промыванием целевого продукта спиртом, предварительно проводят экстракцию сырья уксусной кислотой, а"после элюции соля- 60 ной кислотой фракцию, содержащую аденозин-5 --монофосфат, дополнитель-! но пропускают через активированный уголь, из которого элюируют целевой продукт раствором подщелоченного

Ф спйрта, полученный раствор упаривают, подкисляют и осаждают целевой продукт охлаждением раствора и после промывания спиртом осадок высушивают.

При этом, элюцию раствором подщелоченного спирта проводят при соотношении спирт:вода:аммиак

25: (22: 24): (1:3) .

Упаривание осуществляют до 15-20%ного содержания целевого продукта.

Подкисление проводят 10-15%-ной соляной кислотой до рН 1,75-1,85.

Охлаждение .проводят при 1-4 С.

Пример 1. 1 кг мышц рыбы минтай измельчают, обрабатывают 1 л

8%-ной СНзСООН на протяжении часа при помешивании. Отжимают через ткань..

Осадок повторно обрабатывают 1 л дистиллированной воды на протяжении часа, Фильтраты объединяют, фильтруют через бумажную пульпу до прозрачного состояния и пропускают через колонку с анионитом ЭДЭ-10П с зернением 0,25-0,5 мм со скоростью

0,7 мл/мин/см сечения колонки.

2 затем промывают водой и элюируют ф аденозин-5 -монофосфат (51 -AMP) с

t помощью 0,01 н НОВ, Кислые фракции, содержащие 5 -ANP, объединяют и пропускают через колонку, заполненную дополнительно активированным углем Ar-4 (размер зерен 0,25-

-0,5 мм) из расчета, что 1 r угля сорбирует 80 мг 5 -ANP. После промывки колонки водой проводят десорб( цию 5 -AMP с помощью подщелоченного раствора спирта в соотношении спирт: вода: аммиак 25:2 4: 1. Фракции, содержащие 5 -ANP, объединяют, упаривают под вакуумом при 45 С до

15% содержания основного прбдукта.

Раствор подкисляют 10%-ной НС0 до рН 1,75, и при охлаждении до.

+4"- С 5 -AMP выпадает в осадок, Осадок дважды промывают этиловым спиртом, высушивают в эксикаторе над прокаленным хлористым кальцием. Выход 100 мг препарата 5 -ANP.

Пример 2. 1 кг мышц рыбы .минтай обрабатывают, как и в примере 1, и экстракт пропускают со скоростью 0,8 мл/мин/см2 через анионит

ЭДЭ-10П, который предварительно переводят в ацетатную форму пропусканием 5%-ной СНзСООН. Элюируют 5 -ANP

0,05 í HCd. Кислые фракции, содержащие 5 -АМРГ объед няют и пропускают через колонку с дополнительно активированным углем AI -4 из расчета что

1 r угля сорбирует 75 мг 5 -AMP.

После промывки колонки. водой проводят десорбцию 5 -ANP с помощью подщелоченного раствора спирта в соотношении спирт:вода:аммиак 25:23: 2.

Фракции, содержащие 5 -АМР объединя( ют, упаривают под вакуумом при

48 С до 18% содержания основного о продукта. Раствор подкисляют 12%-ной

1052235

Составитель В. Брусиловская

Редактор К. Волощук Техред A.Бабинец Корректор O.Тигор

Эаказ 8720/4 Тираж 713 Подписное

ВНИИПИ Росударственного комитета СССР по делам изобретений и открытий113035, Москва,,Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП Патент, r.Óæãîðîä, ул.Проектная, 4

НС0 до 1.,8, и при охлаждении до

+2 С AMP выпадает в осадок, котьрый дважды промывают этиловым спиртом, высушивают над прокаленным хлористым кальцием, Выход 110 мг препарата;

5 -АМР, 5

П р и м е.р 3. 1 кг рыбы навага обрабатывают, как в примере 1, и экстракт пропускают через анионит

ЭДЭ-10П со скоростью 1 ил/мин/см сечения колонки, элюируют 5 -ANP с 1О ( помощью 0,1 í HCO. Кислые фракции, . содержащие 5 -AMP объединяют, определяют содержание 5 - ANP и пропускают через колонку с дополнительно активированным углем Al -4 из расче- 15 та, что 1 г угля сорбирует 70 мг

5 -AMP. После промывки колонки водой проводят десорбцию 5 -AMP раст; вором подщелоченного спирта в соот,-ношении спиртзавода:аммиак 25:22г3.

Фракции, содержащие 5- -AMP, упариваl ют под вакуумом при 49 С до 20% содержания основного продукта. Раствор подкисляют 15%-ной НС8 до рН,1,8, и при охлаждении до +1 С АМР выпа дает в осадок, который после двойной промывки этиловым спиртом высушивают в.эксикаторе над прокален-, ным хлористым кальцием. Выход 120 мг препарата 5 -AMP, Пример 4. 1 кг мышц рыбы . ЗО

ыавага обрабатывают, как в приме ре 1, и экстракт пропускают со скоростью 0,8 мл/мин/см пбперечного сечения колонки через анионит

ЭДЭ-10П, который предварительно перводят в ацетатную форму пропусканием 5%-ной СНЭСООН. Элюируют 51-AMP

0,05.н HCt . Кислые фракции,. содержащие S -AMP, объединяют и пропускают через колонку с"дополнительно активированным углем АГ-4 из.расчета, что 1 г угля сорбирует .75 мг 5 -AMP.

После промывки коЛонки водой проводят десорбцию 5 -AMP с помощью подщелоченного раствора этилового спирта в соотношении 96%-ный этиловый спирт:вода:25%-ный аммиак ! 25:23:2.

° ° I

Фракции, содержащие 5 -AMP объеди няют, упаривают под вакуумом при

48 С до 183 содержания основного продукта ° Раствор подкисляют 12%-ной

НС0 до рН 1,8, и при охлаждении до +2 С АМР выпадает.в осадок, который дважды промывают 96. этиловым спиртом, высушивают над прокаленным хлористым кальцием. Выход

110 мг препарата АМР.

Предложенный способ обеспечивает упрощение технологического процесса. за счет исключения дефицитных реагентов ферментов и смол, а также сокращения времени. проведения технологического процесса, получение высокоочищенного препарата 5 -AMP, который может применяться при лечении хронической коронарной недостаточности, атеросклеротическом кардиосклерозе и других заболеваниях.