Способ определения активности глютатионредуктазы в эритроцитах

Способ определения активности глютатионредуктазы в эритроцитах

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ ГЛЮТАТИОНРЕДУКТАЗЫ В ЭРИТРОЦИТАХ , отличающийся тем, что, с целью повышения точности определения активности глютатионредукта зы, в исследуемых эритроцитах методом электронного парамагнитйого резонанса исследуют уровень семихинона флавинадениндинукледтида (ФАД) и по его Концентрации судят об активности фермента глютатионредуктаэы. (П ь ел оо 05 С35

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСГ)УЕЛИ К

M5D G.01 N 33/48

l, ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ .

Н АВТОРСМОМУ СВИДЕТНЪСТВМ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3339954/28-1.3 (22) 08 ° 07.81 (46) 30.11.83. Бюл. В 44 (72) Р.Г.Сайфутдинов и К.Р.Седов (71) Иркутский государствейный медицинский институт (53) 612 ° 015.1(088.8) (56) 1. Hosoda S °, Nakamura W.

"Biochim. biophys.acta",. 1970, v.222, р.53.

2.. Beutter Е. "Science", 1969, v.165, В 3893, р.613 (прототип)...SU.„1057866 А. (54) (57) СПОСОБ ОПЫДКЛКНИЯ АКТИВНОСТИ ГЛЮТАТИОНРЕДУЕТАЗЫ В ЭРИТРО:ЦИТАХ, отличающийся тем, что, с целью повышения точности определения активности глютатионредуктазы, в исследуемых эритроцитах мето:дом электронного парамагнитйого резонанса исследуют уровень семихинона флавинадениндинуклебтида (ФАД) и по его концентрации судят об активности фермента глютатионредуктаэы.

1057866

Изобретение относится к медицине, биологии и биохимии и может быть использовано при исследовании активности фермента глютатионредуктазы в эритроцитах человека и животных с диагностическими и лечебными 5 целями.

Известен способ определения активности глютатионредуктазы, основанный на определении. скорости окисления НАДФН 2 f 1 ).

Наиболее близким к предлагаемому по технической сущности и достигаемому результату является способ определения активности глютатионредуктазы, основанный на анализе биохи- 15 мических данных t 2 1.

Однако известный способ характеризуется недостаточной точностью определения, недостаточно объективен, так как об активности глютатионредуктазы судят пс изменению концентрации НАДФН, связанного соответственно с изменением концентрации GSSG, но эти же соединения могут участвовать во многих других ферментативных реакциях в этой же инкубационной смеси, требует проведения процесса гемолиэа эритроцитов, необходимо большое число операций.

ЗО

Цель изобретения - повышение точности определения активности глютатионредуктаэы.

Поставленная цель достигается. тем, что согласно способу определения активности глютатионредуктазы в эритроцитах, в исследуемых эритроцитах методом электронного парамагнитного резонанса исследуют уровень семихинона флавинадениндинукле- 4() отида (ФАД) и по его концентрации судят об активности фермента глютатионредуктаэы.

На фиг,1 и 2 изображены спектрограммы cpMHxHHQH08 флавинадениндинуклеотидов.

Способ осуществляют следующим образом.

Из взятой у пациента крови общепринятым способом выделяют эритроциты и замораживают в жидком азоте (-196 ) в пресс-формах, Для опре"

О деления активности фермента глютатионредуктазы эритроциты выдавливают из пресс-форм и помещают в кварцевый сосуд Дюара с жидким азотом, который устанавливают в резонаторе

ЭПР-спектрометра. ЭПР-спектрометром исследуют уровень семихинона ФАД в данном образце эритроцита, по концентрации которого судят об активности глютатионредуктазы.

Обнаружено, что в эритроцитах регистрируется сигнал свободного радикала в виде слегка асимметричного синглета с полушириной линии

"12-15 Эр и g 260035 (фиг.1 и 2), легко насыщающийся в поле СВЧ. Измеряя уровень свободных радикалов типа семихинона ФАД, судим об уровне активности фермента глютатионредуктазы.

Пример 1. У пациента A брали веноэную кровь в объеме 1 мл, выделяли эритроциты и замораживали в жидком азорце. Затем эритроциты выдавливали из пресс-форм и помещали в кварцевый сосуд Дюара с жидким азотом, который устанавливали в резонаторе ЭПР-спектрометра и определяли уровень семихинона, ФАД, а значит, и активность глютатионредуктазы. Его величина составила 69,3 ед. (фиг.1).

Пример 2. Те же операции проводили с пациентом Б. Активность глютатионредуктазы определяли аналогично примеру 1 ° Величина составила 111,3 ед. (фиг.2).

10578бб

Составитель В.Кузьмичев

Редактор M.Òêà÷ Техред X. Кастелевич, Корректор О.Билак

Заказ 9577/47 Тираа 873 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Mocxsa, %-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП Патент, г. Уагород, ул. Проектная, 4