Способ диагностики степени активности восполительного процесса

Способ диагностики степени активности восполительного процесса

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ СТЕПЕНИ АКТИВНОСТИ ВОСПАЛИТЕЛЬНОГО ПРОЦЕССА путем проведения реакции розеткообразования форменных элементов крови, отличающийся тем, что, с целью ранней диагностики, проводят реакцию розеткообразования с популяцией ранних нейтрофилов и при увеличении розеткообразующих нейтрофилов в 1 мкл от 865 до 2050 диагностируют слабую, от 2051 до 4300 - среднюю и при увеличении от 4301 до 9500 тяжелую стадии воспаления.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

3(д) А 61 К 39 00

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЭОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3433017/28-13 (22) 06.05 ° 82 (46) 23.12.83. Бюл. Ф 47 (72) И.И. Дзержинская (71) 2-й Московский ордена Ленина государственный медицинский институт им. Н.И. Пирогова (53) 615.375(088.8) (56) 1. Ian In David. Tak The respouse of human early and late rosette - coming lymphocytes to mixed

and autologous lymphocyte culture

and mitogens "Clin Immunol. and

Immunopathd.1978, 10, Р 1, 11-18, 2. Авторское свидетельство СССР по заявке Р 3334618/13, кл. A 61 К 39/00, 1981.

„„Я0„„1061820 А.(54) (57) СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ. СТЕПЕНИ

АКТЦВНОСТИ ВОСПАЛИТЕЛЬНОГО ПРОЦЕССА путем проведения реакции розеткообразования форменных элементов крови, отличаюцийся тем,что, с целью ранней диагностики, проводят реакцию розеткообразования с популяцией ранних нейтрофилов и при увеличении розеткообразующих нейтрофилов в 1 мкл от 865 до 2050 диагностируют слабую, от 2051 до 4300 — среднюю и при увеличении от 4301 до 9500тяжелую стадии воспаленйя.

1061820

Из обре тени е от носит ся к медицине и может быть использовано в клинической иьялунологии для экспресс-диагностики определения степени активностй воспалительного процесса.

Известен способ определения имму- 5 нологического статуса больных путем выявления ранних (акТивных ) розеткообразующих лимфоцитов (1 ).

Однако данный способ не позволяет проводить раннюю диагностику воспалительного процесса (1).

Наиболее близким к изобретению является способ диагностики активности воспалительного процесса путем выявления розеткьобраэующих нейтрофилов Г2 3.

Однако известный .способ не позволяет установить степень активности воспалительного процесса.

Целью изобретения является установление ранней диагностики степени активности воспалительного процесса.

Указанная цель достигается тем, что, согласно способу путем проведения реакции розеткообраэования форменных элементов крови, проводят реакцию розеткообразования с популяцией ранних нейтрофилов и при увеличении розеткообразующих нейтрофилов в 1 мкл от 865 до 2050 диагности- 30 руют слабую, от 2050 до 4300 — среднюю и при увеличении от 4300 до

9500 — тяжелую стадии воспаления.

Способ осуществляется следующи л образом.

В селиконированную пробирку на .6 мл смеси фикол-уротраста плотностью 1,096 — 1,074 наслаивают 3 мл цельной крови и центрифугируют

15 мин при О С и 1500 об/мин. Образуютая две границы раздела: первая между плазмой и смесью с плотностью

1,074, вторая между смесями с разными плотностями. В результате получают две чистые популяции клеток, т.е. лимфоцитарную и нейтрофильную. Взвесь нейтрофилов 3-106 клеток в 0,1 мл соединяют с 0,1 мл

2,5%-ного раствора эритроцитов барана (3 Б). Инкубацию проводят при

4 С в течение 10 мин, осаждают ранние розеткообразующие клетки центрифугированием при 4 С в течение 15 мин и 1500 об/мин, фиксируют 3%-ным растворожил глютаральдегида.

Осадок наносят на предметное стекло, сушат, фиксируют метанолом 3 лин, красят аэурэоэином в течение 3 мин.

Считают в 5-7 разных полях зрения в иммерсионной системе микроскопа 60

200 нейтрофиль1лых клеток. За розетку считают нейтрофил, присоединивший не менее трех. ЭБ. Абсолютное содержание ранних спонтанных розеткообразующих нейтрофилов (Š— POH- P) в периферической крови рассчитывают по формуле

С ° ) ° r .Е - POH - P где L - количество лейкоцитов в

1 мм крови, 1 - процент нейтрофилов в формуле крови;

r - процент роэеткообраэующих ранних спонтанных нейтрофилов (P0H — Р);

100.100- показатели приводящие результаты к объему 1 мкл крови.

Пример. Определение содержания Е-POH-П у практически здорового человека.

В иммерсионной системе микроскопа в 6-7 разных полях получено

30% разеткообразующих ранних иейтрофилов, содержание лейкоцитов в 1 мкл крови 5150, содержание нейтрофилов в формуле крови 56%. Подставив в формулу цифровые значения, получаем

Š— р н - р 5150 56 30

865,2 (в 1 мкл), Пример 2. Определение поздних роэеткообразующих нейтрофилов (Е-POH-П).

ДРазделение клеток крови производи. ли отстаиванием в течение 1-2 ч на градиенте фикол-уротраста с плотностью.1,090-1,094 с последующим переносом лейкоцитарной взвеси на двойной градиент фикол-уротраста

1,077-1,080 и 1,090-1,094 ° Центрифугировали взвесь при С С со скоростью

1000-1500 об./мин. Получили две чистые популяции клеток: лимфоцитарную и нейтрофильную. Соединяли 3-10

6 нейтрофилов с 2,5%-ным раствором

ЭБ и первую инкубацию производили при

4-10 C а течение 15-20 мин осаждали центрифугированием при 0-4 С, вторую

Ь инкубацию осуществляли в течение

1-4 ч при 8-12 С.

В связи с тем, что рецепторы ранних нейтрофилов являются весьма лабильны ли и легко разрушаются в зависимости от временного и температурного факторов, по сравнению с известным способом в предлагаемом способе исключены: отстаивание цельной крови в течение 1-2 ч; наслаивание на первый градиент и повторная часовая инкубация после осаждения розеткообразующих клеток. Введены: новый двухступенчатый градиент с новой плотностью (1,072-1,077 и

1,094-1,099); наслаивание на градиент цельнЬй крови и кратковременная ин1061820 кубация (5-10 мин). Длительная инкубация приводит к разрушению и потере ранней активности субпопуляции нейтрофилов.

При хронических воспалительных процессах в 34Ъ случаев имеет место иммунодефицит. Е-POH-П. В этих слу-. чаях популяция Е-РОН-Р является единственным критерием степени aicтивности воспалительного процесса.

Пример 3. Больная Г. посту- 1() пила с диагнозом: мочекаменная болезнь, коралловидный камень верхней половины единственной левой половины L-образной почки.

В предоперационном периоде про- 15 веден курс профилактической противовоспалительной терапии.

Симптом Пастернацкого отрицательный. Моче> спускание не нарушено. Ана- лизы мочи и крови в пределах нормы. 20

29.12.81. В силиконированную бактериологическую пробирку на 3 мл раствора фикол-уротраста плотностью

1,09 4 и 3 мл раствора фикол-уротрас-. та плотностью 1,072 наслаивают 3 мл крови, центрифугируют 5 мин при 0 С и 1000 об./мин. В результате получают 2 границы раздела: первая — между раствором с плотностью 1,072 и плазмой, вторая — между двумя растворами с плотностями 1,072 и 1,094. Эритроциты оседают на дно пробирки.

Получают два кольца, т.е. две чистые популяции клеток. Первая популяция лимфоцитарная, вторая — нейтрофильная. Е-РОН-P определяли по предлагаемому способу. Нейтрофилы по 3.10

6 клеток в 0,1 мл соединяют с 0,1 мп

2,5%-ного раствора ЭБ. Инкубацию производили при 4 С в течение 5 мин.

Осаждают ранние розеткообразующие нейтрофилы центрифугированием при

0 >С и 1000 об./мин в течение 10 мин.

Фиксируют 3%-ным раствором глютаральдегида, центрифугируют при комнатной температуре и 1000 об./мин в те- 45 чение 10 мин. Осадок наносят на предметное стекло, сушат, фиксируют метанолом 3 мин, красят аэур-зозином

2 мин и считают в иммерсионной системе микроскопа в 5-7 полях 200 ней- 5() трофильных клеток.. Содержание в 1 мкл исследуемой крови Е-POH-P 586 (19%);

Е-РОЛ-P 682 (48Ъ), Е-РОН-П 1111,3 (36Ъ), лейкоцитов 4900, палочкоядерных нейтрофилов 49 (1%), сегменто- у ядерных нейтрофилов 2087 (62Ъ), лимфоцитов 1421 (29%), моноцитов

392 (8%).

Клинических и лабораторных дан- @ ных за активный воспалительный процесс нет.

15.01 ° 82. Произведено оперативное вмешательство. Резекция левой половины L""образной почки.

В послеоперационном периоде самочувствие удовлетворительное. Анализы крови и мочи в пределах нормы.

Клинических данных за активный воспалительный процесс нет. Состояние соответствует тяжести перенесенной :. операции.

16.01.82. Состояние больной не ухудшилось. Температура тела нормальная. Тошноты и рвоты нет. Диурез достаточный. В легких хрипов нет, дыхание везикулярное. Пульс 102 удара в минуту, ритмичный,АД 120/80 мм рт. ст. Анализ мочи: удельный вес

1005, белок 0,099%о, лейкоциты единичные. Анализ крови в пределах нормы. Клинических и лабораторных данных за активный воспалительный процесс нет;

18.01 ° 82. Получение ранних спонтанных розеткообраэующих нейтрофилов такое же, только 3 мл крови наслаивают на 3 мп смеси фиколуротраста плотностью 1,099 и 3 мл фикол-уротраста плотностью 1,077 ° центрифугируют 15 мин при 4 С и

1500 об/мин. Инкубируют при 10 С в течение 15 мин, осаждают центрифугированием при 4 С в течение

15 мин и 1500 .об/мин, фиксируют

ЗЪ-ным раствором глютаральдегида и центрифугируют при комнатной температуре и 1500 об/мин. Содержание в 1 мкл Е-POH-Р 1878,6 29%), Е-POJI-P 201,2 (16Ъ), Е-POH-П 1230,8 (19 }, лейкоцитов 8200, палочкоядерных нейтрофилов 164 (3%), сегментоядерных — 6314 (77Ъ), лимфоцитов 1858 (19%), моноцитов 164 (2%).

Содержание E-POH-Р увеличилось в

3,2 раза, содержание Е-РОН-П не изменилось.

23.01.82. Состояние больной беэ изменений. При этом в 1 мкл Е-POH-P

3068,9 (87%), E-POJI-P 355 (76%}, Е-POH-П 2228,3 (63Ъ), лейкоцитов

4250, сегментоядерных нейтрофилов

3527,5 (82Ъ), лимфоцитов 467,5 (11Ъ), моноцитов 170 (4Ъ).

Несмотря на то, что у больной имеются нормальные показатели мочи и крови и нет клинических данных за наличие воспалительного процесса, содержание E-POH-P увеличилось в

5,2 раза, Е-POH-П вЂ” в 1,9 раза.

25.01.82. Содержание в 1 мкл

Е-РОЛ-Р 526,6 (38%), Е-РОН-Р 4675,3 (92%), Е-РОН-П 4573,8 (90%), лейкоцитов 6600, сегментоядерных нейтрофилов 5087 (77Ъ), лимфоцитов 1386 (21Ъ), моноцитов 132 (2%).

Таким образом, содержание Е-POH-P увеличилось в 7,9 раза, Е-РОН-П— в 4,1 раза. Состояние больной удовлетворительное.

27.01. 82 . Потрясающий озноб с повыаением температуры до 39,5 С. Пе; о

При этом содержание в 1 мкл

Е-РОЛ-P 186,2 (14%), Е-РОН-P 670,6 (18%), E-РОЙ-П 894,2 (24%), лейкоцитов 5400, сегментоядерных нейтрофилов 3726 в мкл (66%), лимфоцитов

1330 (25%), моноцитов 324 (6%).

Таким образом, содержание Е-POH-P не только отражает наличие воспаления, но также с его помощью можно установить степень активности воспа1 лительного процесса и эффективность провод щой терапии ибо, несмотря на то, что показатели лабораторных и клинических данных были в норме, тем не менее увеличение Е-POH-P на первйй день после операции в

3;2 раза свидетельствовало о наличии воспалительного процесса в легкой степени. На третьи сутки показатели. Е-РОН-Р увеличились в

5,2 раза, а также увеличились и показатели Е-РОН-П в 1,9.раза, что говорит об активизации процесса соответствующей средней тяжести.

На десятые сутки показатели Е-POH-P увеличились в 7,9 раза, Е-РОН-П в 4,1 раза,, что свидетельствует уже о тяжелой стадии воспаления. На . двенадцатые сутки появились лабораторные и клинические данные, подтверждакнцие атаку пиелонефрита оперированной почки. На четырнадцатые сутки показатели Е-РОН-P увеличины в 16,2 раза, Е-РОН-П вЂ” в

8,3 раза, что соответствует продолжи@щейся атаке пиелонефрита и тяжелой стадии. Назначение мощной противовоспалительной терапии привело к нормализации процесса. Таким образом, показатели Е-РОН (ранних) позволяют диагностировать наличие воспаления до клинических и лабораторных данных и по степени увеличения показаний оценивать стадию воспаСпособ подвeprался тщательной проверке. Обработан метод количественного определения ранних спонтанных роэеткообраэуюцих нейтрофилов в сравнении с другими способами, личных способов у 15 здоровых и

53 больных с эаболевангями почек.

Исследования проведены в динамике

Данные представлены в таблице.

Таким образом, анализируя стадии течения воспалительного процесса, установлено, что предлагаемый способ позволяет уловить наличие воспалительного процесса до клинических проявлений, при этом количество

Е"POH-P увеличивается в 5,5 раз.

Показатели клинического анализа крови и Е-РОЯ-P являются информативными только на высотЬ воспалительного процесса и не имеют диагностической ценности в ранней стадии, т.е. их показатели являются отражением кли5 1061820

d ревязка: раневая поверхность чистая, края раны не инфильтрированы, не отечны, гиперемии нет. Лналиэ мочи:

Удельный вес 1005, белок 0,099%, лейкоцитов до 100 в поле зрения, большое количество плоского элите- 5 лия. Слабость, боли в области почки.

Состояние больной тяжелое. Заключением по,клиническим и лабораторным данным у бальной установлена атака пиелонефрита оперированной почки, 1р рекомендовано усилить антибактериальную терапию.

29.01.82. Содержание в 1 мкл

Е-РОЛ-P .627,76 (27%), Е-РОЛ-П 1015 (29%), Е-POH-Р 9504,6 (93%), E-РОН-П 9282 (91%), лейкоцитов 1400, палочкоядерных нейтрофилов 1400 (10%), сегментоядерных 8820 (63%), лимфоцитов 3500 (25%), моноцитов

280 (2Ъ). Состояние больной тяжелое. .Заключение: тяжесть состояния расценивается как продолжающаяся атака гематогенного пиелонефрита оперированной, почки. При этом показатели

Е-POH-P увеличены по сравнению с исходными данными в 16,2 раза, E-РОЛ-П -25 в 8,3 раза. У больной наступило обострение хронической почечной недостаточности. Мочевина крови увеличилась с 23 до 80 мг%, креатинин крови - с 1,2 до 2,6 мгЪ. Проводи- ЗО лась интенсивная противовоспалительная терапия.

15.11.82. Состояние больной улучlllHJIocb Язык влажный, живот мягкий.

Симптом ПастернацКого отрицателен. 3&

Боли значительно уменьшились. Температура субфебрильная. Лнализ мочи:

Удельный вес 1015, белок 0,1%, лейкоциты до 50 в п/эр., эпителий в небольшом количестве, мочевина 80 мгЪ, 4() креатинин"2,6 мгЪ ° По данным изотопной ренографии имеет место умеренное снижение скорости кровонаполнения лительного процесса. сосудистого русла почки и скорости выведения гиппурана из верхних моче- 45 вых путей. Дефицит очистительной способности почки составляет 10% от нормы.

Содержание в 1 мкл Е-РОЛ-Р 1418,8 проведен сравнительный анализ раз(46%), Е-РОН-P 5368 (83Ъ), Е-POH-П

5174 (80%), лейкоцитов 9950, сегментоядерных нейтрофилов 6467,5 (65%), лимфоцитов 3084,5 (31%), моноцитов

398 (4%). Имеется клинически положительная динамика. Показатели Е-POH-P уменьшились почти наполовину, но по . сравнению с исходными данными увеличены в 9,1 раза, E-POH-П в 4,6 раза.

Больной продолжена противовоспалительная терапия.

5.03.82. Состояние больной удов- 60 летворительное . Жалоб нет. Симптом

Пастернацкогб.отрицателен. Диэурии нет. Анализы мочи и крови в норме.

Содержание мочевины снизилось до

46 мгЪ, креатинина — до 1,1 мг%. 65

1061820 та нейтрофилов в организме человека.

Преддагаемый способ дал возможность впервые применить и отработать оптимальный вариант ранних спонтанных розеткообразующих нейтрофилов с эритроцитами барана и, кроме того, позволяет диагностировать наличие стадии воспалительного процесса до клинических проявлений, остроту воспалительного процесса, критерии излечения, а, своевременная коррекция в лечении позволяет восстановить трудоспособность больного за счет сокращения сроков лечения. иров анке цесса

=53

Показ атель

Абсолютное содержание лей коцитов в 1 мм3.5986 204

6825+ 200

Относительное содержание нейтрофилов, Ъ

61+4, 2

62,7+5,2.56,6 3,8 61,0 3,6

Абсолютное содержание нейтрофилов в 1 ммз

5879,5+505"" 3130 422"

3651,4+207

3856+180

Относительное содержание лимфоцитов, Ъ

2274+ 231

28+3,8

30+5,2

32+3,2

34,5+1,9

Абсолютное содержание лимфоцитов, в 1 мм3

2354,6+150 1915, 5+213

Относительное со держание Е-РОЛ-Р, Ъ

50,5+7,2

38,4+6,2

57,6+9,3

37,9+7

Абсолютное содержание Е-РОЛ-P в1 мм3

892,3+120 1093,7+146

Относительное содержание

Е-POH-P Ъ

22+7

94,1+6,8

13у 7+2,1 88,5+5,7

Абсолютное содержание

Е-РОН-P s 1 мм

5532,6+401 688,6140

3231 4<210+

530+ 85

Относительное содержание

Е-POH-П, %

59-,8+4,6

38,1+4,1

62,3+5,3

31+5,5

Абсолютное содержание

Е-РОН-П в 1 мм

1.195, 3+200

- отличия между величинами значимы р 0,01

ВНИИПИ Заказ 10094/6 Тираж 713 Подписное

Филиал ППП "Патент", r.Óæãîðîä,óë.Ïðoåêòíàÿ,4 нических проявлений процесса. Содержание Е-РОН-P в периферической крови больного явля""Tcÿ наиболее точным диагностическим и прогностическим критерием эффективности проводимой терапии. 5

Впервые получены достоверные показатели Е-РОН-P в крови клинически.

:здоровых людей, которые ранее не были обнаруженй.

Полученные с помощью предлагаемо го способа данные меняют представ.ления не только о существующих нормах, но и роли рецепторного аппара"9377,2+672»» 5131 2 325»»

2813,11198"" 1949,81167

1420,6+189 748,7+131"

3515,9т249» 1192,5+190