Вакцина против псевдомоноза пушных зверей, преимущественно норок, способ ее получения и способ профилактики псевдомоноза пушных зверей, преимущественно норок

Вакцина против псевдомоноза пушных зверей, преимущественно норок, способ ее получения и способ профилактики псевдомоноза пушных зверей, преимущественно норок

Реферат

 

(19)RU(11)1066074(13)C(51)  МПК ⁶    _{A61K39/104, A61K39/116}Статус: по данным на 27.12.2012 - прекратил действиеПошлина:

(54) ВАКЦИНА ПРОТИВ ПСЕВДОМОНОЗА ПУШНЫХ ЗВЕРЕЙ, ПРЕИМУЩЕСТВЕННО НОРОК, СПОСОБ ЕЕ ПОЛУЧЕНИЯ И СПОСОБ ПРОФИЛАКТИКИ ПСЕВДОМОНОЗА ПУШНЫХ ЗВЕРЕЙ, ПРЕИМУЩЕСТВЕННО НОРОК

Изобретение относится к ветеринарной микробиологии, в частности к способам по-лучения вакцин, применяемых для профилактики псевдомоноза животных. Псевдомоноз широко распространенное инфекционное заболевание сельскохозяйственных животных, птиц, пушных зверей. Наиболее злокачественно псевдомоноз протекает у пушных зверей норок и песцов. Проявляется энзоотически, сопровождается геморрагическим воспалением и отеком легких. Гибель норок от псевдомоноза в очаге инфекции может достигать более 50% от общего поголовья зверей. Возбудитель псевдомоноза обладает серотиповой вариабельностью. Известно, что наибольшее распространение имеют четыре серотипа возбудителей псевдомоноза (5,6,8 и 11 серотипы по классификации Хабс). Известен вакцинный препарат, содержащий антиген возбудителя псевдомоноза третьего серотипа (по классификации Хабс) и ферменты протеазу и эластазу. Однако способ изготовления данного препарата сложен и трудоемок. Известна также инактивированная моновалентная формолквасцовая вакцина против псевдомоноза пушных зверей, содержащая антигены псевдомонад Pseudomonas aeruginosa N 202 шестого серотипа, формалин, адъювант десятипроцентный раствор алюмокалиевых квасцов и физиологический раствор. Известен способ получения инактивированной моновалентной формолквасцовой вакцины против псевдомоноза пушных зверей, заключающийся в выращивании штамма Pseudomonas aeruginosa N 202 шестого серотипа на жидкой питательной среде, инактивировании бактериальной массы 0,3%-ным формалином в течение 5 суток при температуре 35-37^оС и добавлении адъюванта (8% десятипроцентного раствора алюмокалиевых квасцов. Известен способ профилактики псевдомоноза пушных зверей, заключающийся в внутримышечном однократном введении инактивированной моновалентной формолквасцовой вакцины норкам в возрасте от 3 месяцев и старше в дозе 3 мл. Недостатками инактивированной моновалентной формолквасцовой вакцины против псевдомоноза пушных зверей, а также способа ее изготовления и способа профилактики псевдомоноза являются следующие: известная вакцина способствует образованию иммунитета к заболеванию, вызванному возбудителем псевдомоноза одного шестого серотипа, и не позволяет профилактировать псевдомоноз, вызываемый возбудителями других серотипов; производственный штамм Pseudomonas aeruginosa N 202 шестого серотипа, используемый в вакцине, имеет нестабильные вирулентные и иммуногенные свойства. Целью изобретения является расширение спектра действия, повышение иммуногенности и снижение реактогенности вакцины. Поставленная цель в вакцине против псевдомоноза пушных зверей, преимущественно норок, достигается тем, что в качестве антигенов она содержит смесь четырех штаммов четырех серотипов псевдомонад Pseudomonas aeruginosa N 40 шестого серотипа, Preudomonas aeruginosa N 48 одиннадцатого серотипа, Pseudomonas aeruginosa N 63 восьмого серотипа и Pseudomonas aeruginosa N 77 пятого серотипа в равных количествах при следующем соотношении компонентов на 1 л вакцины: Антиген псев- домонад Ps.aeru- ginosa N 40 шес- того серотипа, N 48 одиннад- цатого сероти- па, N 63 восьмо- го серотипа, N 77 пятого серотипа, микр,кл. 1,910¹²-2,210¹² Гидроокись алю- миния, г 2,8-3,0 Формалин, мл 3,0-3,2 Бульон Хоттин- гера 200-300 Физиологичес- кий раствор Остальное Поставленная цель в способе получения вакцины против псевдомоноза пушных зверей, преимущественно норок, достигается путем раздельного выращивания штаммов Ps.aeruginosa N 40, N 48, N 63 и N 77, инактивирования бактериальной массы формалином в течение 15-17 суток, смешивания компонентов в следующих соотношения на 1 л вакцины: Антигены псевдо- монад Ps.aerugi- nosa N 40 шесто- го серотипа, N 48 одиннадцатого се- ротипа, N 63 вось- мого серотипа, N 77 пятого серотипа, микр. кл 1,910¹²-2,210¹² Гидроокись алю- миния, г 2,8-3,0 Формалин, мл 3,0-3,2 Бульон Хоттин- гера, мл 200-300 Физиологический раствор Остальное Поставленная цель также достигается в способе профилактики псевдомоноза пушных зверей, преимущественно норок, путем внутримышечного однократного введения вакцины, содержащей в качестве антигенов смесь четырех серотипов псевдомонад Pseudomonas aeruginosa N 40 шестого серотипа, Pseudomonas aeruginosa N 48 одиннадцатого серотипа, Pseudomonas aeruginosa N 63 восьмого серотипа и Ps.aeruginosa N 77 пятого серотипа в равных количествах при следующем соотношении компонентов на 1 л вакцины: Антигены псев- домонад Ps.ae- ruginosa N 40 шестого серотипа, N 48 одиннадца- того серотипа, N 63 восьмого се- ротипа, N 77 пя- того серотипа, микр.кл. 1,910¹²-2,210¹² Гидроокись алюминия,г 2,8-3,0 Формалин, мл 3,0-3,2 Бульон Хоттин- гера, мл 200-300 Физиологичес- кий раствор Остальное, вводят в дозе 1,5-2,0 мл. П р и м е р 1. Штаммы Ps.aeruginosa N 40 (лабораторный N 381-11), Pseudomonas aeruginosa N 48 (лабораторный N 1), Ps.aeruginosa N 77 (лабораторный номер ДН) и Ps.aeruginosa N 63 (лабораторный N 1677) засевают для получения матровой расплодки каждый отдельно по 0,5 л во флаконы на 200,0 мл, содержащие 80-100 мл МПБ (рН 7,2-7,4). Одновременно для контрольной проверки на чистоту эти же штаммы засевают на МПА. Выращивание проводят при 36-38^оС. Культуры 8-10-часового роста проверяют на чистоту путем микроскопии мазков, окрашенных по Граму, серологические свойства проверяют с монорецепторными О-агглютинирующими сыворотками. Проверенные культуры из флаконов засевают каждую отдельно в бутыли с бульоном Хоттингера (20-30 мл культуры на 4-5 л бульона). Параллельно вновь проводят посев на МПА и МПБ для проверки на чистоту. Культуры выращивают в течение 18-24 ч при температуре 36-38^оС, периодически перемешивают. Полученную матровую расплодку каждого штамма засевают в отдельный реактор в количестве 8-10% от объема среды и выращивают в течение 24-36 ч при температуре 36-38^оС, непрерывной аэрации и перемешивании. В процессе роста через каждые 2-3 ч берут пробы для определения концентрации микробных клеток, рН и чистоты культуры. Для улучшения условий роста микробов и регулирования рН среды при повышении его до более 7,4 добавляют стерильный 40%-ный раствор глюкозы до концентрации 0,1-0,15% от общего объема. Выращивание прекращают, когда концентрация микробных клеток больше не повышается или повышается незначительно. По окончании культивирования определяют концентрацию микробных тел, рН и чистоту выращенной культуры. Полученную таким образом бактериальную массу в каждом реакторе разводят стерильным физиологическим раствором до концентрации 2 млрд. микробных тел в 1 мл, а затем консервируют путем добавления формалина до концентрации 0,3-0,32% от общего объема. Инактивацию культур формалином проводят в течение 15-17 суток при температуре 37-38^оС. В процессе инактивирования культуры перемешивают по 5 мин 1-2 раза в сутки. Двухмиллиардные взвеси инактивированных микробных клеток штаммов N 40, N 48, N 63 и N 77 смешивают в равных количествах в отдельном реакторе. К смеси культур добавляют гидроокись алюминия из расчета 2,8-3,0 г на 1 л воды, доводят рН вакцины до 7,2-7,4 и проверяют на стерильность. Проверенную на стерильность вакцину расфасовывают при периодическом перемешивании во флаконы, которые закрывают резиновыми пробками, обкатывают металлическими колпачками и этикетируют. В таблице приведен состав вакцины. Вакцину выдерживают в течение 14 дней при температуре 16-20^оС, после чего проверяют на стерильность, безвредность, активность и иммуногенность. На стерильность вакцину проверяют путем высева из каждого контрольного флакона по 0,1-0,2 мл в пробирки с МПА, МПБ, средой Сабуро и МППБ под вазелиновым маслом. Через сутки культивирования из пробирок с МПБ делают пересевы по 1-2 мл на МППБ под вазелиновым маслом и МПБ в 200,0-миллилитровые флаконы, содержащие 80,0-100,0 мл среды. Посевы культивируют: первичные 10 суток, а вторичные 8 суток. Роста на питательных средах быть не должно. Безвредность поливалентной вакцины против псевдомоноза пушных зверей изучена в опытах на морских свинках (300 штук), тхорзофретках (200 голов) и норках (100 голов). Морским свинкам весом 300-350 г вакцину вводили подкожно в область спины в дозе 3-4 мл (6-8 млрд. микробных клеток), тхорзофреткам и норкам-внутримышечно в дозе 5-6 мл (10-12 млрд. микробных клеток) по 2,5-3,0 мл в правую и левую задние конечности. Результаты исследований показали, что вакцина безвредна, у вакцинированных животных не отмечали клинических признаков заболевания. П р и м е р 2. Для проверки иммуногенных свойств вакцины проведены исследования на 300 тхорзофретках и 300 норках. Минимальная иммунизирующая доза ИМД₅₀ поливалентной вакцины для норок и тхорзофреток составляет 63-125 млн. микробных клеток возбудителя псевдомоноза каждого серотипа, включенного в вакцину, оптимальная иммунизирующая доза 250-500 млн.микробных клеток возбудителя каждого серотипа. Исследования показали, что поливалентная вакцина обладает высокой иммуногенностью. Введение препарата создает у животных напряженный иммунитет ко всем возбудителям. Продолжительность иммунитета 6-8 месяцев. У вакцинированных животных на 6-8-ой день после введения в сыворотке крови обнаруживаются антитела, максимальный титр антител наблюдается через 12-18 дней и составляет 1:200-1:400. Поливалентную формол-гидроокись-алюминиевую вакцину против псевдомоноза пушных зверей из штаммов синегнойной палочки 5-, 6-,8- и 11-го серотипов применяют с профилактической целью в хозяйствах, неблагополучных по данному заболеванию, и вынужденно при возникновении псевдомоноза среди пушных зверей. Флаконы с вакциной перед применением и во время вакцинации тщательно встряхивают, а в холодное время года подогревают на водяной бане до температуры 36-37^оС. Вакцину вводят однократно внутримышечно с внутренней поверхности бедра с соблюдением правил асептики норкам с 3-месячного возраста и старше в дозах 1,5-2,0 мл. Вакцина пригодна для применения в течение 12 месяцев со дня изготовления, при условии хранения ее в темном сухом месте при температуре 4-15^оС. Предложенная вакцина, способ ее по-лучения, а также способ профилактики псевдомоноза с помощью предложенной вакцины имеют значительные преимущества перед известными техническими решениями. Штаммы, используемые для изготовления вакцины, характеризуются высокой энергией роста, выраженными антигенными и иммуногенными свойствами, обеспечивают изготовление препарата, способного профилактировать псевдомоноз норок в любом районе Советского Союза. Технология изготовления вакцины по предлагаемому способу позволяет за 24-36 ч получить накопление бактериальной массы до 18-20 млрд, микробных тел в 1 мл среды и изготовить в 10 раз больше доз поливалентной формол-гидроокись-алюминиевой вакцины, чем известной моновалентной вакцины. Предлагаемая вакцина создает у норок иммунитет высокой напряженности и длительности после однократного введения препарата, в равной степени ко всем серотипам, в то время как известная вакцина создает иммунитет лишь к шестому серотипу, против других же распространенных серотипов возбудителя псевдомоноза она не эффективна.

Формула изобретения

1. Вакцина против псевдомоноза пушных зверей, преимущественно норок, содержащая антигены псевдомонад в жидкой питательной среде, формалин, адъювант и физиологический раствор, отличающаяся тем, что, с целью расширения спектра действия и повышения иммуногенности вакцины, в качестве антигенов она содержит смесь четырех штаммов четырех серотипов псевдомонад Pseudomonas acruginosa N 40 шестого серотипа, Pseudomonas acruginosa N 48 одиннадцатого серотипа, Pseudomonas acruginosa N 63 восьмого серотипа и Pseudomonas acruginosa N 77 пятого серотипа в равных количествах при следующем соотношении компонентов на 1 л вакцины: Антигены псевдомонад Ps. acruginosa N 40 шестого серотипа, N 48 одиннадцатого серотипа, N 63 восьмого серотипа, N 77 пятого серотипа, микр.кл. 1,9 10¹² 2,2 10¹² Гидроокись алюминия, г 2,8 3,0 Формалин, мл 3,0 3,2 Бульон Хоттингера, мл 200 300 Физиологический раствор Остальное 2. Способ получения вакцины против псевдомоноза пушных зверей, преимущественно норок, включающий выращивание бактерий, инактивирование бактериальной массы, добавление адъюванта, смешивание компонентов и расфасовку препарата, отличающийся тем, что, с целью повышения иммуногенности и расширения спектра действия вакцины, раздельно выращивают штаммы Pseudomonas acruginosa N 40 шестого серотипа, Pseudomonas acruginosa N 48 одиннадцатого серотипа, Pseudomonas acruginosa N 63 восьмого серотипа и Pseudomonas acruginosa N 77 пятого серотипа, инактивирование бактериальной массы проводят формалином в течение 15 17 суток, а смешивание компонентов осуществляют в следующих соотношениях на 1 л вакцины: Антигены псевдомонад Ps. acruginosa N 40 шестого серотипа, N 48 одиннадцатого серотипа, N 63 восьмого серотипа, N 77 пятого серотипа, микр.кл. 1,9 10¹² 2,2 10¹² Гидроокись алюминия, г 2,8 3,0 Формалин, мл 3,0 3,2 Бульон Хоттингера, мл 200 300 Физиологический раствор Остальное 3. Способ профилактики псевдомоноза пушных зверей, преимущественно норок, включающий внутримышечное однократное введение вакцины, отличающийся тем, что, с целью снижения реактогенности, вакцину, содержащую в качестве антигенов смесь четырех штаммов четырех серотипов псевдомонад Pseudomonas acruginosa N 40 шестого серотипа, Pseudomonas acruginosa N 48 одиннадцатого серотипа, Pseudomonas acruginosa N 63 восьмого серотипа и Pseudomonas acruginosa N 77 пятого серотипа в равных количествах при следующем соотношении компонентов на 1 л вакцины: Антигены псевдомонад Ps. acruginosa N 40 шестого серотипа, N 48 одиннадцатого серотипа, N 63 восьмого серотипа, N 77 пятого серотипа, микр.кл. 1,9 10¹² 2,2 10¹² Гидроокись алюминия, г 2,8 3,0 Формалин, мл 3,0 3,2 Бульон Хоттингера, мл 200 300 Физиологический раствор Остальное вводят в дозах 1,5 2,0 мл.

РИСУНКИ

Рисунок 1