Способ моделирования хронического тонзиллита

Способ моделирования хронического тонзиллита

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

СПОСОБ МОДЕЛИРОВАНИЯ ХРОНИЧЕСКОГО ТОНЗИЛЛИТА путем снижения иммунореактивности организма с последующим введением в ткань миндалин -аденовирусно-микробного г материала , отличающийся тем, что, с целью увеличения длительности воспалительного процесса, снижение иммунореактивности осуще-; ствляют путем многократного введения антигена из ткани миндалин до появления в сыворотке крови специфических антител в титрах 1:256 1:512 с последующим внутритонзиллярным введением гиповирулентного варианта референс-штамма стрептококка Даше в дозе 10-20 млн. микробных тел. а

09) (И) СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИК

3(50 A 61 В 10 00

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н ABT0PCH0MV СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21l 3388352/28-13 (22l 27.01.82 (46) 30. 01. 84. Бюл. Р 4 (72) В. Д. Яковенко, И. Л. Дикий и Г. П. Черкас .

<71) Харьковский научно-исследова-. тельский институт микробиологии, вакцин и сывороток им. Мечникова (53) 611-018.54(088.8) (56) 1. Гюллинг Э.В. Экспериментальный острый и хронический тонэиллит.

Труды tll съезда отолярИнгологов УССР, Киев, 1965, с. 108-111.

2. Киселев В.И., Гладкий И.И., Тесленко-Пономаренко Е.Ф. Значение вирусно-микробной ассоциации в этиопатогенезе хронического тонзиллита. Сообщение П к вопросу создания модели экспериментального хронического тонэиллита. — В кн.:

Актуальные вопросы лечения, профилактики, диагностики ревматизма и гипертонической болезни. Харьков, 1971, с. 60-63. (54) (57) СПОСОБ МОДЕЛИРОВАНИЯ ХРОНИЧЕСКОГО ТОНЗИЛЛИТА путем снижения иммунореактивности организма с последующим введением в ткань миндалин -аденовирусно-микробного ." материала, ь т л и ч а ю шийся тем, что, с целью увеличения длительности воспалительного процесса, снижение иммунореактивности осуще-, ствляют путем многократного введения антигена из ткани миндалин до появления в сыворотке крови специфических антител в титрах 1:256

1:512 с последующим внутритонэиллярным введением гиповирулентного варианта референс-штамма стрептококка Даше в дозе 10-20 млн. микробных тел.

1069781

Изобретение относится к медицине„ а именно к отаринолярингологии, и может найти применение при разработке способов лечения хронического тон зиллита.

Известен способ моделирования 5 хронического тонэиллита путем инфильтрации миндалин вирулентной стрептококковой культурой со стимулятором Фрейнда f1).

Однако известный способ являет- . 10 ся неадекватным .возникновению тонэиллита у человека.

Известен способ моделирования хронического тонзиллита путем снижения иммунореактивности организма с последующим введением аденовирусно-микробного материала 2 3.

Указанный способ является кратковременным.

Цель изобретения — увеличение длительности воспалительного процесса.

Указанная цель достигается тем, что при осуществлении способа путем снижения иммунореактивности организма с последующим введением в ткань миндалин аденовирусно-микробного материала, снижение иммунореактивности осуществляют путем многократного введения антигена . из ткани миндалин до появления в сыворотке крови специфических антител в титрах 1:256 — 1:512 с последующим внутритонзиллярным введением гиповирулентного варианта референс-штамма сто .птококка Даше в 35 дозе 10-20 мпн. микробных тел.

Первая стадия. Приготовление тканевого антигена для иммунизации животных.

Тканевой антиген готовят из минда- 40 лин человека, удаленных во время оперативных вмешательств. Миндалины удаляют в стерильных условиях, отмывают физиологическим раствором, взвешивают и раэмельчают в блендоре с не- 45 большим количеством физиологического раствора до состояния тонкой эмульсии. Затем эмульсию заливают физиологическим раствором до соотношения 1,0 r .ткани на 10 мл 50 физраствора; рН эмульсии доводят до 8,0-8,5 с помощью 0,2-1%-ного раствора едкого натра. Материал ос- . тавляют при 4-6 С в течение 2 ч с о периодическим перемешиванием. Затем рН доводят до 8,0 и подвергают .центрифугированию в течение 40 мин при 4000 об/мин. Осадок отбрасывают, а надосадочную жидкость подкисляют слабым раствором уксусной кислоты до рН 6,0. Образовавшийся оса- 60 док удаляют центрифугированием, а надосадочную жидкость подкисляют до рН 4,5. Выпавший осадок удаляют центрифугированием, промывают подкисленной до рН 5 4,5 дистиллиро- 65 ванной водой и затем растворяют в дистиллированной воде, подщелачивают

1%-ным раствором едкого натра до рН 7, 2.

Всю.обработку ткани ведут в стериль ных условиях и на холоде. Концервацию материала осуществляют путем добавления раствора формалина до

0,2%-ной концентрации. Антиген хранят при 4-6 С до 2 мес. В приготовленном антигене микрометодом по Къельдалю определяют количество азота и пересчитывают на белок, количество которого колеблется от 7 до 10 мг-%.

Вторая стадия. В качестве тестмикроба для внутритонзиллярного заражения; животных используют референс-штамм стрептококка Даше, который при внутривенном и внутрибрюшинном введении в дозе 500—

1000 мпн. микробных тел белым мышам весом 15-20 г вызывает 95

100%-ную гибель от септикопиемии, а при внутритонзиллярном введении, например, кроликам в дозах 10

20 мпн. микробных тел — флегманоэное поражение.

Используемый штамм стрептококка

Даше направлено культивируют на средах в присутствии повышающихся концентраций антибиотиков, снижая тем самым вирулентность в 10

20 раз. В опытах используют антибиотикорезистентные генерации микроорганизмов, не вызывающие у контрольных животных развития флегманозного поражения слизистых при внутритонзиллярном заражении в дозах 10-20 мпн. микробных тел.

Третья стадия. Воспроизведение хроничесйого тонэиллита у кроликов.

Кроликам весом 2,5-3,0 кг подкожно пятикратно вводят тканевый антиген с интервалом между инъекциями в 3 для по следующей схеме: первая инъекция — 1 мп тканевого антигена, содержащего 2 мг белка; вторая инъекция — 1 мп тканевого антигена, содержащего 4 мг белка; треться инъекция — 1 мл тканевого антигена, .содержащего 6 мг белка; четвертая инъекция — 1 мп тканевого антигена, содержащего 8 мг белка; пятая инъекция — 1 мл тканевого антигена, содержащего 10 мг белка.

Через 7 сут после последней инъекции антигена производят пробный забор крови с целью определения титра противотканевых сывороточных . антител. В опытах используют животных с титрами антител в пределах

1:256 — 1:512. При отсутствии таковых животным однократно вводят подкожно тканевой антиген в дозе, содержащей 10 мг белка.

Через 7 сут после последней инъекции антигена в основание миндалин при помощи инъекционной иглы под

10697В1

Таблица 1 гические изменения

Наличие диффузной лнмфоидно.— плазмоклеточной.инфильтрации, мно. жественных инфильтратов в паренхиме миндалин иногда с участками размягчения в центре. Кровеносные сосуды резко расширены, переполне ны кровью, фолликулы с активными центрами размножения

1,5 редлагаеьый контролем зрения вводят 10 млн в

0,1 мл микробных тел суточной стрептококковой культуры авирулентного варианта референс-штамма Даше.

В опыт для воспроизведения хронического тонзиллита взято 15 кроликов. Наблюдение за животными проводилось в течение 6 мес с момента заражения: первые 10 дней животных осматривали через 1 день, в последующем — еженедельно.

После введения в миндалины стрептококковой культуры на следующий день отмечалось ухудшение общего состояния, гиподинамия, отказ от пищи. При осмотре области зева на- 15 блюдались некоторые проявления ост- рого воспалительного процесса: увеличение и гиперемия миндалин, иногда с наличием пленчатых налетов белесоватого цвета. . 20

На 3-5 сут. как общие, так и местные признаки острого тонэиллита исчезали. Стрептококковая культура с поверхности миндалин выделялась в течение 7-15 дней. .В тканях миндалин кроликов, удаленных в разные сроки (1,5 - 3,61 и 12 мес после инфицирования миндалин стрептококковой культурой, регистрировались катоморфологические изменения, характерные для хронического тонзиллита. Эти изменения отмечались, в основном, в паренхиме миндалин и проявлялись значительным разрастанием соединительной ткани капсулы и трабекул миндалины, нали- 35 чием множественных инфильтратов, . иногда с участками размягчения в центре (см. табл. 1 1.

В лимфоидной ткани миндалйй во всех случаях выявляли гиперплазию 40

I фолликулов с активными .центрами размножения. На отдельных участках фолликулы атрофированы, замещены соединительной тканью.

Кровеносные сосуды паренхимы в одних местах расширены, просвет их заполнен форменными элементами крови, в других местах просвет со.судов сужен, стенки их утолщены, местами отмечено формирование пеоиваскулярных инфильтратов.

Иммунологические изменения представлены в табл. 2.

Иммунологические исследования проводились с кровью 10 кроликов, у которых хронический, тонзиллит воспроизводился предлагаемым способом, кроликов у которых воспалительный процесс в миндалинах вызван по известному способу и 6 здоровых животных, составив.аих контрольную группу.

Использование предлагаемого способа моделирования хронического тон= зиллита у кроликов обеспечит воспроизведение патоморфологических признаков и клиническое течение (до 12 мес1, максимал но приближенное к хроническому тонэиллиту чело; века, что особенно важно при решении актуальных научных проблем в области оторинолярингологии.

Предлагаемый способ моделирования хронического тонзиллита представит возможность разработать и широко внедрить в практику здравоохранения более эффективные методы профилактики и лечения хронического тонзиллита, что имеет болыаое социальное зна. значение.

Разрастание соединительной ткани, наличие множественных инфильтратов, пролиферативные васкулиты, фолликулиты с активными центрами размножения, диффузная лимфоидно-плазматическая инфильтрация

1069781

Гродолжение табл 1

Наличие идентичных инфильтратов, разрастание соединительной ткани капсулы и трабекул, атрофиля фолликулов, в некоторых случаях замещение их соединительной тканью

Единичные крупные фолликулы с активными центрами размножения, выражены явления "опустошения" и замещения фолликулов соединительной тканью. Стенки кровеносных сосудов склерозированы, просвет их сужен, умеренная лимфоидно-плаэмоклеточная инфильтрация

Кровеносные сосуды всех калибров резко расширены, переполнены кровью.

Границы между фолликулами нечеткие, в самих фолликулах выражены актив.— ные центры размножения. В межфолликулярной ткани и в зпителии - диффузная лимфоидно-плаэматическая инфильтрация

1у5

Прототип

Эпителий и межфолликулярная ткань умеренно инфильтрованы лимфоцитами и плаэматическими клетками. Фолликулы обычной формы, .активные центры размножения отсутствуют. Кровеносные сосуды беэ видимых изменений

То же

Т б л аица2

Иммунологические изменения при моделировании хронического тонзиллита по предлагаемому и известному способам

Реакция бласттрансформации лимфоцитов (РБТЛ ) Время взятия материала после. инфицирования, мес

Предлагаемый способ

Прототип

Контроль

1,5

23,4 + 4,8Ъ

0,173 + 0,042

23,1 + 4,8%

0,11 + 0,033

67,8 + 4,3%

0,173 + 0,053

12

1,5

0,162 + 0,051 0.,13 + 0,025

0,292 + 0,069

0,309 + 0,027

0,105 + 0,12

0,085 + 0,03

ВНИИПИ Заказ 11598/7 Тираж 688 Подписное

Филиал ППП "Патент"., г.ужгород, ул.Проектная, 4

31,0 + 2,8%

32,4 + 3,9%

46,3 + 1,9%

О, 321 + 0,056

0,297 + 0,071

0 311 + О, 830

23,8 + 6,9%

34,2 + 2,1Ъ

19,7 + 6,8%

21,7 + 4,2%

0,24 + 1,8%

29,9 + 0,6%