Способ определения принадлежности антител к классу иммуноглобулинов

Способ определения принадлежности антител к классу иммуноглобулинов

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

1. СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПРИНАДЛЕЖНОСТИ АНТИТЕЛ К КЛАССУ ИММУНОГЛОБУЛИНОВ , включающий добавление антигенного эритррцитарного диагностику ма к исследуемой сыворотке, отличающийся тем, что, с целью повышения чувствительности и специфи1ности, антигенный эритроцитарный диагностикум добавляют после предварительной обработкиисследуе мой сыворотки прогретыми ано гяобуЛИНОВЫМИ СЫВОрОТКс1МИ . 2. Способ по п. 1, о тли ч а ю щ и И с я тем, что антиглобуянновые сялворотки прогревают при в течение 15 мин.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ .

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

6% ИЬ

3(59 А 61 К 39 00

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУФ С

М

ВФ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21 ) 3394 691/28-13 (22) 08.02.82 (46) 23, 02.84. Вюл. Р 7 (72.) В.A.Øàìàðäèí, С.Г.Маркова, .М.tO.Суслова и .И.Х.Шуратов (71) Казахский научно-исследователь.ский институт эпидемиологии, микро-. биологии и инфекционных болезней (53) 615.375(088.8) ,(.56) 1. Вязов О.E Лабораторная имму. нология. M. 1967, с. 87-, 91.

2. Там же, с.. 79-83. (54)(57) 1 СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПРИ-

НАДЛЕЖНОСТИ АНТИТЕЛ К КЛАССУ ИИМУНОГЛОБУЛИНОВ, включающий добавление антигенного эритроцитарного диагностикума к исследуемой сыворотке, о тл и ч а ю шийся. тем, что, с целью повышения чувствительности и специфичности, антигенный эритроцитарный диагностикум добавляют после предварительной обработки исследуе-. мой сыворотки прогретыми анъиглобулкновымн сыворотками.

2. Способ по п. 1, о т л и ч аю шийся тем, что антиглобулиновые сыворотки прогревают при 75 С в течение 15 мин.

1074531

Изобретение относится к медицине, в частности к общей и прикладной иммунологии.

Известен способ определения антител в сыворотке крови путем предварительной адсорбии антител спЕцифическим .антигеном с последующей постановкой реакции гемагглютинации, по снижению титра антител определяют наличие антител в исследуемой сыворотке (1) .

Однако способ недостаточно точен для определения принадлежности антител к классу иммуноглобулинов °

Известен способ определения принадлежности антител к классу иммуноглобулинов, включающий добавление антигенного эритроцитарного диагностикума к исследуемой сыворотке с последующим добавлением антисыворотки к иммуноглобулинам определенного класса (2) .

Однако известный способ .недостаточно специфичен.

Целью изобретения является повышение чувствительности и специфичности способа.

Указанная цель достигается тем, что при осуществлении способа, включающего добавление антигенного эритроцитарного диагностикума к исследуемой сыворотке, антигенный эритроцитарный диагностикум добавляют после предварительной обработки исследуемой сыворотки антиглобулиновыми сыворотками, прогретыми в течение

;15 мин при 75 С.

Способ осуществляется следующим образом. делают четыре одинаковых ряда последовательных разведений исследуемой сыворотки. Во все лунки первого ряда вносит равный или двойной (В .микротитраторах ) объем анти-ХфА сыворотки, во все лунки второго ряда — анти-Х сыворотки, в третий ряд — анти-I È сыворотки и в четвертый — 0,8ЬЪ-й раствор NaCI (контрольный ряд). После 30-40-минутной экспозиции во все лунки добавляют эритроцитарный антигенный диагностикум., Вносимые антиглобулиновые сыворотки связывают иммуноглобулины соответствующего класса в исследуемой сыворотке. Следовательно, задержку или полное отсутствие агглю тинации диагностикума в одном иэ трех рядов по сравнению с контролем и двумя остальными рядами, содержащими антиглобулиновые сыворотки, указывает на принадлежность определяемых в исследуемой сыворотке антител к иммуноглобулинам именно этого класса.

Пример. C помощью предлагаемого способа и реакции Кумбса исследовали сыворотки больных дизентерией (специфичности Зонне) в стадии острого и хронического заболевания.

По предлагаемому способу готовили по четыре одинаковых ряда иссле5 дуемых сывороток с разведения 1:10 в объеме 0,025 мл (1 капля) и добавляли по 0,05 мл во все лунки первых рядов предварительно прогретую при 75 С в течение 15 мин раз 0 веденную 1:10 кроличью сыворотку против иммуноглобулинов класса A во все лунки вторых рядов - также обработанную кроличью сыворотку против иммуноглобулинов класса С, 15 во все лунки третьих рядов — против иммуноглобулинов класса М. В четвертые ряды вносили по 2 капли

0,85%-ro раствора 11аС1. После 40-минутной экспозиции во все лунки раз70 ведений исследуемых сывороток добавляли по 1 капле (0,025 мл ) антигенного эритроцитарного диагностйкума

Зонне, Учет реакции проводили через 1,5 ч. Полученные результаты отражены в табл. 1 и 2.

По значительному снижению титра

РПГА в результате предварительной обработки сыворотки больного острой дизентерией анти;Х М сывороткой (в 8 ра ) или сыворотки хронического больного анти-I@G сывороткой (в

4 раза ) по сравнению с контролем слеследует отнести определяемые антитела в одном случае к IgM а в дру3> гом — к 1 С. Резуль реакции

Кумбса при обследовании сыворотки острого больного совпадают с данными предлагаемого способа, а при обследовании сыворотки хронического больного оказались отрицательными.

Предлагаемый способ является чувствительной (результативной} реакцией обнаружения специфических антител определенного класса им. муноглобулинов, что важно в диференциальной диагностике хронического и острого заболевания.

ПовышениЕ температуры прогревания антиглобулиновой сыворотки предназначено для повышения специфичности

50 нейтрализации определенного класса антител в исследуемой сыворотке, за счет разрушения инактивации

I@. . антител в антисыворотке. Известн8, что неспицифические результаты, 55 в основном связаны с антителами 1 и, В табл. 3 приведены данные определения принадлежности антител к классу нммуноглобулинов по предлагаемому способу с использованием прогре60 тых в разных условиях и непрогретых антисывороток.

Как видно, непрогретые или недостаточно прогретые антиглобулиновые сыворотки неспицифически нейтрали65 зуют антитела и других классов, что

1074531

Таблица 1

Результаты реакций с сыворотками больных

Способ (ав ю»

Хронической дизентерией

Острой дизентерией

I анти- 0,85%-й

Igm Вас1

0,85Ъ-й

ЧаС1 анти- антиантиI gvi анти- антиIgA IP

I/A I(0

Реакция

Кумбса Отри- Отри- 1:б40 цатель- цательный ный

Отри- Отри- Отрицатель-цатель- цательный ный ный

Предлагаемый 1!320 1:320

1:120 1з120

1г320 1:120 1:30

1:40

П р и м е ч а н и ег разведение исследуемой сыворотки, которое еще содержало антитела Igé, адсорбируемые диагносты« кумом, +.титр РПГА с исследуемой сывороткой после обработки антиглобулиновыми сыворотками или 0,85%-м раствором ИаС1. затрудняет трактовку результатов.

Только инактивация I/M-антител в определенных режимах обработки антиглобулиновой сыворотки позволяет четко определять принадлежность антител к определенному классу в исследуемой сыворотке ° Дальнейшее повышение температуры прогревания .(Bbl ше 75 С) .инактивирует в антиглобулиновой сыворотке антитела всех классов, что делает невозможным осуществление способа.

Таким образом, предлагаемый спОсоб благодаря использованию прогретых антиглобулиновых сывороток позволяет с большой раэрешакщей способностью определять принадлежность антител в широком диапазоне разведений исследуемой сыворотки к иммуноглобулинам любого класса, в то время как по известному способу определение антител провоцят лишь в разведениях, где отмечены отрицательные результаты РПГА «для предот- . вращения спонтанной агглютинации диагностикума). Это обстоятельство значительно снижает диагностические

5 воэможности (разрешающую способности известного метоДа, так как в таких разведениях исследуемой сыворотки может оказаться слишком мало антител, присоединившихся к диагностику о му. Кроме того, известный метод поз. воляет определять антитела только одного класса (имеющих наибольший титр) . По предлагаемому способу возможно определение антител одно15 временно нескольких классов, Преимуществом предлагаемого способа является также то, что он эначитель» но более прост в исполнении и позволяет получать результаты в 27.

20 2,5 раза быстрее, чем известный.

1074531 анти-1ф1

Таблица 2

Результаты РПГА с сыворотками больных, предварительно обработанных по предлагаемому способу

Антигенный эритроцитарный диагностикум специфичности

0,85%-м раствором NB.C1 анти-I go

I анти-. Ig А

09, 12

1г20

1:320

1г 320

011184 1 . 1 60

1г140

1 . 320

1г 160

1: 140

1:140

Таблица 3 т

Титр РПГА с антигенным диагностикумом специфичности Зонне в зависимости от. условий прогревания антисывороток

Антисыворотка

75 С

80 С 7ООС без прогревания

15 мин 30 мин 15 мин 30 гкн 15 мин 30 мин

1г160 1г160 1г200 1г200 1г200 1г200

Анти1г140

1г200 1:200 1г200

1:80 1г50

1г40 1!80

1:120 1г140 1г 200 1:200 1г200 1г200

1г120

Кон троль (0,85В-й

H8,C1) 1г200 1г200 1г200 1г200 1г200 1г200 1г200

П р и м е ч а н и е: Исслецовайия проведены на сыворотке больного дизентерией Зонне, острая стадия болезни.

Составитель Г.Крюкова

Редактор О.Ррковецкая Техред М,Гергель Корректор A,Èëüèí

Заказ 419/6 Тираж 688 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб.,д.4/5

Филиал ППП "Патент", г.ужгород, ул.Проектная,4

АнтиХ М

АнтиI/A

1г400

1г1230

1г100

1г 40

1г40 .1г 100

1". 160

1г30

1:400

1:1280

1г 20

1:20

1г400

1:1280

1-г 100