Способ обнаружения пилей адгезии у микробов рода @

Способ обнаружения пилей адгезии у микробов рода @

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯПИЛЕЙ АДГЕЗИИ У МИКРОБОВ РОДА IERSIHIA путем пассирова ния микроорганизмов на питательных средах с последующей постановкой реакции агглютинации с эритроцитами в присутствии D-waHнозы и учетом результатов, о т л ичаю .щийся тем, что, с целью выявления пилей адгезии-детерминантов патогенности Jersinia pestis, пассирование проводят 3-4 раза .при 35-37 с через 36-48 ч на питательной среде, содержащей, г/л: Дрожжевой экстракт9-12 Триптон-бакто9-12 Казаминовые кислоты9-12 Сердечно-мозговой отвар 9-12. Глюкоза 10-15 Сернокислый магний 0,04-0,07 Сернокислое железо 0,075-0,125 Цистеин 0,5-0,75 С S Лимо н но-кислый натрий1,0-1,4 (Л Хлористый калий 1,5-2,5 Двузамещенный с: фосфат калия 3,5-4,5 Агар-агар13-14 Вода дистиллированнаяОстальное и рН среды7 1-7,3

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

3 60 С 12 1/04

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ABTOPCHOMV СВИДЕТЕЛЬСТВУ

9-12

10-15

0,04-0,07

0,075-0,125

0,5-0,75

3,5-4,5

13-14

Остальное

7,1-7,3 (21) 3413969/28-13 (22) 22.01.82 (46, 23.02.84. Бюл. Р 7 (72) С.О. Водопьянов,. Б.Н. Мишанькин и Н.В. Павлович (71) Ростовский-на-Дону государственный научно-исследовательский противочумный институт (53) 576.8.093.1 (088.8) (56) 1. Machagan R.M., OId D.Е.

"HaemaggIutinus and fimbria.l in

different sегоtypes and brotypes Iersinia entегоcoIitica" J. AppIied

BacterioIogy, 1980, 49, 2, р. 353-360. (54) (57) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПИЛЕЙ

АДГЕЗИИ У МИКРОБОВ РОДА IEHSINIA путем пассиров,ния микроорганизмов на питательных средах с последующей постановкой реакции агглютинации с эритроцитами в присутствии Il-,манноэы и учетом результатов, о т л ич а ю шийся тем, что, с целью

„„SU„„1074904 А выявления пилей адгезии-детерминантов патогенности Jersinia pestis, пассирование проводят 3-4 раза .при

35-37 С через 36-48 ч на питательной среде, содержащей, г/лг

Дрожжевой экстракт 9-12

Триптон-бакто 9-12

Каэаминовые кислоты 9-12

Сердечно-мозговой отвар

Глюкоза

Сернокислый магний

Сернокислое железо

Цистеин

Лимонно-кислый натрий 1,0-1,4

Хлористый калий 1 5-2,5

Двуэамещенный фосфат калия

Агар-агар

Вода дистиллированная и рН среды

1074904

9-12

10-15

0,04-0

0,075-0

0,5-0,4

„5

Изобретение относится к медицинской микробиологии и касается =пособов обнаружения пилей адгезии у

3ersinia pestis.

Известен способ определения пилей адгезии у микробов рода gersinia в частности gersinia entегоcoiitica, путем пассирования микроорганизмов на питательных средах — в

10-кратные пассажи в бульоне через

7 дней при 20 С, с последующей постановкой реакции агглютинации с эритроцитами s присутствии D-маннозы и учетом результатов (11.

Однако известный способ не позволяет выявить пили адгезии — детерминанты патогенности Zersinia

pestis.

Цель изобретения — выявление пилей адгезии-детерминантов патогенности Iersinia pestis.

Указанная цель достигается тем, что согласно способу определения пилей адгезии у микробов рода

7ersinia путем пассирования микроорганизмов на питательных средах q последующей постановкой реакции агглютинации с эритроцитами в при.сутствии D-маннозы и учетом результатов, пассирование проводят 34 раза при 35-37 С через 36-48 ч на питательной среде, содержащей, г/л:

Дрожжевой экстракт 9-12

Триптон-бакто 9-12, К . аминовые кислоты 9-12

Сердечно-мозговой отвар

Глюкоза

Сернокислый магний „07

Серноккслое железо,125

Цкстекн,75

Лимонно-кислый натрий 1,0-1

Хлоркстый калий 1, 5-2

Двузамещенный фосфат калия 3,5-4,5

Агар-агар 13-14

Вода,дистиллированная Остальное и рН среды 7,1-7,3

Способ осуществляют следующим образом.

Пример 1. На питательной среде, содержащей, г/л:

Дрожжевой экстракт 9,0

Тркптон-бакто 9,0

Казаминовые кислоты 9,0

Сердечно-мозговой отвар 9,0

Агар-агар 13„0, Глюкоза 10,0

Сернокислый магний 0Ä04

Сернокислое железо 0,075

Цистеин 0,5

Лимонно-кислый натрий 1,0

1,5

П р к M е р 3. На пкт среде состава, г/л:

Дрожжевой экстракт

Тркгтон-бакто

Казамкновые кислоты

Сердечно-мозговой отвар

Агар-агар

Глюкоза

Серноккслый магний

Серноккслое железо

I»cтекн

Лимонно-ккслый натрий

Хлоркстый калий

Дзузамещенкый фосфаты калия ательнок

12„0

12

14

1= о

0„

О, О, 1 — (2, О ю 0 к 0

07

Хлорксгый калий

Дву"амещенный фосфат калия 3,5 (рН 7,1) трижды пасскруют клетки штамма Jersinia pestis 556/10 Rif

5 при 35 С с пересевамк через 48 ч.

Формалинкзкрованные эритроциты барана суспендируют в 0,85Ъ-ном растворе YaCI с 0,5Ъ D-маннозы (pH 7,2) до получения 5Ъ взвеси.

На дно чашки Петри наносят 2 капли такой взвеси и в нек осторожным растиранием суспендкруют 1 стандартную петлю диаметр 2 мм) культуры штамма 556/106. Учет реакции проводят через 30-60 с при легком покачивании чашкк Петри. Образуются крупные красные хлопья эрктроцктов, взвесь светлеет, что характерно для присутствия пклей. Наличие пклей у исследуемой культуры подтверждается данными электронной микроскопии. Для этого клетки указанного штамма с описанной среды наносят на сетку, покрытую углеродом, фиксируют 1Ъ-ной фосфорно-вольфрамовой кислотой (рН 7,1-7,3) к исследуют . на микроскопе ВМ вЂ” 100 В прк

60 кВ. У гемагглютинкрующкх клеток обнаруживается выявление густой сети тонких фкламентов — пклей.

П р к м е р 2. На питательной среде содержащей, г/л:

Дрожжевой экстракт 10,0

Тркптон-бакто 10,0

Казамкновые кислоты 10,0

З5 Сердечно-мозговой отвар 10,0

Агар-агар 13,5

Глюкоза "3,0

Сернсккслый магнкй 0,06

Ссрноккслое железо 0,1

40 цкстекн 0,6

Лимонно-кислый натрий 1,2

Хлоркстый калкй 2,0

Двузамещенный фосфат калкя 4,0 рН 7,2 тркжды пасскруют клетки штамма Ipostis 556/10 Rif npu

36 С с кнтерваламк =6 ч. Опреде-ление килей проводят аналогично примеру 1.

1074904

Составитель Г. Смирнова

Редактор Н. Рогулич Техред Т.фанта Корректор И. Эрдейи

Тираж 522 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Заказ 458/24

Филиал ППП "Патент", r. Ужгород, ул. Проектная,4 (рН 7,3) 4 раза пассируют клетки штамма ?pestis 556/106 Rif " при 37 С с интервалами в 36 ч. Определение пилей проводят аналогично примеру 1.

Использование предлагаемого изобретения позволяет определять новый фактор вирулентности — пили адгезии у чумного микроба. Распознаине нового фактора вирулентности чумного микроба дает возможность дополнить существующую систему типирования и систему индикации, а также основываясь на серотипах пилей, сконструировать полиантигенные химические вакцины, куда пили адгезии будут входить в качестве составного компонента.