Способ получения мэйтансиноидов

Способ получения мэйтансиноидов

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ МЭЙТАНСйНОИДОВ общей формулы где R - низаий ал кил с , отличающийся тем, что, с целью упрощения процесса, повьпаеиия выхода и расширения ассортименна мэйтанта целевых продуктов, - действуют кислотой общей фор- 3 синол мулы CHj СН, R-C-H- ( О О1 где R имеет указанные значения, со в присутствии дициклогексилкарбоди имида и в случае необходимости в присутствии кислоты Льюиса. 00

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

ОЗАЛ

РЕСПУБЛИН

g() С 07 D 225/06

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОЧНРЫТИЙ

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н llATEHTV 3 з

R- c-ж- Й-ееоа

8 (21 ) 2685599/23-04 .(22) 10 ° 11. 78 (31) 137I078/77 (32) 14.11.77 (33) Япония (46) 23.02.84. Бюл, В 7 (72) Наото Хасимото и Тойоказу

Киси (Япония) (71) Такеда Кемикал Индастриз, Лтд (Япония) (53) 547 ° 891.2. 07(088.8) (56) 1, КифсЬьп $.М., Komoda Vasuo и др °, The Maytansinoids Isolation,,ЯСгисФыга1, Elucidation and Chemical Interrelation of Novo1 Ausa Mouroliйев. - I. Org. Chem. 42(14), 1977 р. 2349-2357.

„,SU„„1 7597 А (54 ) (57 ) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ MBRTAHСИНОИДОВ общей формулы 3

1 М3

0=6 СВ щ

cl jO

СИЗ

И„ где R — низший алкил с С„.

:отличающийся тем, что, с целью упрощения процесса, повышения выхода и расширения ассортимента целевых продуктов, на мэйтансинол действуют кислотой общей форMулы где Н имеет укаэанные значения, в присутствии дициклогексилкарбоди имида и в случае необходимости в присутствии кислоты Льюиса.

1075973

Изобретение относится к получению мэйтансиноидных соединений, а именно мэйтансиноидов формулы

СН l0

QH3 СН3

e0ON

45 где R - имеет укаэанные значения, в присутствии дициклогексилкарбодиимида и в случае необходимости в присутствии кислоты Льюиса, Полученные мэйтансиноиды формулы

I включают L-форму„ новую D-форму или их смесь.

По предлагаемому способу мэйтансинол ацилируется кислотой форму- 55 лы II в присутствии карбодиимида.

Кислота формулы II может быть любым из L- u D-изомеров, а также их смесью, но когда остаток кислоты формулы II, который предполагается ввести в гид- 60 роксильную группу н З-положении, является оптически активной группой, желательно применение соответствующего оптически активного изомера кисло-ты формулы I1. Однако, даже если при- 5

Снз Снф

15 где R — низший алкил с С.)4, обладающих противомикробными и противоопухолевыми свойствами, которые могут быть использованы в медицине.

Известны некоторые из мэйтансинои-20 дов 1,-конфигурации, а именно мэйтанси ноиды формулы Х Где Е СН3 3 ° C53

-ez) eH»- сн, — СН,Ы 3 Í3 полученные рядом стадий экстракции растворителем и выделенные из расте-, ний, таких как Maytenus cerrata. Выход целевых продуктов составляет соответственно 0,00002t 0,0000031% и

0,0000036% (,13, Целью изобретения является упрощение процесса, повышение выхода и расшиРение ассоРтимента целевых про- 35 дуктон.

Поставленная цель достигается способом получения мэйтансиноидов формулы 1, заключающимся в том, что на мэйтансинол действуют кислотой общей формулы 40 меняется оптически активная кислота формулы II, получают смесь D- u

L-мэйтансиноидон формулы I.

По отношению к мэйтансинолу кислота формулы II может использоваться в количестве примерно 1-500, пред почтительно примерно до 30 молярных эквивалентов, а карбодиимид— н количестве около 1-700, предпочтительно примерно до 50 молярных эквивалентон.

В случае необходимости целесообразно проводить реакцию н присутствии кислотного катализатора„ такого как кислоты Льюиса: безводный хлористый цинк, безнодный хлористый алюминий (А 1С 1 ), безводное хлорное железо, четыреххлористый титан (TiC14) четыреххлористое олово (Sn C14) пятихлористая сурьма, хлорид кобальта, хлорид меди, эфират трехфтористого.бора и др;; неорганические или органические сильные кислоты, такие как серная, перхлорная, соляная, бромистоводородная, бензосульфокислота, и -толуолсульфокислота, трифторуксусная кислота, трихлоруксусная кислота и др.; кислые ионообменные смолы, такие как Дауэкс-50 (Н ) и т.д. Основной катализатор

+ может быть, например, ныбран из органических аминовых соединений, таких как пиридин, альфа-, бета- и гамма-пиколин, 2,6-лютидин, 4-диметилламинопиридин, диметиланилин, диэтиланилин, триэтиламиí, N-метилморфолин, и др.; галогенидов щелочных металлов, таких как фтористый калий, безводный йодид лития и др.; солей органических кислот, таких как ацетат натрия и т.д. Особенно желательным является безводный хлористый цинк. Использование такого катализатора приводит в результате к улучшенному выходу мэйтансиноидон формулы I, Катализатор применяется в количестве, достаточном для промотиронания реакции ацидирования. Такое подходящее количество катализатора во многих случаях может быть выбрано из интервала примерно 0,001-10, предпочтительно от около 0,01 до 1 молярного эквиналента по отношению к кислоте формулы II.

Когда применяется такой катализатор, количество кислоты формулы Г? по отношению к мэйтансинолу может быть снижено предпочтительно примерно до 1-6 моларных эквивалентов, Данная реакция может осуществляться в подходящем растворителе, таком как сложные эфиры, например этилацетат, простые эфиры, например диэтиловый эфир, диоксан, тетрагидрофуран, и др.; галоидиронанные углеводороды, например метиленхлорид, хлороформ и др.) натриды, например

1075973

10 ацетонитрил, ароматические углеводороды, например бензол, нитрометан, пиридин, диметилформамид, диметилсульфоксид, сульфолан и др.; а также. в подходящей смеси таких растворителей. 5

Предлагаемый способ позволяет в одну стадию простым химическим путем получать целевые продукты с достаточно высоким выходом, в том числе.в новой D-форме.

Пример 1. В круглодонную колбу емкостью 50 мп помещалось

47,3 мг (0,0837 ммоль) мэйтансинола и 145 мг (1,0 ммоль ) N-метил-N-ацетил-L-аланина, После добавления 10 мл безводного метиленхлорида получаМся гомогенный раствор, К данному раствору добавлялось 10 мл раствора 309, мг (1,5 ммоль ) дициклогексилкарбодиимида в безводном дихлор- 20 метане, после чего сразу же отделялись бесцветные кристаллы. Прн перемешивании данная суспензия нагревалась с обратньж холодильником на масляной бане при температуре бани 25

55-60 С в течение 10 ч. После того, как реакция завершалась, реакционная смесь концентрировалась при

-пониженном давлении, и нерастворимые вещества отделялись с помощью 3р фильтрования. Нерастворимые вещества промывались небольшим количеством метиленхлорида, и промывные воды объединялись с фильтратом. Объединенный фильтрат концентрировался 35 при пониженном давлении, и остаток хроматографировался на колонке, заполненной 40 r силикагеля с использованием смеси хлороформ-метанол—

45:1 об./об. Первые фракции, содер- 4О жащие побочный продукт - дициклогексилмочевину в качестве преобладающего растворенного вещества, удалялись, а биоавтографически положительные фракции сливались. Из последующей фракции, стекаюцей с колонки, 45 выделялось 27 мг мэйтансинола.

Биоавтографически активные фракции объединялись, концентрировались и хроматографировались на колонке, наполненной 27 г силикагеля, причем элюирование осуществлялось смесью этилацетатгэтилацетат, насыщенный водой ((2:1)). С помощью данной процедуры выделялось 7,0 мг бесцветно:го биоавтографически активного сое- 55 .динения. То, что данный продукт пред ставляет собой одно соединение, подтвердилось данники тонкослойной хроматографии на TCX-пластинке (Кизельгель 60 F< <, Арт 5715, Мерк, g)

ФРГ) в двух системах растворителей рслороформ: метанол (9:1 по объему) и этилацетат, насыщенный водой.

Подтвердилось, что структура данного соединения соответствует соединению формулы I где R — метил.

Элементный анализ.

Вычислено, %: С 59,00; Н 6,70;

М 6,07.

СЗ+Н+6 С1Нз О !о

Найдено, %: С 58,68; Н 7,02;

N 6,54.

Масс-спектр (в СНС! 3) м/е:

691 (М, следы), 630 (Й вЂ” H O-HNCO), 485, 470, 450. уФ- спектр (в этаноле) макс.:

233, 243, 254, 282, 290 нм.

Пример ы 2-9. Приготавливались следующие базовые растворы:

Раствор А, Раствор мэйтансинола в безводном метиленхлориде, содержащий 1 мг мэйтансинола в 50 мкл раствора.

Раствор В. Раствор дициклогексилкарбодиимида в безводном метиленхлориде, содержащий 6 мг дициклогексилкарбодиимида в 50 мкл раствора, Раствор С. Раствор N-ацетил-N-метил-Н-алаиина в безводном метиленхлорнде, содержащий N-ацетил-N-метил-L-алании в концентрации

3 мг/50 мл раствора.

В стеклянную трубку размером около 4 ммв поперечнике и около 14 см длиной добавлялось в указанном порядке 50 мкл раствора С, 50 мкл раствора В и 50 мкл раствора А. После перемешивания добавлялся катализатор, в том виде как он есть в случае твердого катализатора, или предварительно разбавленный летиленхлоридом до подходящей концентрации, когда он

:жидкий (количество катализатора приблизительно 0,3 мг). Наконец, реакционная смесь доводилась до 200 мкл метиленхлоридом. Стеклянная трубка

;эапаивалась на расстоянии около 12 см по ее длине.. При периодическом встря1 хивании трубка оставлялась стоять при указанной температуре в течение

;14 ч . Затем .трубка вскрывалась и дозы ! ,содержимого, соответствующие 2 мкл

t ,наносились на ТСХ-пластинки (силикагель 60 Fgggq Арт 5715, 20 cMx 20 см, Мерк, ФРГ). После проявлений смесью слороформ-метанол (9:1 по объему) пятно мэйтансина обнаруживалось с помощью хроматосканирующего прибора

,cS-910 фирмы Симадзу при длине волны . детектирования 250 нм и длине волны

:контроля 350 нм, и по предварительно подготовленной калибровочной кривой вычислялись абсолютный и процентный выходы мэйтансина. В то же время аналогичным образом определялся процентный выход мэйтаисинола, когда имело место его выделение. Полученные результаты приведены в табл. 1.

1 075973

Таблица 1

Пример катализатор

Температура реакции, ОС

Выход мэйтансина, %

Выделение мэйтансинола, е

1 5-25

0-5

80

15-г25

15-25

15

Безводное хлорное железо

15-25

15-25

Четыреххлорное олово

35

Эфират трехфтористого бора

15-25

15-25

Серная. кислота

32.примерах 2-9, Затем аналогичным, образом определялся количественно полученный мэйтансин. Процент выделейия мэйтансинона также определялся одновременно. Данные приведены в табл. 2.

Таблица 2

Выход Выделение мэйтан- мэйтансина, синола, ф а атализ уор

Пример

ЮЮЮ ЮФ Ю

10 Безводный фтористый калий

11 Безводный йодистый литий 30 20

12 4-Диметиламинопиридин 25 35 юЛВююаем

Безводный хлористый цинк

Безводный хлористый алюминий

Четыреххлористый титан

Пример ы 10-12. К смесям

50 мкл каждого из растворов С, В и д, полученных в стеклянных трубках, :30 таким же образом как и в примерах

2-9, добавлялось около 2 мг катализатора, и реакция проводилась как s

Пример 13. В 20 мл безводного метиленхлорида растворялось

159 мг N-метил«Я-пропионил«Ь-алани-, на с по "ледующим добавлением 309 мг дициклогексилкарбодиимида и 48 мг мэйтансинола. Смесь нагревалась при температуре дефленмации, и для 60 исключения влаги - в течение 16 ч, Реакционная смесь концентрировалась, и нерастворимые вещества отфильтровывались . Фильтрат концентрировался при пониженном давлении, и. остаток пропускался через колонку, наполненную 40 r силикагеля. Проявление осуществлялось смесью хлороформ.метанол (45:1 по объему) и, биоавтографически положительные фракции сливались. Растворитель отгонялся, и остаток повторно хроматографировался на колонке из силикагеля

{27 г силикагеля прояэлякщий растворитель этилацетат-этилацетат, насыщенный водой, 2:1 по объему). Биоавтографически положительные

1075973 фракции собирались и выделялось

5 мг бесцветного соединения, Данный продукт идентифицировался как соединение формулы I, где R -этил, таким же образом, как и в примере 1 °

Масс-спектр,м/е: 644 (М+ -61), 485, 470.

Пример 14. С помощью про;цедуры, сходной с описанной s примере

13 173 мг N-изобутирил-N-метил-Ь-аланина, 309 мг дициклогексилкарбодиймида и 48 мг мэйтансинола вводились в реакцию в 20 мл безводного метиленхлорида. Реакционная смесь далее. обрабатывалась как в примере

13 и выделялось 3,2 мг бесцветного соединения. На основании его массспектра данный продукт идентифицировался как соединение формулы где 3 .р= щ

Масс-спектр, м/е: 658 (М+ -61 ), 485, 570. 25

П р и м.е р 15. С помощью приема; аналогичного описанному в примере

13, 187 мг N-метил-N-изовалерил-L-аланина, 309 мг дициклогексилкарбодиимида и 48 мг мэйтансинола вводи- 30 лись в реакцию в 20 мл безводного метиленхлорида, Реакционная смесь обрабатывалась как в примере 13 и выделялось 2,5 мг бесцветного соединения. На основании данных его масс- З5 спектра продукт идентифицировался как соединение формулы I, где

R=CH2CH(CH3)2 .

Масс-спектр, м/е: 672 (M -61), 485, 470.

Пример 16. Мэйтансинол (300 мг, 0,5316 ммоль) и N-ацетил--з-метил-L-алании (1,585 r, 10,62 ммоль) растворяли в 80 мл дихлорметана. К раствору добавляли 3,285 .г дициклогексилкарбодиимида и 72,5 мг.(0,582 ммоль) безводного хлористого цинка. Смесь перемешивали при температуре около

20 С в течение б ч и выдерживали при этой температуре 11 ч, Затем добавляли еще N-ацетил-N-метил-L° алании (530 мг), дициклогексилкарбодиимид (1095 мг ) и безводный хлорис тый цинк (150 мг). Спустя 2 ч реак ционную смесь фильтровали и фильтрат Ы промывали приблизительно 150 мл всходы и высушивали над безводным сульфатом натрия. Нерастворимые продукты отфильтровывали и фильтрат разделяли хроматографически на колон-60 ке с силикагелем (60 г) и элюентом хлороформ:метанол 40:1 (по объему), отбирая после того, как были удалены несколько предшествукщих фракций, фракции по 25 r. Фракции 14-24 65 объединяли, концентрировали и повторно разделяли хроматографически, ис-! пользуя силикагель (65 г) и смесь этилацетат:этилацетат, насыщенный водой 2:1 (по объему), отбирая после нескольких предшествукщих фракции по 16 г, получая 149,3 мг соединения формулы I (R=CH3, соединение A) из фракций 25-60.

Фракции 23, 24 и 61-100 после второго хроматографирования объединяли и упаривали 20,5 мг вещества, из которого дополнительно выделяли 6,3 мг соединения А, подвергая его препаративной тонкослойной хроматографии на силикагеле с 10% изопропанола в хлороформе. Фракции 101-153 от второй хроматографии объединяли и концентрировали, получая 320 мг продукта, из которого получали 95,7 мг изомера соединения формулы I (R=CH3, соединение В) после повторной.хроматографии на колонке с силикагелем (75 г) с хлороформом и метанолом в соотношении 40:1 (по объему). Общий выход соединения A составил 155,6 мг, а соединения В 95,7 мг.

Вещество A растворяли в смеси этилацетата с диэтиловым эфиром и этот раствор оставляли стоять в холодильнике, получая кристаллическое соединение А, которое затем один раз перекристаллизовали из смеси этилацетат-диэтиловый эфир и дважды из смеси хлористый метилен-диэтиловый эфир, получая кристаллы соединения А: бесцветные пластинки, т.пл. 191195ОC (с разложением).

Соединение В кристаллизовалось, когда хлороформный раствор вещества

В обрабатывали диэтиловым эфиром.

Полученные таким образом кристаллы .в последующем перекристаллизовывали дважды иэ той же системы растворителей, получая кристаллы соединения В, плавящиеся при 155-1.78 С (с постепенHHM разложением).

Пример 17. Мэйтансинол (100 мг, 0,177 ммоль) и N-àöåòèë-N метил-L-аланид (522 мг, 3,59 ммоль) растворяли в 25 мл дихлорметана. K этому раствору при охлаждении. иа бане из льда с водой при температуре ниже 5 С добавляли 1100 мг

:(5,38 ммоль) дициклогексилкарбодиимида и 24 мг безводного. хлористого цинка. Смесь перемешивали при температуре ниже 5 С в течение 20 ч, затем фильтровали. Фильтрат концентрировали и остаток подвергали хроматографическсму разделению на колонке с силикагелем (55 г) со смесью хлороформ:метанол 40s1 (по объему), отбирая 25-граммовые фракции. Фрак- ции 15-30 объединяли и вытаривали, получая 147 мг смеси веществ. Иэ

1075973

10 фракций 31-220 выделяли 43 мг мзйтансинола.

147 мг прс цукта подвергали 2-й очистке на хроматографической колонке со смесью этилацетат:этилацетат, насьчценный водой, 2„ 1 (по объему).

Несколько предшествующих фракций были удалены и затем элюат собирали в 15-граммовые фракции, получая 34 мг мэйтансина, 17 мг смеси мэйтансина и некоторых других веществ, и 47 мг 10 вещества, содержащего изомер мэйтансина. При препаративной тонкослойной хроматографии (пластины РЕС, силикагель 60 F> AIe, 5717, Мерк, ФРГ) с элюентом хлористый метилен: 15 изопропиловый спирт 9:1 (или 17 мг продукта) получили еще 5,0 мг мэйтансина. 47 мг продукта в последующем хроматографировали на колонке с силнкагелем (60 г), элюент хлороформ 20 этанол = 40:1 (по объему), получая

20,0 мг изомера мэйтансина. Общий выход мэйтансина и его изомера составил 39 и 20 мг соответственно.

Пример 18. Мэйтансинол (100 мг, 0,177 ммоль), N-метил-N-пропионнл-L-алании (84,5 мг, 0,531 ммоль ) и дициклогексилкарбодиимид (164 мг, 0,796 ммоль) растворяли в 15 мл сухого дихлорметана. 30

Немедленно образовалась суспензия с белым осадком. К этой суепензии при перемешивании добавлялн при комнатной температуре около 24 мг (0,176 ммоль ) безводного хлОристо- З5 го цинка, После перемешивания при этой же температуре в течение 1 ч добавляли еще 84,5 мг И-метил-Nпропионил-L-аланина, 164 мг дицикло- гексилкарбодиимида, примерно 24 мг безводного хлористого цинка и 10 мл дихлорметана, и смесь продолжали перемешивать еще в течение 1 ч и

50 мин. Затем реакционную смесь фильтровали, чтобы удалить небольшое количество нерастворимого материала, и фильтрат разбавляли дихлорметаном до объема приблизительно 100 мл, проьывали водой, сушили над безводным сульфатом натрия и затем фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении, и выделившийся осадок отфильтровывали и промывали небольшим количеством этклацетата, Объединенный фильтрат и промывку жидкости подвергали 55 хроматографированию на колонке с силикагелем (65 г), элюент - этилацетат:этилацетат, насыщенный водой

2:1 (по объему), отбирая 15-граммовые фракцйи после того, как несколь- 60 ко предшествующих фракций удаляли.

Фракции 7-31 объединяли, и при выпа- ривании. получили 66 мг соединения формулы I (R=CZHg, вещество С), а из фракций 40-97 получили 58 мг 65 изомера соединения формулы I (R=CZH@ соединение D).

Раствор вещества С в небольшом количестве зтилацетата выделял кристаллы этого вещества при стоянии при комнатной температуре. Кристаллы собирали и перекристаллизовывали из смеси дихлорметан-диэтиловый эфир, получая кристаллы соединения

С: бесцветные иголки, плавящиеся при 185-189 С (со слабым разложением) .

Раствор вещества D в небольшом количестве этилацетата давал кристаллы соединения D которые перекристаллизовывали из смеси дихлорметана с диэтиловым эфиром, получая кристаллы соединения D: бесцветные иглы, плавящиеся при 192-197 С (с о разложением).

Пример 19. Иэйтансинол (100 мг, 0,177 ммоль), N-изобути,рил-N-метил-L-алании (92 мг, 0,532 ммоль) и дициклогексилкарбодиимид (164 мг, 0,796 ммоль ) рас гворяли в 15 мл сухого дихлорметана. К этому раствору при охлаждении в бане из льда с водой и при перемешивании добавляли 24 мг безводного хлористого цинка, и смесь перемешивали

0,5 ч при охлаждении льдом. Затем водно-ледяную баню убирали, и реакционную смесь нагревали до комнатной температуры (20 С).Еще через 1 ч добавляли 92 мг N-изобутирил-N-метил-Б-аланина, 164 мг дициклогексилкарбодиимида и 24 мг безводного хлористого цинка вместе с 10 мл сухого дихлорметана. A еще через 4:5 мин добавляли следующую порцию N-изобутирил-И-метил-L-аланина (31 мг), дициклогексилкарбодиимида (55 мг) и безводного хлористого цинка (24 мг), и реакционную смесь дополнительно перемешивали 45 мин. Общее время реакции составило 3 ч. Затем полученную таким образом реакционную смесь обрабатывали как в примере 17, а полученный материал хроматографировали на силикагеле (65 г) с элюентом этилацетат:этилацетат, насыщенный водой

2:1 (по объему), отбирая 15-граммовые фракции как в примере 17. Фракции 8-22 объединяли, растворитель вапаривали, получая 70,5 мг соединения формулы I (В"CH(CH ), соединение E). Фракции 27-55 давали после смешивания и выпаривания растворителя 57,5 мг изо ера соединения формулы I (R=CH(CH )Z., соединение F), Из раствора соединения Е в небольшом количестве этилацетата выпадали кристаллы, которые перемристаллизовывали из смеси дихлорметан-диэтиловый эфир, получая кристаллы вещества Е: бесцветные иглы, плавящиеся при 185-187 C (с разложением).

1075973

Таблица 3

Этилацетат, насыщенный водой

Величина R

CHCl :меЪ танол 9:1 (по объему) Вещество

0,15

0,23

0 05

0,г8

0,24

0 32

0,18

0,37

0,29

0,35

0,19

0,42.0,35

0,39

0,24

0,48

0,16

0,11

Мэйтансинол

BHNHIDI Заказ 540/54 . Тираж 410 Подписное

Филиал ППП "Патент", r. ужгород, ул. Проектная, 4

Из .раствора соединения в небольшом количестве смеси этилацетатдиэтиловый эфир получали кристаллы, которые перекристаллизовывали из смеси дихлорметан-диэтиловый эфир по5 лучая кристаллы соединения F I бесцветные иглы, плавящиеся при 195о

198 С (c разложением).

Пример 20. Мэйтансинол ,(100,5 мг, 0,1779 ммоль) обрабатывали как в примере 17 при комнатной температуре (около .20 С ) сначала N-изовалерил-N-метил-L-аланином (99,5 мг, 0,532 ммоль ), дициклогексилкарбодиимидом (165 мг, 0,801 ммоль),5 и безводным хлористым цинком (v24 мг) в растворе сухого дихлорметана (15 мл) в течение 1 ч, и затем повторно N-изовалерил-N-метил-Ь-аланином (67 мг, 0,358 ммоль ), дициклогексилкарбодиимидом (110 мг, 0,534 ммоль ) и безводным хлористым цинком (около 24 мг) в сухом дихлорметане (10 мл)еще в течение 1 ч, Полученную таким образом реакционную смесь обрабатывали как в примере 17, и полученный в результате сырой продукт хроматографировали на колонке с силикагелем (65 г) этил- ацетатом, отбирая 15-граммовые фракции.после того, как некоторое количество предшествукщих фракций удаляли. Фракции 17-29 объединяли и после упаривания растворителя получали 60 мг соединения формулы I (R=CH СН(СН )2, вещество G) Из фракций 33-75 получали после смешивания и выпаривания растворителя 57 мг изомера соединения формулы

:(R CH2CH(CH9)2 вещество H).

Пример 21. Мэйтансинол 40 (100 мг, О, 177 ммоль ), N-ацетил-Nметил-D-алании(64,5 мг, 0,443ммоль, 2,5 молярных эквивалента) .и дициклогексилкарбодиимид (109,5 мг, 0,532 MMQJII 3,0 мол. экв.)растворя- 45 ли в 20 мл сухого дихлорметана. К этому раствору добавляли при перемешивании и при комнатной температуре

24 мг (0,177 ммоль, 1,0 мол.экв.) безводного хлористого цинка. После 50

30 мин перемешивания при этой же температуре добавляли дополнительно

N-ацетил-N-метил-D-алании (61,5 мг, 0,354 ммоль, 2,4 мол.экв.) ц безводный хлористый цинк (лс24 мг, 55

1,0 мол. экв.), и реакционную смесь перемешивали еще в течение 1 ч.

1атем добавляли 80 мл дихлорметана и 20 мл воды. Органический слой от деляли и сушили над безводнич сульфатом натрия, затем фильтровали.

Фильтрат упаривали досуха и к остатку добавляли 3 мл этилацетата. Некоторое количество нерастворимого вещества отфильтровывали. Фильтрат концентрировали и хроматографировали на колонке с силикагелем (60 r) этилацетатом., Те фракции, для которых пятна на хроматограмме в тонком слое соответствовали соединениям А и В, соответственно ббъединяли (раздельно для

А и для В), и после упаривания раст-

1 орителя получали 60 мг соединения и 60 мг соединения В соответственно. Соединение A (мэйтансин) и вещество В (предположительно D-мэйтан„-ин), полученные таким образом, иденгифицированы по соответствующим продуктам, полученным в примере 16, посредством сопоставления спектров

ЯМР, ю

Величины R мэйтансиноидов формулы Х при тонкослойной хроматографии на пластине TCX (Art, 5715, Мерк, ФРГ) приведены в табл. 3.