Способ консервирования дрожжей вида @ и @

Способ консервирования дрожжей вида @ и @

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

СПОСОБ КОНСЕРВИРОВАНИЯ ДРОЖЖЕЙ ВИДА SACCHAROMYCES CERVISIAE и SACCHAROMYCES TELLURIS Y-71 путем криогенного замораживания в защитной среде,; содержащей дрожжевой экстракт, пептон и воду, отлич.ающийся тем, что, х: целью пбвьшения жизнеспособности клеток, замораживание проводят в два этапа, на первом из которых в интервале температур от 15-20 до (-15)-(-20)°С со скоростью 0,020 ,2°С в 1 мин, на втором этапе - до температуры криогенной жидкости со скоростью 2-3°С в 1 мин, а защитная i среда дополнительно содержит глюкозу. (Л

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИК (19) (11) А(1 А 01 N 1/02, С 12 N 1/04.ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ.()- ...1 17

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ 1,,3

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 3422940/28-13 (22) 14.04.82 (46) 30.03.84. Бюл. N- 12 (72) А.А. Цуцаева, Ю.А. Иткин, И.П. Высеканцев, В.M. Маркова, П.Г. Исерович и Л.А. Бушулян (71) Институт проблем криобиологии и криомедицины АН УССР (53) 663.13(088.8) (56) 1. Авторское свидетельство СССР

¹457727,,кл. С 12 N 1/04, 1970.

2. Huba1ek L., Kochova — Kratochvi1ova А., Liquid nitrogen storage

of geast cultures. I Survival and

1iterature review of the preservation of fungi at ultralow temperatures,—

Antonie чал Leewenhock J.Microbiol

and Sevo1., 1978, 44,¹ 2, р. 229241 (прототип). (54)(57) СПОСОБ КОНСЕРВИРОВАНИЯ

ДРОЖЖЕЙ ВИДА SACCHARQMYCES CERVISIAE u SACCHAR0MYCES TELLURIS Y-71 путеМ криогенного замораживания в защитной среде,. содержащей дрожжевой экстракт, пептон и воду, отличающийся тем, что, с целью пбвьппения жизнеспособности клеток, замораживание проводят в два этапа, на первом из которых— в интервале температур от 15-20 до (-15)-(-20) С со скоростью 0,020,2 С в 1 мин, на втором этапе — до температуры криогенной жидкости со скоростью 2-3 С в 1 мин, а защитная о среда дополнительно содержит глюкозу.

1082363

Способ осуществляют следующим об— разом.

Клеточную суспензию с концентрацией клеток 10 мл " в ростовой среде

8 в об ьеме 1, 5 мл вносят в полиэтиле—

5 новые ампулы,, после чего ампулы зав паивают и замораживают по двухэтапной программе со скоростью 0,02о, 0,2 С в минуту: на первом этапе в интервале температур ст 15-20 до (-15) †(-20) С и на втсром этапе со . скоростью 2-3 С в минуту в интервале о температур от (-15)-(-20) цо -196 С.

Отогревают образец на водяной бане о

Ф при 28-30 С.

П р и и е р. 1. Образцы клеток

Saccharomyces cervisiae раса 13 в объеме 1,5 мл в среде (10 г пептона, 5 г дрожжевого экстракта, 20 г глюкозы,, воды 1 л) с исходной концент20 рацией клеток (1,68+0, 1367) х10 клеток/глл охлаждают от 20 до — 15 С со о, скоростью 0,02 С в минуту, и на втоо ром этапе охлаждают от — 15 до -196 С о

25 со скоростью 3 С в минуту. После хра,нения в жидком азоте в течение од1 ного года образцы отогревают на водяной бане при 28 С. Оценку качества клеток Saccharomyces сегъ .siae paса 13 проводят по количеству жизне30 способных клеток в образцах., определяемом чашечным методом. Количество жизнеспособных клеток Saccharomyc.es cerviзьае раса 13 после хранения в течение одного гоца составляет (1,6720+

+ 0,1349)х10 клеток/мл,T.е. 99,57 е жизнеспособных клеток.

Пример 2. Образцы клеток

Saccharomyces te 11uris Y-71 в объеме

1,5 мл в среде, состоящей из 10 г пептона, 5 г дрожжевого экстракта, 20 r глюкозы, воды i л, с исходной кбнцентрацией клеток (0,6925+0,0213) 10 клеток/мл охлаждают со скоростью 0,02 С в минуту в интервале температур от 20 о до — 15 С и на втором этапе со скоростью 3 0 в минуту в интервале тем1 ператур от -15 до -196 С.

Изобретение относится к микробиологии, в частности к криоконсервированию дрожжей, которые находят широкое применение в хлебно-пекарном и пивном производстве.

Известен способ низкотемпературного консервирования микроорганизмо с помощью защитной среды, содержащеи

10-507 глицерина, 5-20K сахарозы и

10Х буфера 1 J.

Однако данный способ не обеспечивает высокой жизнеспособности клеток Saccharomyces cervisiae u

Saccharomyces telluris,òàê как при наличии в защитной среде лимоннокислого натрия и при неконтролируемой скорости охлаждения жизнеспособ ность клеток Saccharomyces cervisiae u Saccharomyces te11uris снижается.

Известен способ консервирования дрожжей путем криогенного. замораживания в защитной среде, содержащей кукурузный экстракт, дрожжевой экстракт, пептон, телячьга сыворотку диметилсульфоксид и воду.Замораживание в жидком азоте ведут по одноэтапной программе со средней скоростью охлаждения 350оС в минуту $2>.

Недостатком известного способа консервирования дрожжей является то что одноэтапное охлаждение в жидком азоте со скоростью - 350 С в минуту о обеспечивает более низкую выживае— мость дрожжевых клеток, а в состав среды консервирования помимо пептона и дрожжевого экстракта входят ещ кукурузный экстракт, телячья сыворотка и диметилсульфоксид, которые являются малодоступными и дорогими.

Цель изобретения повышение;кизне способности криоконсервированных клеток Бассnaromyces cervisiae H

Saccharomyces te1 1uris У-71.

Поставленная цель достигается тем, что согласно способу консервирования дрожжей Saccharomyces cervisia= и Saccharomyces te11uris У-7 путем криогенного замораживаниь в защитной среде, содержащей экстракт, пелтон и воду, замораживание проводят в б два этапа, на первом из которых — в интервале температур от 15-20 до (-15)-(-20) С со скоростью 0,020,2 С в минуту, на втором этапе— до температуры криогенной жидкости 55 со скоростью 2-3 С в минуту, а защит- ная среда дополнительно содержит глюкозу.

После хранения в жидком азоте в течение одного года образцы отогревают на водяной бане при 28 С.

Оценку качества клеток Saccharomyces te11uris 7-71 проводят по количеству жизнеспособных клеток в образцах, определяемом чашечным методом. Количество жизнеспособных клеток ЯассЬагomyces te11uris Y-71 послс

1082363

Предлагаемый также состав среды консервирования (пелтон, дрожжевой экстракт, глюкоза и вода), который является одним из вариантов ростовой

Охлаждение по такой программе среды для дрожжей, позволяет избежать приводит к повышению количества жиз- -процесса отмывания клеток на подготонеспособных клеток в среднем на 407. вительном этапе процесса криоконсерСравнительные данные приведены в вирования, что обеспечивает более натаблице. дежный режим стерильности.

Сравнительные данные о выживаемости дрожжевых клеток, консервированных по известному и предлагаемому способам . хранения в течение одного года составляет (0,6900 + 8,0209) ° 10 клеток/мл, т.е. 99,87.

Состав среды, г

Программы ох лаждения

Количество жизнеспособных клеток в

1 млх 10

Sacch. telluris Y-7f

Sacch, cervisiae х +5

X х «+Я

Предлагаемый способ

Пелтон 10

Исходная концентрация клеток

Дрожжевой экстракт 5

Глюкоза 20

Вода до 1 л

100

2,4 0,1995

4,2210,2313 100

Известный способ

Исходная концентрация клеток

100 2,64+0,265

100

3, 86+0,2256

Составитель E. Новикова

Корректор А. Ференц (Техред С.Мигунова

Редактор П. Макаревич

Тираж 722 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и .открытий

1f3025, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Заказ 1594/1

Филиал ППП "Патент", r. Ужгород, ул. Проектная, 4

Пелтон 5

Дрожжевой экстракт 2,5

Кукурузный экстракт 25

Телячья сыворотка 150 мл

Диметилсульфоксид 100 мл

Вода до 1 л

Двухэтапное замораживание

0,2 С/мин от

+ 20 до -20 С

2 С/мин от о

-20 до -196 С

Одноэтапное замораживание со скоростью

350 С/мин от +20 до — 196 С

4, 135+0, 3194 98 2, 36*0, 2404 98, 3

2, 16+0,2184 55, 9 1,61ТО, 2415 60,9