Способ получения антительного диагностикума сальмонелл

Способ получения антительного диагностикума сальмонелл

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АНТИТЕЛЬНОГО ДИАГНОСТИКУМА САЛЬМОНЕЛЛ путем сенсибилизации гамма-глобулином иммунной сыворотки . сорбента из нитроцеллюлозы после ее термогидролиза в растворе едкого калия с последующим добавлением красителя, отличающийся тем, что, с целью повышения чувствительности диагностикума, в качестве сорбента используют суспензию, состоящую из 2,°1г)ной суспензии целлюлозы и 5%-ной суспензии белка А стафилококков штамма Cowan-1, с последующей сенсибилизацией его антисальмонеллезной сывороткой в объемных соотношениях 10:10:1.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

„„SU„„1082401 (д) А 61 В 10/00

0ПИСЛНИК ИЗОБРКТЕНИЯ I

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

CO

>РАЙ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3434749/28-13 (22) 26.02.82 (46) 30.03.84. Бюл. № 12 (72) В. М. Никитин, В. А. Нахаба и Ю. Н. Рощин (71) Кишеневский государственный медицинский институт (53) 619.981.49 (088.8) (56) 1. «Военно-медицинский журнал», 1963, № 8, с. 51 — 53. (54) (57) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АНТИТЕЛЬНОГО ДИАГНОСТИКУМА САЛЬМОНЕЛЛ путем сенсибилизации гамма-глобулином иммунной сыворотки сорбента из нитроцеллюлозы после ее термогидролиза в растворе едкого калия с последующим добавлением красителя, отличающийся тем, что, с целью повышения чувствительности диагностикума, в качестве сорбента используют суспензию, состоящую из 2,$%ной суспензии целлюлозы и 5%-ной суспензии белка А стафилококков штамма

Cowan — 1, с последующей сенсибилизацией его антисальмонеллезной сывороткой в объемных соотношениях 10:10:1.

1082401

Зо

45

Изобретение относится к медицине, в частности к способам приготовления диагностических препаратов, и может быть использовано в медицинской микробиологии дл я определения тифопаратифозных и других патогенных для человека сальмонелл.

Известен способ получения антительного диагностикума сальмонелл путем сенсибилизации гамма-глобулином иммунной сыворотки сорбента из нитроцеллюлозы после ее термогидролиза в растворе едкого калия с последующим добавлением красителя (1).

Однако известный способ является длительным и получаемые препараты обладают недостаточной чувствительностью.

Цель изобретения — повышение чувствительности диагностикума.

Указанная цель достигается тем, что согласно способу получения антительного диагностикума сальмонелл путем сенсибилизации гамма-глобулином иммунной сыворотки сорбента из нитроцеллюлозы после ее термогидролиза в растворе едкого калия с последующим добавлением красителя,в качестве сорбента используют суспензию, состоящую из 2,5О/о-ной суспензии целлюлозы и 5О/о-ной суспензии белка А стафилококков штамма Cowan — 1, с последующей сенсибилизацией его антисальмонеллезной сывороткой в объемных соотношениях 10:10:1.

Пример. Способ получения цветного антительного диагностикума сальмонелл включает 4 основные операции: получение 5О/о-ной суспензии белок А-содержащих стафилококков штамма Cowan — 1; получение 2,5О/р-ной суспензии целлюлозы; получение целлюлозно-стафилококкового сорбента; нагрузка целлюлозно-стафилококкового сорбента I gG-антителами диагностической сыворотки.

Получение 5О/o-ной суспензии белок Асодержащих стафилококков штамма Cowan — 1.

Музейную культуру стафилококков штамма Cowan — 1 вначале проверяют на наличие белка А и затем засевают в ряд пробирок со скошенным агаром и инкубируют в термостате в течение 20 — 24 ч при 37 С.

Затем суточные культуры из 5 пробирок смывают 5 мл стерильного физиологического раствора, полученную суспензию вносят в градуированную центрифужную пробирку и центрифугируют при 3000 об/мин в течение 20 мин. Надосадочную жидкость сливают в дезраствор. Осадок ресуспендируют в 19 об. стерильного физиологического раствора, содержащего мертиолят в концентрации 1:10000, и таким образом получают 5 /О-ную суспензию белок А-содержащих стафилококков штамма Cowan — 1.

Получение 2,5 /ц-ной цветной суспензии целлюлозы.

В центрифужную пробирку вносят 30—

50 мг целлюлозы, содержащей 12 — 14О/О нитрогрупп, 1 мл Зо/р-ного раствора КОН и проводят термогидролиз при 100 С на водяной бане в течение 3 — 5 мин до полного растворения нитроцеллюлозы. Затем при постоянном перемешивании в пробирку добавляют

1 — 2 капли 1 /o-ного раствора бриллиантовой зелени и 2 — 3 капли уксусной кислоты.

Полученную зеленую суспензию нитроцеллюлозы отмывают в центрифуге 5 мл дистиллированной воды и таким образом получают 2,5 /ц-ную цветную суспензию целлюлозы.

Получение целлюлозно-стафнлококкового сорбента.

Целлюлозно-стафилококковый сорбент получают путем соединения равных объемов

2,5 /о-ной цветной суспензии целлюлозы и 5 /О-ной суспензии белок А-содержащих стафилококков штамма Cowan — 1.

Нагрузка целлюлозно-стафилококкового сорбента IgG-антителами диагностических сывороток.

В центрифужную пробирку к 2 мл целлюлозно-стафилококкового сорбента добавляют 0,1 мл брюшнотифозной (паратифозной А, В или др. противосальмонеллезной) сыворотки с достаточно высоким титром антител 1:12800, 1:25600. Пробирку закрывают резиновой пробкой, несколько раз переворачивают и выдерживают при

37 С в течение 30 мин для адсорбции IgGантител на целлюлозно-стафилококковом сорбенте. Одновременно происходит инактивация стафилококков под действием мертиолята и бриллиантовой зелени. В конце этого периода в пробирке формируется зеленый хлопьевидный осадок, который подвергается однократному отмыванию в 5 мл дистиллированной воды и затем ресуспендированию в 3 мл физиологического раствора рН 7,2 и таким образом получают цветной антительный диагностикум сальмо нелл.

Процесс приготовления цветного антительного диагностикума сальмонелл занимает 30 — 40 мин, в то время как для получения цветных антител по прототипу требуется более суток.

Кроме того, экспериментально установлено, что цветной антительный диагностикум характеризуется стабильностью: не дает спонтанной агглютинации, не реагирует с гетерологичными культурами микробов (эшерихии, шигеллы и др.) и высокой чувствительностью, реагируя на стекле с гомологичными культурами сальмонелл, разведенными до концентрации 3 млн клеток в 1 мл исследуемого материала. Прототнпный препарат цветных антител обладает меньшей чувствительностью, позволяя выявлять только большие количества саль1082401

Таблица 1

Предлагаемый (целлюлозно-стафилококковый) Прототип (целлюлозный) Известный (стафилококковый) Таблица 2

Предлагаемый (целлюлозностафилококковый) ++++ ++++ +++

Прототип (целлюлозный) Известный (стафилококковый) Соста вител ь П. Бона рцев

Техред И. Верес Корректор И. Муска

Тираж 688 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

1 l3035, Москва, Ж вЂ” 35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП «Патент», г. Ужгород, ул. Проектная, 4

Редактор А. Мотыль

Заказ 1603/3

3 монелл ЗΠ— 50 млн. клеток в 1 мл исследуемого материала.

В табл. 1 представлены результаты определения чувствительности и специфич ности брюшно-тифозных препаратов, полученных по предлагаемому способу с использованием целлюлозно-стафилококкового сорбента, по прототипу с использованием только целлюлозного сорбента и по известному способу с использованием стафилококкового сорбента.

В табл. 2 представлены результаты определения чувствительности и специфичности паратифозных В препаратов, полученных по трем упомянутым способам.

Таким образом, чувствительность препаратов, получаемых по предлагаемому способу, примерно в 10 раз превосходит прототип и известный способ. Кроме того, применение предлагаемого способа позволяет получить более специфичный препарат.