Способ определения активности интерферона в сыворотке и плазме крови

Способ определения активности интерферона в сыворотке и плазме крови

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ, АКТИВНОСТИ ИНТЕРФЕРОНА В СЫВОРОТКЕ И ПЛАЗМЕ КРОВИ путем добавления исследуемого образца в тест-культуру , отличающийся тем, что, с целью его упрощения и ускорения, способа в качестве тест-культуры используют штамм Staphylococcus albus № 56, обладающий чувствительностью к интерферону человека, с последующим определением активности интерферона по нарастанию оптической плотности бактериальной смеси

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

3,59 А 61 К М02

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К А ВТОРСКОМ,Ф СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ (21) 3432178/28-13 (22) 03.05.82 (46) 30.03.84. Бюл. № 12 . (72) Н. С. Мурашова, В. А. Мартынова и Н. Г. Мифтахова (71) Центральный научно-исследовательский институт гематологии и переливания крови (53) 611-018.54 (088.8) (56) I. Ершов Ф. И. Новохатский А. С.

Интерферон и его индукторы. М., «Медицина», 1980.

„,Я0„„1082422 А (54) (57) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ. АКТИВНОСТИ ИНТЕРФЕРОНА В СЫВОРОТКЕ И ПЛАЗМЕ КРОВИ путем добавления исследуемого образца в тест-культуру, отличающийся тем, что, с целью его упрощения и ускорения, способа в качестве тест-культуры используют штамм Staphylococcus albus № 56, обладающий чувствительностью к интерферону человека, с последующим определеннем активности интерфероиа по нарастанию оптической плотности бактериальной смеси

1082422

15

25

40

Составитель Л. Бондарцев

Редактор А. Мотыль Техред И. Верес Корректор О. Тигор

Заказ 1604/4 Тираж 688 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений н открытий

113035, Москва, )l(— 35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП сПатент», r. Ужгород, ул. Проектная, 4

Изобретение относится к .медицине и может быть использовано при определении иммунологической резистентности организма, а также при разработке способов получения препаратов интерферона.

Известен способ определения активности интерферона в сыворотке и плазме крови путем добавления исследуемого образца в тест-культуру (1).

Однако известный способ продолжительлен во времени и сложен в осуществлении.

Цель изобретения — упрощение и ускорение способа.

Указанная цель достигается тем, что согласно способу определения активности интерферона в сыворотке и плазме крови путем добавления исследуемого образца в тесткультуру,в качестве тест-культуры используют штамм Staphylococcus alsus № 56, обладающий чувствительностью к интерферону человека, с последующи м определением активности интерферона по нарастанию оптической плотности бактериальной смеси.

Способ осуществляют следующим образом.

Для определения активности интерферона предложен простой способ с использованием культуры стафилококка, высокочувствительной к интерферону. Для разработки способа определения активности интерферона изучено 57 штаммов стафилококка, выделенных от больных. Высокую чувствительность к интерферону проявлял лишь один штамм, в дальнейшем используемый в предлагаемом методе. Тест-культура представляет собой белый стафилококк, обладающий гемолитической и слабовыраженной плазмокоагулирующей активностью (16 ч), слабой чувствительностью к антибиотикам широкого спектра действия, не лизируется лизоцимом сыворотки крови слюны, яичного белка. Интерферон сыворотки оказывает прямое воздействие на тест-культуру стафилококка вышеуказанного штамма, вызывая гибель его.

Для постановки реакции в стерильные пробирки наливают испытуемую сыворотку в объеме 0,09-0,11 мл (предпочтительнее (0,1 мл) и 0,1-0,21 мл физиологического раствора (предпочтительнее 0,2 мл). После чего в пробирку вносят по 0,19-0,21 мл, предпочтительнее 0,2 мл (500 млн. микробных клеток в 1 мл) микробной взвеси 1820 часовой культуры стафилококка штамм № 56 на 0,85о/о физиологического раствора (натрий хлор) . При разведении культуры до нужной плотности используют сначала стандарт мутности (ГКИ им. Тарасевича

Л. А.), а затем устанавливают оптическую плотность взвеси с помощью фотоэлектроколориметра ФЭК-56 М. Оптическая плотность используемой взвеси должна быть в диапазоне показаний 0,05-0,08 (предпочтительнее 0,07) при зеленом светофильтре

6, кювета № 3. В контрольную пробирку вносят 0,29-0,31 (предпочтительнее 0,3 мл) мясопептонного бульона (МПБ) и 0,19-0,21 мл (предпочтительнее 0,2 мл) микробной взвеси. Испытуемые и контрольную пробирки инкубируют при 36,9-37,1 С (предпочтительнее 37 С) в течение 14-16 мин (предпочтительнее 15 мин), после чего в них добавляют по 4,4-4,6 мл (предпочтительнее 4,5 мл) и проводят определение оптической плотности на ФЭК-56 М с зеленым светофильтром № 6, кювета № 3. Контролем в параллельном пучке света служит

МПБ, налитый в кювету. Оставленную смесь замеряют через 17-19 ч (предпочтительнее

18 ч) инкубации при 36,9-37,1 С (предпочтительнее 37 С). Активность интерферона сыворотки выражают в процентах, вычисляя по формуле: опт. плоти. исп. об после инкуба ,цопт. плоти.контр.после никубапни— опт.плоти. исп. обп. о ннк бакин К100

-допт. плотн. контр п.о нкиубас ни

Лример. Сыворотка больного Г. При первичном измерении на ФЭКе-56М показала оптическую плотность равную 0,03, а через 18 ч инкубации 0,14. В контрольной пробе (0,3 мл МПБ+ 500000 ед. микробной взвеси). Результаты измерений составляют

0,025, 0,19. Подставив полученные данные в формулу, получим — ОЭ, щ

0,19 — 0,025 и = 100 -г 1 — х 100 = 100 — 0,7 100 =

= 100 — 70 = 30%.

Таким образом, активность интерферона равна 30%, т.е. микробная взвесь интерферончувствительного стафилококка сывороткой больного лизируется не полностью (30%).

Таким образом, предлагаемый способ позволяет произвести определение активности интерферона в течение 18 ч вместо

2 — З.сут в обычных лабораторных условиях.

В течение одного рабочего дня возможно определение активности интерферона в 20 — 25 образцах. Опыт возможно осуществлять каждый день недели.