Способ очистки кислотных гидролизатов белоксодержащих веществ

Способ очистки кислотных гидролизатов белоксодержащих веществ

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

«е «»

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ (61) 1013850 (21 ) 3411650/28-13 (22) 07.04.82 (46) 07.04.84. Бюл. Р 13 (72) Н.В.Иванов, В.Г..Волощуков,,В.Н.Милютин и A.Â.Гончаров (71 ) Ростовский-на-Дону государственный научно-исследовательский противочумный институт (53) 576.8(088.8) (56) .1. Авторское свидетельство

СССР 9 1013850, кл.3 G 01 И 33/48, 1982.

3(50 0 01 N 33 48; С 12 N 1/16 (54) (57) СПОСОБ ОЧИСТКИ КИСЛОТНЫХ

БЕЛОКСОДЕРЖАЩИХ ВЕЩЕСТВ ГИДРОЛИЗАТОВ по авт.св. В 1013850, о т л ич а ю шийся тем, что, с целью повышения степени очистки целевого продукта к гидролизату прн рН 8-11 добавляют алифатическнй диамин общей формулы NHC-{CHC)n -NQ где о=2-12, до постоянного значения рН реакционной смеси.

1084679

Изобретение относится к микробиологии, в частности к приготовлению питательных сред. Может быть использовано для получения безуглеводных азотистых основ широкого назначения.

По основному авт.св. 9 1013850 известен способ получения кислотных белковых гидролизатов, заключающийся в том, что гидролизат обрабатывают активированным древесным углем с последующим нагреванием и фильтрованием 1) .

Однако этот метод не пригоден для удаления свободных углеводородов с неизменной карбонильной. группой.

Цель изобретения — повышение степени очистки целевого продукта.

Поставленная цель достигается согласно способу получения кислотных белковых гидролиэатов в котором к гидролизату добавляют алифатический диамин при РН 8-11. общей формулы

М! >-(СН ) > -NH, где П =2-12, до постоянного значения РН реакционной смеси.

Способ осуществляют следующим образом.

В колбу, оборудованную механической мешалкой, термометром сопротивления, стеклянным электродом типа

ЭСЛ-63-07 и каломельным электродом сравнения, помещают сернокислотный гидролиэат белково-витаминного концентрата, очищенного от карамельных продуктов. Добавляют гидроксид бария до рН 8-1,1 ..

При постоянном перемешивании гидролизата вводят 15% сухого кислого активированного древесного угля марки ОУ-Б. Возвращают значение РН до 8-11, дополнительно добавляя гидроксид бария. Добавляют такое количество водного насыщенного раствора очищенного алифатического диамина, при котором РН смеси не меняется.

Смесь нагревают до 100 С при непрерывном перемешивании. После 60 С о начинается достаточно быстрая реакция между карбоксильной группой углеводов и аминогруппами диамина (образуется темно-красный осадок комплекса углевод-диамин), которая регистрируется по изменению РН, которое все время возвращают к исходному значению, через 60-90 мин вре° мя зависит от рН гидролизата) процесс связывания углеводов диамином заканчивается. Содержимое колбы охлаждают проточной водой, подкисляют концентрированной серной кислотой до РН 4,0, чтобы перевести Ва (ОН) в нерастворимый.

° Уголь с адсорбированным аэомети-. .новым производным углеводов и сульфат бария отфильтровывают через два слоя .промытой фильтровальной бумаги.

Суспензию угля вэмучивают дистиллированной водой с РН 4,0-4,2 (РН воды доводится концентрированной H>8 4) и повторно отфильтровывают через тот же бумажный фильтр.

Пример 1. В 0,5 л четырех5 горловую колбу, оборудованную механической мешалкой, термометром сопротивления, стеклянным электродом типа ЭСЛ-63-07 и каломельным электродом сравнения, помещают 350-370 мл сернокислотного гидролизата белково10 витаминного концентрата, очищенного от карамельных продуктов. Добавляют гидроксид бария до РН, например 7,95.

При постоянном перемешивании гидролизата вводят 15% (вес/объем) сухого

15 кислого активированного древесного угля марки ОУ-B. Исправляют значение рН, дополнительно добавляя гидроксид бария до 7,95. Добавляют водный насыщенный раствор очищенного гексаметилендиамина от РН смеси 7,95 до 8,05

f,ò.å. среднее РН 8,0) и содержимое колбы нагревают до +100 С при перемешивании. После +60 С начинается достаточно быстрая реакция между карбонильной группой углеводов и аминогруппами диамина (комплекс темно-красного цвета), которая регистрируется по изменению РН от 8,05 до 7,95.

Все время РН возращают к 8 05 мерно добавляя раствор диамина, через 60-90 мин (время зависит от РН гидролизата процесс связывания углеводов диамином заканчивается. Содержимое колбы охлаждают проточной

З5 водой, подкисляют концентрированной серной кислотой до РН 4,0, чтобы перевести Ba(OH)>, в нерастворимый

Ва 504 . Уголь с адсорбированными азометиновыми производными углеводов

40 и сульфат бария отфильтровывают через два слоя промытой фильтровальной бумаги. Суспензию угля вэмучивают в 150 ч дистиллированной воды с

РН 4, 0-4, 2. (H $04 1 H IIGDTopHG отфиль45 тровывают через тот же бумажный фильтр.

Пример 2. Все операции по связыванию углеводов гексаметилендиамином и адсорбции на 15% угля

ОУ-Б пРоводят аналогично примеру 1, но исходное значение РН гидролиза та устанавливают гидроксидом бария равным 8,95 и удерживают при кипячении его диамином в интервале РН

9,05-8,95. Результат очистки от углеводов такой же; как по примеру 1, но скорость реакции возрастает

Пример 3. Все операции по связыванию углеводов гексаметилендиамином и адсорбции на 15% угля

ОУ-Б проводят аналогично примеру 1, но исходное значение РН гидролиэата устанавливают гидроксидом бария равным 9,95 и удерживают при кипячении рН в интервале .10,05-9,95, до1084679 бавляя диамин. Результат очистки от углеводов такой же, как по примеру 1, но скорость реакции возрастает больше,чем при рН 7,95-8,05 (пример 1) и рН 8,95-9,05 (пример 2) .

ОУ-Б производят аналогично примеру 1, но исходное значение рН гидролнзата устанавливают гидроксидом бария равным.10,95 и удерживают его при кипячении, добавляя диамин.;Результат очистки от углеводов такой же, как по примеру 1, но скорость реакции несколько ниже, чем при рН 9,9510,05. ! гидролизате перед очисткой

Пример 4 Все операции .по связыванию углеводов гексаметилендиамином и адсорбции на 15% угля

Содержание веществ в в % на сухие вещества в мг/мл в 370 мл

19, 18

8,404

3,475

7,93

7,55

17,23

14,94

6,546

43,807

16,2086 г

Эола

0,8251 г

5,09

2,23

Цветность в 0,5 см кювете фильтр

М 9 ФЭК 56 М-У4, 1=0,00. аспарагиновая кислота, треонин, серии, глутаминовая кислота, пролин, глицин, аналин, цистин (следы), ваКачественная аминограмма: открыто-3д лин, метионин, изолейцин, лейцин, триптофан, лизин, гистидин, аргинин, тирозин, фенилаланин.

Содержание веществ в гидролизате после удаления углеводов в % на сух. в-ва в 275 мл

50 6 г в мг/мл

0,184

4,186

0,52

11, 88

22,02

7,76

2,872

35,233

2,75

8,15

7,8

0,7562 г

М

При проведении процесса связывания углеводов диамином происходит упарйвание раствора.

Цветность в 0,5 см кювете фильтр 9

9 ФЭК-56М-У4.1 = 0,00. нин, аспарагиновая кислота, треонин серии, глутаминовая кислота, пролин глицин, алании, цистин (следы), валин, метионин, изолейцин, лейцин, тирозин, фенилаланин.

Качественная аминограмма: открыто-триптофан, лизин, гистидин, арги- 55

51 мг

2,83

0,34

Зола

Углеводы тминный азот

Общий азот

Биуретовые продукты

Сухие вещества

Углеводы тминный азот

Общий азот

Биуретовые продукты

Сухие вещества

Зола

Содержание вещества в промывной в мг/мл

0,14

0,897

1,6

1,24

11,6.. лев оды

Аминный азот

Общий азот

Биуретовые продукты

Сухие вещества воде после угля в % на сухие вещества

1,2

7,73

13,79

10,69

3,1095 г

1,2857 r

2,7935 г

2,422 г

1,1511 г

2,134 r

0,7898 г

9,6891 г в 150 мл

21 мг

134,55 мг

240 мг

186 мг

1,74 мг

1084679 аспарагиновая кислота, треонин, серин, глутаминовая кислота, пролиН, глицин,аланин,валин,метионин,изолейцин,лейцин,тирозин,фенилаланин.

Суммарное количество веществ после очистки и их Ъ к исходному в % к исходному В расчете на 100 мл

76,1 мг

2,3

1,2856 r

2,374 r

99,99

84,98

40, 3

0,9758 г

11,4291

70, 51

97,83

0,8072 r ролизатов БВК до и после удаления углеводов показало, что все они сохраняются, т.е. способ очистки не затрагивает таковые. Особо надо под-. черкнуть, что азотистые питательные основы фирм, таких как "Дифко" (США), или "Оксойд" (Англия) уступают по физико-химическим и органолептическим свойствам гидролизатам БВК, очищенным как от карамельных продуктов, так и от углеводов. Способ очистки гидролизатов от углеводов найдет широкое применение в приготовлении азотистых питательных основ для микробиологических целей,паранте. рального питания больных с травмамй, для создания. пищевых смесей больным диабетом и т.д.

Составитель Е.Житникова

Редактор Е.Лушникова Техред A.À÷ Корректор Г.Решетник

«В

Заказ 1988/38 Тираж 823 . Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

1 м

Филиал ППП "Патент", г.ужгород, ул.Проектная, 4

Цветность в 0,5 см кювете светофйльтр В 9 ФЭК 56М-У4.1= 0,00.

Качественная аминограмма: открытотриптофан,лизин, гистидин, аргинин, Углеводы

Аминный азот

Общий азот

Биуретовые продукты

Сухие вещества

Зола

Следовательно, 97,7% углеводов удалено при очистке при полной сохранности всех аминокислот. Избытка гексаметилендиамина не может быть, так как имеется остаточное .количество углеводов 26,84 мг В.

Наличие остаточных количеств диаминов в основах исключается тем, 30 что процесс не доводится до 100% удаления углеводов. Отсутствие токсического эффекта гидролизатов, очищенных от углеводов, быпо установлено в экспериментах на белых мышах. Это подтверждается и посевами кишечной палочки на экспериментальных средах из этих продуктов. Изучение аминокислотного состава гидt

16,84 мг В

302, 5 мг Ф

558,6 мг В

229,6 мг 8

2,69 г

189,9 мг Ф