4,9-бис-аминопроизводные дипиримидо-5н-(4,5-в)-(4 @ ,5 @ - @ )-(1,4)тиазина, обладающие цитостатическим противоопухолевым и антиредуктазным действием

4,9-бис-аминопроизводные дипиримидо-5н-(4,5-в)-(4 @ ,5 @ - @ )-(1,4)тиазина, обладающие цитостатическим противоопухолевым и антиредуктазным действием

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

1.А,9-Бис-амйнопроизводные дипиримидо-5Н- (,5-в) (,5-е)

СОЮЗ С08ЕТСКИХ социолистичьских я 1p8ggp4 А (54)5 С 07 D 513/14; A 61 К 31/505;

А 61 К 31/54

ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕ

ВЕДОМСТВО СССР ° (ГОСПАТЕНТ СССР) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К А ВТОРСКОМ,Ф СВИДЕТЕЛЬСТВУ азина

N И Я

1 (21) 3491211/04 (22) 08. 09. 82 (46) 30.10.92.Бюл. У 40 (71) Всесоюзный научно-исследовательский химико-Фармацевтический институт им.С.Орджоникидзе:. (72) Н.И.Травень, М.П.Немерюк, Т.Г.Арутюнян, E.À.Шатухина, А.С.Соколова, Ю.А. Ершова, Н.А. Рябо-.. конь, В.А.Чернов и Т.С.СаФонова (56) Авторское свидетельство СССР 550829, кл. C 07 D 513/14, 1975 °

В.А.Чернов. Методы экспериментальной химиотерапии. М., Медицина, 1971, с,357-403.

Н.А.Рябоконь, Н.А.Андреева и др.

Производные пиримидо-(4,5- В )-(1,4) тиазина - новый тип, антагонистов Фолиевой кислоты "Хим.Фарм. Я. Р 4, 1975, с.15-18. (54) 4, 9-GNC-АМИНОПРОИЗВО Н iЕ .0ИПИРИМИД0-5Н-(4,5-в)- (4, 5 -е)-(1, 4)

ТИАЗИНА, ОБЛАРАЮЦИЕ ЦИТОСТАТИЧЕСКИМ, ПРОТИВООПУХОДЕВЫМ И АНТИРЕДУКТАЗНЫМ

ДЕЙСТВИЕМ (57) 1.4,9-Бис-аминопроизводные дипиримидо-5Н-(4,5-в) (4,5 -е)(1, 4)тиазина общей Формулы Н

rpe R — P --диэтиламиноэтиламиногруппа, или N-(N -диэтилкарбамоил)-пиперазино-, или N-(N -метил)-пиперазиf но-, или N- (1,4-диазабицикло (3,3,0) нонанил-41 группу, обладающие цитостатическим и противоопухолевым дей-.. ствием.

2. 4,9-Бис-аминопроизводное дипиримидо-5Н-(4,5-в)(4,5 -е)(1.4)тиобладающее антиредуктазным действием, цитостатическим и противоопухолевым действием.

1085204

Изобретение касается новых химических соединений, относящихся к классу дипиримидотиазинов, а именно производных дипиримидо-5Н-(4,5-в) (4,5 -е)(1,4)тиазина общей формулы Н

В.

М

10 M s R=R

) где R --P.-диэтиламиноэтиламиногруппа -NH-СН СН М(С И g или 15

N-(N диэтилкарбамоил).-пиперазино""" -NN-аиМ,@, или N-(N -метил)-пиперазиногруппа 20

-1(и-СК, или N-Г1 4-диазабицикло (3,3,0) нонанил-4 группа 25 — K M

Известны производные ряда дипиримидотиазина общей Формулы II 30

Н где R< и R< — метоксигруппа (IIa) 40 или R< — диметиламино, à R< — метоксигруппа, или R< — метоксигруппа, а Rg — диметиламиногруппа.

Наиболее близким по структуре и действию аналогом заявляемых соединений оказалось соединение IIa.

Установлено, что оно обладает слабо выраженным цитостатическим и противоопухолевым действием. Антиредуктазную активность соединения

IIa выявить не удалось в связи с его плохой растворимостью в воде.

Цель изобретения - расширение арсенала средств в ряду производных дипиримидотиазина, обладающих цитостатическим, противоопухолевым и антиредуктазным действием.

Указанные свойства определяются химической структурой заявляемых производных дипиримидотиазина формулы I.

Способ получения заявляемых соединений основан на известной реакции замещения галогена в галогенпроизводных гетероароматических соединений на остатки различных аминов.

Соединения Формулы I получают взаимодействием соединения Формулы III (Я.

Ц

3l, с амином общей Формулы щ н а2 у где К вЂ” диэтиламиноэтиламиногруппа или вместе с атомом азота N-(K N- N диэтилкарбамоил) -пиперазиновый или

-(-метил)-пиперазиновый, или 1-(1,4-диазабицикло(3,3,0)нонанил-4$овый. радикал, в среде инертного органического растворителя при 70-00 0.

Исходное соединение формулы Ш— новое и представляет собой желтое кристаллическое вещество, растворимое в горячем низшем спирте, бензоле, толуоле, ацетоне. Т.пл. 202-203 С.

Способ получения его основан на реакции замещения 4,9-диоксидипиримидотиазина с хлорокисью фосфора в присутствии диметиланилина.

В качестве органического растворителя обычно используют бензол или толуол.

Нижеследующие примеры иллюстрируют способ получения заявляемых соединений формулы I и исходного соединения Формулы Ш .

fl p и м е р 1. Пол:учение 4,9-бис(P-диэтиламиноэтил)-аминодипиримидо5Н-(4,5-в) (4,5 -е) (1,4)тиазина (Ia)

К суспензии 3 r (11,5 ммоль) 4,9дихлордипиримидотиазина в 90 мл бензола прибавляют раствор 10,2 г (87 ммоль) (3 --диэтиламиноэтиламина в

3 мл бензола, нагревают до кипения

30 о o O (78-оО С) и кипятят 3 ч, после чего упаривают в вакууме досуха. Растирают с водой (20 мл), экстрагируют хлороформом (3х25 мл). ХлороФорм отгоняют в вакууме, остаток растирают

35

5 10852 с петролейным эфиром (20 мл), отфильтровывают затвердевшее вещество.

Получают 3.,6 г (76 ) соединения

Ia в виде кристаллов желтого цвета с т.пл. 178-!80 С (из бензола).

Найдено,1: С 55,46; H 7,71;

N 30,10.

С о H yN S (И.м. 431,6).

Вычислено,ж: С 55,65; Н 7,70;

N 30,30

ИК-спектр () ), см: 3100, 3220 (4-,5,9 NH) °

Пример 2. Получение 4,9-бисN-(N -дизтилкарбамоил)-пиперазино- 15 дипиримидо-5Н-(4, 5-в)(4, 5 -е)(1, 4) тиазина (?Ь).

В условиях примера 1 из 1 г (3,7 ммоль) 4,9-дихлордипиримидотиазина и 2,7 г (14,8 ммоль) N диэтилкар-20 бамоилпиперазина получают 2 г (953) соединения Хб в виде желтых кристаллов, с т.пл. 136-142 С (из этилацетата).

Найдено,Ф: С 54,52; H 7,10;

N 26,79..

С Н .н OzS (И.м. 569,7) °

Вычислено,4: С 54,81; Н б,90;

N 27,04.

ИК-спектр (0),см : 1630-1640 30 (СО амида), 3200 (5-NH).

Пример 3. Получение 4,9-бисN-(N -.ìåòèë)-пиперазинодипиримидо-5Н(4,5-в) (4,5 -е) (1, 4) тиазина (Is) .

В условиях примера 1 из 1 r (3,7 ммоль) 4,9-дихлордипиримидотиазина и 3 г (29,6 ммоль) М-метилпиперазина получают 1,3 г (89,23) соединения Is в виде кристаллов желтого цвета с т.пл. 173-174ОС (из 40 циклогексана).

Найдено,Ф: С 54,06; H б,37;

N 31,67; S 8,16.

С (6 Нав1Я9 (M м. 399у 5) °

Вычислено,1: С 54,10; Н 6,30;

N 31,5; S 8,02.

ИК-спектр (0),см : 3200 (5-NH) °

Пример 4. Получение 4,9-бисN-(1,4-диазабицикло (3,3,0) нонанил 4)дипиримидо-5Н-(4,5-в)(4,5 -е)(1,4) 50 тиазина (Хг).

К суспензии 1 г (3,7 ммоль)

4,9-дихлордипиримидотиазина в 45 мл бензола прибавляют 4 г (29,6 ммоль)

1,4-диазаспиробициклононана в 10 мл этанола и кипятят 8 ч. Смесь упаривают, растирают с 15 мл воды, зкстрагируют хлороформом (Зх25 мл). Хлороформ отгоняют в вакууме, остаток растирают со смесью этилового и петролейного эфира (1: 2),оставляют для кристаллизации на 72 ч. Выпавший затвердевший осадок отфильтровывают.

Получают 0,9 г (54,5:о) соединения

1г в виде желтых кристаллов с т.пл.

135-137 С (из этилацетата).

Найдено.4: С 58,72; Н 6,25; 27,89; s 7,4.

Czz HzqNgS (М. м. 451,6)

Вычислейо. . С 58,50; Н 6,40;

N 27,90; S 7,10.

ИК-спектр (Э),см : 3200 (5-NH).

Пример 5, Получение 4,9-ди-. хлордипиримидо-5Н-(4,5-в) (4,5 -е) (1, 4) тиазина (III) . а) Получение 4,9-диоксидипиримидотиазина.

Смесь 8 г (30,4 ммоль) соединения

IIa с 400 мл 364-ной НС1 нагревают о на кипящей водяной бане (95-100 С) в течение 2,5 ч. Выпавшее вещество отфильтровывают, промывают водой (50 мл).

Получают 6,5 r (9A) 4,9-диоксидипиримидотиазина, который после сушки направляют на получение дихлорпроизводного. б) Получение 4,9-дихлордипиримидотиазина.

Смесь 1 г (4„3 ммоль) 4,9-диоксидипиримидотиазина с 20 мл хлорокиси фосфора и 1, 1 г (4,3 ммоль) . диметиланилина кипятят при 105-108 С в течение 3 ч, отгоняют в вакууме приблизительно 15 мл хлорокиси фосфора, остаток смешивают осторожно при охлаждении льдом с 30 г льда.

После разложения остатков хлорокиси отфильтровывают вещество, отмывают водой от кислоты, затем спиртом.

Получают 0,9 r (784) соединения

III s виде желтых кристаллов с т.пл.

202-203 С (из бензола).

Найдено,4: С 35,53; Н 1,11;

N 26,2;3 Сl 26,08; S 11,15.

CgHgiV ClzS (И.м. 272) .

Вычислено 4: С 35 30; Н 1,10

N 25,8; Cl 26,10; S 11,80. ИК-спектр (0),см : 3250 (5-NH).

Все заявляемые соединения формулы I проявляют цитостатическое и противоопухолевое действие. Одно соединение Is обладает. кроме вышеуказанных, и антиредуктазной активностью.

10852047 .Количественная характеристика биологической активности заявляемых соединений. а) Цитостатическое действие.

Цитостатическое действие заявляемых соединений изучали 10 vitro в первичных культурах нормальной (Н) (сердце куриного эмбриона) и опухолевой (О) (саркома 45) тканей в сравнении с известным соединением

IIa.

Оценку действия соединений производили после 72- или 96-часовой ин-, кубации с исследуемым вец еством при 1с;

37оC. Индекс торможения (Ет) вычислен по известной методике.

Результаты исследования представлены в табл.1.

Таблица1 20

Сравнительные данные исследования цитостатического,действия заявляемых и известного соединений

Соеди- Культунение ра ткани

Ет(в Ф) при концент- 5 рации, мг/мл

1 О1 001

30 б) Противоопухолевая активность.

Изучение активности соединений формулы I проведено в опытах in vivo на 316 крысах с перевиваемыми опухо35 лями саркомы Иенсена и И-1 крыс в сравнении с известным соединением

IIa, Для сравнительной оценки изменения веса опухоли (Т,:;) животных леченной группы по сравнению с конт40 рольной заявляемые соединения вводи" ли per os. в виде суспензии в подсол-, нечном масле или внутрибрюшинно (в/б) в виде раствора в изотоническом растворе хлорида натрия. один раз

45 в день в течение 8 дней. Результаты и педований приведены в табл.2.

I6

О 100 - 54

IIa (из- Н вестное) О

20 0 0

20 0 0 к

Табл и ца 2

Результаты сравнительного изучения противоопухолевой активности и токсичности заявляемых соединений

Тормоыение роста опухоли (т) д

Разовая (те" рапевтическая) доза, мгlкг

Соеди- Путь ввенение дения

Число вве" дений

Щ р пpH однократном введении мышам, мгlкг да рек os 8 L6 per os 8

Ц7

20

500

100

О 100 60 0

Н 100 50 0

48

О 100 100 56

Н 100 60 0

О 100 62 0

Как видно из экспериментальных данных, представленных в табл.1, заявляемые соединения Еа-г в концентрации 1 и 0,1 мг/мл подавляют рост культур нормальной и опухолевой тканей на 40-100О;, причем в концентрации 0,1 мг/мл соединения Ia-Ir, а соединение Ев и в концентрации

0,01 мгlмл проявляют избирательность действия на опухолевую ткань, подавляя ее рост на 54-100 и 563 соответственно.

Известное соединение IIa в относительно высокой концентрации (1 мгlмл) проявляет лишь незначительное цитостатическое действие на нормальную и опухолевую ткань, подавляя ее рост на 201.

Таким образом, можно сказать, что цитостатическое действие заявляемых соединений значительно выше, чем у известного структурного аналога ЕХа, и кроме того, соединения Ia u Ie обладают избирательностью действия на опухолевую ткань.

1085204

I Ll roo при однократном введении мышам, мг/кг

Разовая (терапевти еская) доза, мг/кг

7ормомение роста опухоли (Т),<

Путь вве- Число введения дений

Соединение в/б 8 г0 58 . 50

Kr рег os 8 100

29 500

IIa известное рег os

15-17

100

500

Составитель

Редактор Е.Гиринская Техред И.Иоргентал Корректор O.Кравцова .

Заказ 4574 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г,ужгород, ул. Гагарина, 101

Как видно из табл.2, соединения

Ia-г тормозят рост крысиных опухолей на 29-58/. Известное соединение

IIa в тех же условиях тормозит рост опухолей только на 15-17/. в) Оценка токсического действия соединений формулы I.

Как видно из данных табл.2, заявляемые соединения Тб и Ir не токсичны. Летальная доза их, вызывающая гибель 1004 мышей (Щ о), при однократном введении составляет 500 мг/

/кг. Ж оо соединений Ia u Ie составляет 50-150 мг/кг. в) Антиредуктазная активность (ингибирующая активность по отношению к дигидрофолатредуктазе.

Дигидрофолатредуктазу (ДФР) выделяли из печени здоровых животных (крыс). Активность ДФР определяли колориметрическим методом по известной методике (3).

Согласно методике (3) при изучении антиредуктазной активности исследуемые соединения используют в виде водных растворов, с добавлением буферной смеси.

Поскольку заявляемые соединения

Ia,Iá, Ir и аналог IIa практически нерастворимы в воде, то выявить у них антиредуктазную активность не представлялось возможным. Из всех заявляемых соединений только соедиt

15 нение Ia оказалось растворимым в

V воде, и поэтому только у него была обнаружена антиредуктазная активность. Соединение Ie в концентрации

1 ° 10 6 И угнетает активность ДФР на

343, а в концентрации 1 10 И - на

83 о °

Сравнительные данные антиредуктазной активности заявляемого соедине25 ния Ie и известного IIa не приводят- „ ся из-за плохой растворимости IIa.

Как видно из данных настоящего исследования, заявляемое соединение

Ia проявляет выраженную антиредуктазнуа активность в концентрации

1 10 И.

В заключение можно сказать, что вышеуказанные исследования подтверждают идентичность заявляемых свойств у соединений формулы I, а именно на35 личие у всех соединений цитостатической и противоопухолевой активности и у одного из соединений - Хв дополнительного нового свойства - антиредуктазной активности.

40 Таким образом, можно сказать, что заявляемые соединения могут представить интерес в плане поиска потенциальных лекарственных средств в „ ряду дипиримидо-5Н-(4,5-в)(4,5 -е)

45 (1,4)тиазина, обладающих цитостатическим, противоопухолевым и антиредуктазным действием.