Способ получения производных цефалоспорина

Способ получения производных цефалоспорина

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРОИЗВОДНЫХ ЦЕФАЛОСПОРИНА общей формулы к, R.-««-i-/1 . ;д снг8д1 . Ан,Д1 -н . где R - водород, 2-тиенилацетил, сС-формилокси-фенилацетил или группа формулы к.-с-ётт OR, э в виде син-изомера, где Кл - 2-аминотиазол-4-ил или фурил-2 и Rg-C -C -алкил; RJ - водород или метоксигруппа; Rj - водород или метил, отличающийся тем, что соединение общей формулы S к.-ш. 1J/ V. о соон где R и RJ имеют указанные значения; R, - ацетоксигруппа или галоген, или его соль с щелочным металлом, СО или его сложный эфир, такой как п-нитробензиловьй , подвергают взаимодействию с соединением общей формулы -N--N II II нв кг СНг ОС ЛЛ тч о Ч О5 где RJ имеет указанные значения, в среде инертного органического растворителя при комнатной температуре или при нагревании с последующим выделением целевого продукта.

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИН

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н ПАТЕНТУ

1 ! 2

Ь;ЗН вЂ” 1

cH. -В6

cow Щ

k, 0

R — С вЂ” С— }}

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

fl0 ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3336819/23-04 (22) 16.09.81 (3 1) 187859 (32) 17.09.80 (33) США (46) 15. 04.84. Бюл. Ир 14 (72) Аллен Самуэль Катнер (Великобритания) (71) "Эли Лилли Энд Компани (США) (53) 547.869. 1.07(088.8) ($6) 1. Патент Японии У 54-42999, кл. С 07 D 501/36, опублик. 1979. (54)(57) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРОИЗВОДНЫХ ПЕФАЛОСПОРИНА общей формулы

R2 в,-вк В

0 где К1 — водород, 2-тиенилацетил, о -формилокси-фенилацетил или группа формулы

„„SU „„1087076 А

3(51) С 07 0 501/36; С 07 D 501/57 //

// А 61 К 31/545 в виде син-изомера, где R — 2-аминотиазол-4-ил или

4. фурил-2 и R -С -С -алкил °

t

R — водород или метоксигруппа;

R — водород ипи метил, отличающийся тем, что соединение общей формулы

СО0Н где R и R имеют указанные значения;

R — ацетоксигруппа или галоген, или его соль с щелочным металлом, или аго сложный эфир, такой как п-нит. Q) робензиловый, подвергают взаимодействию с соединением общей формулы

N Ж

) 1( с" в2

О

3 Cb где R имеет указанные значения, в среде инертного органического растворителя при комнатной температуре или при нагревании с последующим выде- р лением целевого продукта.

1087076

Изобретение относится к способу получения новых производных цефалоспорииа, а именно 7-ациламиноцефалоспоринов, замещенных в положении 3 бис-тетразолилметил-тиометильным 5 радикалом, которые обладают свойствами антибиотиков и могут найти применение в медицине.

Известен способ получения антибиотиков цефалоспоринового ряда, содержащих в положении 3 моно-тетраэолилметил-тиометильный радикал.

Например извес1 ен способ получения

76-ацилаиино-7сФ-метокси-3-(1"метилтетразол-5-иптиометил)-3-цефем-4-карбоновых кислот взаимодействием

76-аципамино-7о метокси-3-ацетоксиметил (или 3-карбамоилоксиметил)-3-цефем-4-карбоновой кислоты или ее соли с 1-метил-5-меркаптотетразолом или с его щелочнометаллической солью в среде растворителя (11.

Цель изобретения - получение новых антибиотиков цефалоспориново25 .го ряда, расширяющих арсенал средств воздействия на живой организм.

Цель достигается основанным на известной реакции получения эфиров тиолов способом получения производных цефалоспорина формулы

1О

g;llKg

$

55 (н) м сН;36

С00Н где R водород, 2-тиенилацетил, 3

0-формилоксифенилацетил или группа формулы О

И

К вЂ” С вЂ” С—

11

° д 45

os в виде син-изомера, где R4 — 2-аминотиазол-4-ил или фуРил-2 и R<-С -С4-алкил; 5О

Rg — водород или метоксигруппа;

R — водород или метил, . заключающийся в том, что соединение формулы р

К вЂ .й ! где R„ R имеют укаэанные значения;

R — ацетоксигруппа или атом галогена, или его соль с щелочным металлом или его сложный эфир, такой как п-нитробензиловый, подвергают взаимодействию с соединением формулы

Н$ где R имеет указанные значения, в среде инертного органического растворителя при комнатной температуре, или при нагревании с последующим вьщелением целевого продукта.

Соединения, получаемые с помощью предлагаемого способа, имеют нормальную стереохимию цефалоспориновых антибиотиков с боковой цепью в 7-положении, имеющей 8-конфигурацию, и если R -7-метоксигруппа, R имеет альфа-конфигурацию.

Реакция может быть проведена в безводных условиях, когда используют свободную кислоту формулы (Н) или ее сложный эфир, или в водных условиях, когда используют свободную кислоту, когда используют сложный эфир соединения формулы (Н), деэтерификацию пара-нитробензил сложного эфира проводят с помощью методов восстановительно расщепления, например путем каталитического гидрогенолиза с использованием 57.-ного палладия на угле в инертном растворителе, таком как тетрагидрофуран или ацетонитрил, либо с помощью элект ролитического восстановительного расщепления на катоде в ртутной ванне.

Цистетразолилметил-тиометилэамещенные цефалоспорины являются антибиотиками широкого спектра, ингибирующими рост как грамположительных, так и грамотрицательных микроорганиз" мов, которые являются патогенными по отношению к людям и животным.

Антибактериальная активность этих соединений изучена в опытах, проведенных в пробирке, с использованием метода, использующего раствор агара.

В приводимой ниже табл. 1 указана минимальная ингибирующая концентрация для испытуемых соединений.

1087076

Микроорганизм

Штам

1 4 4 2 . 4.staphylococcus aureus

0,5 XI. I 2

8 16 8

У41 2 2

Х400 16 32

S13E 8 4

4 8

)128 )128 )128 ) 128 )128

16 32 16. 8 32

Staphylococcus epidermidis

EP II 16 4

ЕР12 8 4

16 8

64 32

32

32

Streptococcus Group А

0,5

С203

0,06 О, 03 0,03

0,5 1

4 2

0 5

0,25 0,25 0,03 0,015 0,03

Streptococcus pneumoniae

Streptococcus Group D

PAPK

128 )128 )128 )128

Х66 64 128

) 128

)1 28 64

)1 28

9960

128 64

16 16

Haemopbilus inf luenzae Brun2

0,015 О, 125 О, 125 0,06

0,015 О, 125 О, 12) 0,06

СL 025 1

76 0,25 0,5

0,25 О, 125 О, 125 2

Shigella Sonnei

Escherichia coli

8 - 4

N10 8 4

ЕС14 4 2

ТЕМ 4 8

Х26 1 О 5

KAE 4 ) 128

0,25 0,25 0,25

0,25 0,125 0,06 0,06 0,125

0,125 0,125 0,125

О 06 006 0125

Klebsiella sp. и II

)128 )128 16 4

Entегоbacter aегоgenes Х68

0,25 0,25 0,06 О, 125 0,06

4 0,5

128 32

0,25 0,125 0,25

0,25 0,25 0,25

С32

0 5

ЕВ17 128 16

ЕВ5 128 )128

265А 128 )128.

Х514 1 О 5

1335 2 1

128 2

cloaca

)128 128 64 32 Salmonella sp.

0,125 0,25 0,125

0,5

0,25 0,5

)128 8

128 )1 28

128 )128

128 )128

16 )128

Pseudomonas aeruginosa

Х528

16 32

)128

Х239

)128

32

PS18

Serratia marcescens

0,25 0,125 0,25

Х93

0,5

128 4

SE3 64 ) 1?8

PR15 64 64

Proteus morganii

0,06 О, 12 > г

3 4

Лнтибактериальиая активность в пробирке бис-тетразолметил цефалоспорипов

Таблица 1

1087076

Продолжение табл. 1

Испытуемое соединение "

Минимальная ингибирующая активность, мкг/мл

А В С О 1 е F С

Штамм

Микроорганизм

4 64 2 2 0 125 0 5 1

4 4 4 4 0 125

1 8 05 8 0125 28 )128 )128 32 32

0,03 0,03

0,25 2

16 64

Bordetella bronchoseptica 16 >1 28 8

128 64

32 32

Сноски к таблице 1.

1. Испытуемое соединение:

А. 7В-(2-тиенилацетамидо)-7-альфа20

-мет окс и-3- $1- (1 Н -т етр а зол-5-илметил)-1Н-тетразол-5-илтиометил 3. -цефем-4-карбоновая кислота;

В. 78-(2-тиенилацетамидо)-3- (1-(1-метил-1Н-тетразол-5-илметил)-1Н25

-тетразол-5-илтиометил)-3-цефем-4-карбоновая кислота;

С. 7В-(D-орто-формилминдалоамидо)—

-3-j1-(1Í-тетраэол-5-илметил)-1Н-тетразол-5-илтиометил)-3-цефем-430

-карбоновая кислота;

D. 7В-jD-альфа-(4-этилпиперазил-2,3-дион-1-илкарбониламино)-альфа-(4-оксифенил)ацетамидо)-3-(1Н-тетразол-5-илметил-1Н-тетразол-5-илтиометил—

-3-цефем-4-карбоновая кислота;

Е. син-7В- альфа-метоксимино-альфа-(2-амино-1,3-тиазол-4-ил)-ацетамидо-3-(-1-(1Н-тетразол-5-илметил )-1Н

-тетразол-5-ил-тилметил)-3-цефем-4-карбоновая кислота;

F. син-7В- альфа-метоксимино-альфа"

-(2-амино-1,3-тиазол-4-ил)-ацетамидо)-3- (1-(1-метил-1Н-тетразол-5-илметил)-.

-1Н-тетраэол-5-илтиометил)3-цефем-4-карбоновая кислота.

С. син-7В-(альфа-метоксимино-альфа"

-(2-амино-1,3-тиазол-4-ил)-ацетамидо)-3-(2-(1Н-тетразол-5-илметил)-2Н-тетразол-5-ил-тиометил) -3-цефем-4-карбоновая кислота.

2. Н. штамм, чувствительный к гриппу.

3. Н. штамм, устойчивый к гриппу.

Данные, представленные в таблице, получены с помощью метода испытаний

Мюллера-Хинтона с использованием раствора агара, содержащего 27

Supp7emat С (Difco). Серийные двуЕД (мг/кг х 2)*

Staphylococcus

aureus (30SS) 7,6

Proteus inconstans PR33

rettgeri PR7

II 11

С24

Citrobacter freundii CF17 кратные разбавления использованы в опытах с максимальными концентрациями, равными 128 мгк/мл.

Соединение Е (табл. 1), являющееся предпочитаемым соединением в соответствии с изобретением, введено мышам, зараженным различными патогенами с целью определения эффективной дозы соединения (ЕД ). В указанной табл. 2 значения ЕД определены для

50 указанных инфекций.

Таблица 2

Активность соединения Е для мышей в живом организме

Escherichia coli (Е .С. 14 ) О, 16

Proteus vu1garis (PV2S) 0,12

Serratia marcesceus (SE3) 1,0

Streptococcus pyogenes (С203) 0,21

* подкожные дозы спустя 1 ч и 5 ч после инфекции.

Соединение Е оказалось также эффективным при лечении устойчивого к ампициллину менингита вида Hacmophilus influenzae у детенышей крыс.

Соединение, как оказалось, присутствует в эффективных количествах в спинномозговой жидкости крыс, которым вводят это соединение подкожно в количестве 20 мг/кг живого веса.

Предлагаемые соединения оказываются

1087076 эффективными при лечении инфекционных заболеваний у людей и животных в тех случаях, когда они вводятся парентерально при эффективной дозе в диапазоне примерно от 50 мг/кг живого. веса до пр арно 500 мг/кг живого веса. Соединения также могут быть введены внутримьппечно или внутривенно в пригодных приготовлениях.

Для внутримышечного введения можно получить стерильные растворы солевой формы соединения, в фармацевтическом растворителе, таком как вода, предназначенная для инъекций, физиологический соляный раствор либо в виде 15 суспензии в соответствующем фармацевтически пригодном масляном основании, таком как сложный эфир длинноцепной кислоты жипного ряда, такой как этилолеат. При внутривенном. 20 вводе фармацевтически пригодная солевая форма соединения приготавливается в физиологической жидкости, такой как раствор Рингера, 5Х-ная декстроза или другая пригодная 25 физиологическая жидкость. В общем случае при антибиотической терапии количество вводимого антибиотика зависит от тяжести заболевания, восприимчивости отдельного пациента, типа 30 микроорганизма или микроорганизмов, вызвавших заболевание. Обычно эти соединения вводятся от 2 до 4 раз в день до тех пор, пока инфекция не будет уничтожена.

Приводимые ниже примеры иллюстрируют изобретение. В этих примерах сокращение HPC означает жидкостную хроматографию с высокой разрешающей способностью, и, если нет другого 40

l указания,то используется силикагелевая колонка типа Waters ad Associates

Mode2 500.

Спектр ядерно-магнитного резонан45 са определен с помощью спектрометра типа Varian Associates Model Т-60, спектрометр типа Jeol Model FX 90 использован для спектра при частоте

90 Игц и спектрометр типа Jeol

Model PFT-100 использован при частоте 100 МГц. Триметилсилан использован в качестве стандарта при определении спектра ядерно-магнитного резонанса.

Обозначения, использованные при идентификации спектра ядерно-магнит55 ного резонанса, означают S-синглет, q-квартет, m-мультиплет, d-дублет, t-триплет.

В этих примерах для обозначения определенных типов растворителей использованы следующие обозначения:

THF-тетрагидрофуран, ДМР-диметилформамид, ДИАС-диметилацетамид, MA-триметилсилилацетамид, ВА-бис-триметилсилилацетамид.

Пример 1. 7-амино-3-(1-(1-метил-1Н-тетразол-5-илметил)-1Н-тетразол-5/илтиометил/-3-цефем-4-карбоновая кислота.

Раствор 1,54. r 7-аминоцефалоспорановой кислоты и 1 r (5 ммоль)-1-/1-метил-1Н-тетразол-5-илметил-/1Н-тетразол-5-тиола в 7 мп ледяной уксусной кислоты нагревают в масляной ванне до 65-70 С. К полученной таким образом горячей реакционной смеси добавляют 3,6 мл эфирата трифторида бора. Полученную таким образом реакционную смесь нагревают при 65-70 С в течение 1 ч при пере0 мешивании. Эту реакционную смесь далее охлаждают до комнатной температуры и добавляют I0 мя воды. После добавления воды реакционную смесь перемешивают в течение 15 мин, затем фильтруют и охлаждают в ледяной ванне. Величину водородного показателя холодной смеси доводят до

4,5 ед. рН с помощью концентрированной гидроокиси аммония. Образовавшийся осадок отфильтровывают, промывают повторно водой, затем ацетоном и в заключение диэтиловым простым эфиром. Полученный твердый продукт белого цвета сушат в вакууме в течение 1 ч при 40 С. Получают 1,5 r (80Z от теоретического) соединения, указанного в заголовке.

Элементный анализ, рассчитанный для С Н И О Б

Вычислено, Х:С-35,12; Н-3,44;

121410 3 2

N-34,13; S-15,62.

Найдено, Ж: С-35,62; Н-3,53;

М-31,; S-14, 52, ИК спектр (KBr) карбонильное поглощение при 1800 см

Пример 2.7-амино-3-(IH-тетразол-5-илметип)-1Н-тетразол- 5-илтиометил/-3-цефем-4-карбоновая кислота.

В соответствии с этим примером суспензию, состоящую из 5,3 г (29 ммоль) 1-(1Н-тетразол-5-илметил)-1Н-тетразол-5-тиола и 6,8 r (25 ммоль) 7-аминоцефалоспорановой кислоты, суспендируют в 38 мл ледяной уксусной кислоты и полученную о суспензию нагревают от 62 до 65 С

108

7076

9 в масляной ванне. К горячей суспензии добавляют 16,6 мл эфирата трифторида бора (дистиллированного); причем достигается практически полное растворение. Полученную таким образом смесь нагревают в течение

1 ч при температуре примерно от 60 до примерно 65 С при перемешивании.

О

Реакционную смесь охлаждают и перемешивают в течение 1 ч при комнатной температуре и затем добавляют

45 мл воды. Разбавленную реакционную смесь охлаждают до 0 С и величину о водородного показателя доводят до

4 с помощью концентрированной гидроокиси аммония. Полученный продукт осаждают, промывают водой, ацетоном, простым дизтиловым эфиром и затем сушат в вакуумной печи 2 ч при

50 С. Получают 8 г продукта (88 . от теоретического) в виде порошка светло-бежевого цвета. . Спектр ядерно-магнитного резонанса (Т-60, бикарбонат натрия/D,О)р.рм:

4,3 (тп, 2Н,С-З метилен) и 5,9 (S, 2Н, метиленовые, имеющие мостиковую связь, тетразольного кольца), дельта.

Пример 3. 78- альфа-метокс ..:ино-альфа-(2-амино-1,3-тиазол-4-ил)-ацетамидо)-3- (2- (1Н-тетразол-5-илметил)-2Н-тетразол-5-илтиометил)-3-цефем-4-карбоновая кислота.

К раствору, состоящему иэ 202 мг (1,2 ммоль) 2-/1Н-тетразол-5-илметил-2Н-тетразол-5-тиола в 6 мл буферного раствора, имеющего величину водородного показателя, равную

7 (полученную с помощью 176 мг, 2, 1 ммоля, бикарбоната натрия), добавляют 460 мг (1 ммоль) 78-/альфа-о

-метокси-имино-альфа-(2-амико-1,3-тиазол-4-ил)ацетамидо/цефалоспорановой кислоты и полученный таким образом раствор нагревают в масляной ванне в течение 22 ч при 55—

60 С. Спустя этот период времени с помощью хроматографирования реакционной смеси в тонких слоях установлено, что реакция завершена на 50 .

Дополнительно 100 мг тиола и эквивалентное количество бикарбоната натрия добавляют к реакционной смеси.

Полученную таким образом реакционную смесь нагревают в течение. примерно

12 ч при 55-60 С, охлаждают до комнатной температуры и промывают 2 раза порциями по 50 мл этилацетата.

Водную фазу отфильтровывают и фильтрат охлаждают в я дяной ванне до

55 температуры примерно 0 С. Величину рН при интенсивном перемешивании и продукт осаждают в виде осадка желтооранжевого цвета. Продукт отфильтровывают, промывают водой и сушат при комнатной температуре в вакууме.

В результате получают 153 мг смеси сини анти-форм продукта, Эти изомеры разделяют с помощью силикагеля с обратимой фазой, используя для этого смесь, состоящую из 15Х ацетонитрила, 2Х уксусной кислоты и 83 воды (об.Х).

ЯМР син-изомера: (360 МГц, ДАРБО-dp:

;d" 3,65 (m, 2Н,С-2,метилен), 3,85 (S, ЗН, оксим метил), 4,27 (m, 2Н, С-З-метилен), 5, 13 (d, 1H, С-6Н), 5,82 (g, 1Н,С-7Н), 6,42 ($1 2Н, метиленовые, с мостиковыми связями, тетразольного кольца), 6,78 (S, 1Н, теазол, Н), 7,29 (широкий S, 2Н, тиазоламино), и 9,61 {d, 1Н, 7-амид H) ррм.

ЯМР анти-изомера: (Зо0 МГц,ДМБО-.d):

3,60 (о 2Н, С-2 метилен), 3,95 (S, ЗН, оксим метил), 4,27 (m, 2Н, С-З, метилен), 4,97 (d, 1Н, С-6 Н), 5,76 (g, 1Н, С-7 Н), 6,33 (S 2Н, метиленовые, с мостиковыми связями, тетразольного кольца), 7,14 (широкий

S, 2Н, тиазол-амино Н), 7,46 (S, (.Н, тиазол Н), и 9,43 (а 2Н, 7-амид

Н) ррм.

Пример 4. 7-(2-тиенилацетамидо)-3-/1-(1Н-тетразол-5-илметил)-1H-тетразол-5-илтиометип-/- 3-цефем-4-карбоновая кислота.

Раствор 808 мг (2 ммоля) 7-/2-тиенилацетамидо/-3-ацетоксиметил-3"

-цефем-4-карбоксилата натрия (цефалотина натрия); 368 мг (2 ммоля)

1-/1FI-тетразол-5-илметил/-1Н-тетра зол-5-тиола и 168 мг (2 ммоля) бикарбоната натрия и 16 мп воды нагревают в масляной ванне в течение 7 ч при .55-60 С. Эту реакционную смесь концентрируют под вакуумом до объема примерно равного 8 мл и вводят в силикагель с обратимой фазой препаративного жидкостного хроматографа с высокой разрешающей способностью.

Разделение достигают в начале с использованием смеси, состоящей из

15 o6. ацетонитрила, 2 об.Х уксусной кислоты и 83 об.Х воды. Собирают множество фракций объемом 20 мп и после примерно 90 фракций их собирают и в качестве элюента используют смесь, состоящую из 20 ацето108707е

12 нитрила и 80 води. Фракции 133-153, содержащие продукт, соединяют и выпаривают. Получают 350 мг кристалли. ческого продукта, представляющего собой паранитробензиловый сложный эфир. Фракции 1<;i-193 содержат исходный материал — цефалотин натрия.

Следующие данные получают для кристаллического продукта.

ЯМР (100 МГц,ДМБО-а ): 3,63 (m, 2Н, С-2 метилен) 3,73 (S, 2Н, тиофенацетил метилен), 4,32 (ш, 2Н, С-3 метилен), 5,04 (с1 1Н, С-б), 5,63 (g, 1Н, CjH), 7.,97 (S, 2Н, тетразолметипен), 6,8-7,4 (m, ЗН, тиофен Н), и 9 08 (d, 1Н, 7 амид Н) ррм.

ИК спектр KBr) 8-лактам карбонильное поглощение при 17,75 cM ".

Масс-спектр: М.в. = 521.

Пример 5. 7-(2-тиенилацет-. амидо)-7-метокси-3/1-(1Н-тетразол-5-илметил)-iH-тетразол-5-илтиометил/-3-цефем-4-карбоновая кислота.

Раствор 3,1 r(6,,3 ммоля) пара-нитробензил 7-(2-тиенил-ацетамидо-7-метокси-3-бромметил-3-цефем-4-карбоксилата и 1,38 г (7,5 ммоля)

1-(1Н-тетразол-5-илметил)-1Н-тетразол-5-тиола в 20 мл диметилформами30 да перемешивают при комнатной температуре в течение примерно 16 ч.

Реакционную смесь выпивают в 150 мл смеси, состоящей из равных объемов однонормальной хлористоводородной кислоты и этилацетата. Органический слой отделяют, промывают два раза однонормальной хлористоводородной кислотой, один раз рассолом, далее сушат с помощью сульфата натрия, фильтруют и выпаривают до получения

40 сухого продукта, в результате чего получают 3 r нечистого продукта в виде пенообразного материала светло-. коричневого цвета. Этот продукт хроматографируют с использованием

75 г силикагеля и одного литра метиленхлорида, а затем обрабатывают

2 л метилен хлорида, содержащего

2Х метилового спирта, с целью элюирования. Хроматографическая колонка находится под давлением азота во время операции элюирования. Фракции, содержащие продукт, соединяют и выпаривают до получения сухого продукта. Оставшееся масло растворяют в этилацетате и раствор отфильтровывают. Полученный фильтрат далее концентрируют в вакууме до получения сухого продукта. В результате получают 0,84 г продукта.

Полученный выше продукт деэтерифицируют с помощью электролитического восстановления следующим образом. Раствор, состоящий из 700 мг (1 ммоль) пара-нитробензилового сложного эфира s 300 мп однонормальной серной кислоты в диметилформамиде, помещают в электролитическую ячейку, содержащую катод ртутной ванны и платиновый проволочный анод. Эти электроды разделены с помощью спекшейся стекломассы. Реакцию восстановления проводят при потенциале равном 0,64 В в течение периода времени свыше 3 ч, Восстановленный раствор выводят из ячейки и выпивают в 100 мл смеси, состоящей из равных объемов этилацетата и однонормальной хлористоводородной кислоты. Органический слой отделяют и промывают два раза однонормальной хлористоводородной кислотой. Этот продукт далее экстрагируют из органического слоя с помощью

50 мл водного раствора гидроокиси натрия, величина рН равна 7,5, а затем водный экстракт промывают этилацетатом. Водную фазу отслаивают с помощью свежего этилацетата, подкисляют до величины рН равной

2,2 хлористоводородной кислотой.

Органический слой отделяют, промывают 2 раза однонормальной хлористоводородной кислотой, рассолом, сушат сульфатом натрия и выпаривают до получения сухого продукта. В результате получают 290 мг продукта в форме свободной кислоты в виде пены желтого цвета.

Этот продукт очищают следующим образом. Продукт в количестве 270 мг растворяют в 0,05 M ацетата аммония путем добавления 2 капель rîíöåíòðèрованной гидроокиси аммония к суспензии продукта и полученный таким образом раствор фильтруют и вводят на силикагель с обратимой фазой, которым заполнена препаративная колонка жидкостного хроматографа с высокой разрешающей способностью. Колонку первоначально элюируют.смесью, . состоящей из 12Х ацетонитрила, 2Х уксусной кислоты и 86Х воды, а затем смесью, состоящей из 15Х ацетонитрила, 2 уксусной кислоты и 83 воды. Множество фракций объемом

1087076 l4

Составитель 3. Латыпова

Техред Л,Коцюбняк Корректор С. Шекмар

Редактор А. Долинич

Заказ 2287/54 Тираж 410 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4

20 мп собирают и фракции 72-89 соединяют и лиофилиэируют. В результате получают 75 мг продукта в виде сухого порошка.

ИК спектр: (КВг)8-лактам карбо- 5 нил поглощение при 1775 см 1.

Масс-спектр: М.в, = 55 1.

ЯМР (100 МГц, ДМБО-d6):ä 3,34 (Б, ЗН, 7-метокси), 3,51 (m, 2Н, С-2 метилен), 3,80 (S, 2Н, тиофенацетил метилен), 4 29 (m, 2Н, С-З,метилен), 5,06 (S, 1Н, С-6Н), 5,97 (2Н, тетразол .метилен), 6,9-7,4 (m, ÇH, тиофеновое кольцо Н), и 9,42 (S, 1Н, 7-амид Н) ррм.

Пример 6. 7-(О-формилминдальамидо)-3-/1-(1Н-тетразол-5-илметил)-1Н-тетразол-5-тиол/-3-цефем-4-карбоновая кислота.

К раствору, состоящему из 1,01 г (5,5 ммоль) 1-/1Н-тетразол-5-илметил/-1Н-тетразол-5-тиола в 15 мл буферного раствора, характеризуемого величиной рН равной 7 и содержащего 0,88 г бикарбоната натрия, добавляют 2,28 r (5 ммолей) натрий7-(О-формилминдальамидь)-3-ацетоксиметил-3-цефем-4-карбоксилат и полученный раствор нагревают с перемешиванием при температуре от 60 до 65 С ЗО о в течение 16 ч. Полученную реакционную смесь охлаждают до комнатной температуры и концентрируют до объема 6,5 мл путем выпаривания в вакууме. Полученный концентрат хроматогра-35 фируют на силикагеле с обратимой фа- зой с помощью жидкостного хроматографирования с высокой разрешающей способностью с использованием в качестве элюента смеси, состоящей иэ 127 ацетонитрила, 27 уксусной кислоты и 867. воды. Множество фракций объемом 20 мп собирают и исследуют с помощью анализа спектра ультрафиолетового поглощения на содержание цефема. Фракции 94-107 соединяют и лиофилизируют. В результате получают 120 мл соединения, указанного в заголовке.

ЯМР (90 МГц, ДМБО-dg): сигналы при о 3,84 (m, С-2 метилен), 4,54 (m, С-З метилен), 5 26 (d С-6Н), К,. 32 (S метин Н миндальамидо боковая цепь), 5,94 (g, С-7 Н), 6,24 (S тетраэол метилен), 7,4-7,8 (m, фенил Н), и 9,04 (d, 7-амин Н) ррм.

Пример 7. Син 78-/альфавЂ(метоксиимино)-альфа-(2-фурил)ацетамидо/-3-/1-(iH-тетразол-5-илметил)-1Н-тетразол-5-илтиометил-/-3-цефем-4-карбоновая кислота.

К раствору содержащему натрий

76-/альфа-(метокснимино) -альфа-(2-фурил)ацетамидо/-3-ацетоксиметил-3-цефем-4-карбоксилат и эквимолярное количество 1-(1Н-тетраэол-5-илметил)-1Н-тетразол-5-тиола, добавляют эквимолярное количество бикарбоната натрия в воде и этот раствор нагревают в течение примерно 24 ч о при температуре около 55 С. Реакционную смесь концентрируют при пони- . женном давлении и продукт отделяют из концентрата с помощью силикагеля с обратимой фазой при использовании жидксстного хроматографа с высокой разрешающей способностью.