Способ определения жирнокислотного состава фосфолипидов

Способ определения жирнокислотного состава фосфолипидов

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЖИРНОКИСЛОТНОГО СОСТАВА ФОСФОЛИПИДОВ путем экстракции липидов, отделения их методом тонкослойной хроматографии, обработки слоя сорбента, содержащего фосфолипццы, раствором метилирующего агента с последунмцим газокроматографическим анализом отличающ и и с я тем, что, с целью упрощения и сокращения времени анализа, слой сорбента обрабатывают раствором хлористого тетраметиламмония в щелочной смеси метанол-хлороформ, отделяют сорбент, повторно добавляют щелочной раствор хлористого тетраметнламмония.

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

pe) G 01 N 33/48

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ @

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

©5 ф1

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ (21) 3328122/28-13 (22) 29.07.81 (46) 07. 05. 84. Бюл. N 17 (72) А.Л.Перцовский и Л.Б.Сугак (71) Белорусский научно-исследова-. тельский санитарно-гигиенический институт (53) 616.07(088.8) (56) 1. Chalvardjan А. Biochem. I, 1964, 90. р. 518. (54)(57) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ИИРНОКИСЛОТНОГО СОСТАВА ФОСФОЛИПИДОВ пу„,SU„„1091066 А тем экстракции липидов, отделения их методом тонкослойной хроматографии, обработки слоя сорбента; содержащего фосфолипиды, раствором метилирующего .. агента с последующим газохроматографическим анализом .о т л и ч а юшийся тем, что, с целью упрощения и сокращения времени анализа, слой сорбента обрабатывают раствором хлористого тетраметиламмония в щелочной смеси метанол-хлороформ, отделяют сорбент, повторно добавляют щелочной раствор хлористого тетраметиламмония.

Составитель Н.Валеева

Техред Т.Дубинчак Корректор В.Бутяга

Редактор Л.Филь

Заказ 3073/40 Тираж 823 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ПЛП "Патент", г.Ужгород, ул.Проектная. 4

11 10910

Изобретение относится к аналитической химии и биохимии и может быть использовано при количественном определении жирнокислотного состава фосфолипидов.

Известен способ определения жирнокислотного состава фосфолипидов путем экстракции липидов, отделения их методом тонкослойной хроматографии, обработки слоя сорбента, содер- 10 жащего фосфолипиды, раствором метилирующего агента с последующим газохроматографическим анализом (1 3.

Недостатком известного способа является сложность и длигельность 1$ анализа.

Цель изобретения — упрощение и сокращение времени анализа.

Поставленная цель достигается тем, что согласно способу определения жирнокислотного состава фосфолипидов путем экстракции липидов, отделения их методом тонкослойной хроматографии, обработки слоя сорбента, содержащего фосфолипиды, раствором метилирующего агента с последующим газохроматографическим анализом слоя сорбента обрабатывают раствором хлористого тетраметиламмония в щелочной смеси метанол-хлороформ, отделяют сорбент, повторно добавляют щелочной раствор хлористого тетраметиламмония.

Способ осуществляют следующим образом.

Навеску силикагеля с фосфолипидами

3S помещают в колбу на 20 мл, в которую добавляют 5 мл смеси растворителей хлороформ-метанол (1:1), содержащую смесь гидрата окиси калия и хлористого тетраметиламмония с концентрацией каждого по 5 мг/мп. Смесь встряхивают в течение 10 мин, растворитель фильтруют.и добавляют к нему 0,4 мл хлороформ-метанольного раствора едкого кали и хлористого тетраметиламмония, раствор концентрируют под вакуумом или в токе азота до 0,1 мл и алик66 ъ вотную часть (1 мкл) вводят в испаритель хроматографа.

Пример. Ткань печени крысы (1 г) экстрагируют 20 мл смеси хлороформметанол по Фолчу, после чего экстракт липидов в количестве 10-12 мг, в пересчете на сухое вещество наносят на стеклянную пластину с силикагелем для тонкослойной хроматографии.

Разделение липидов проводят в системе гексан-эфир-ледяная уксусная кислота (75:25:2).

Полосу фосфолипидов соскребают с пластины. Затем к силикагелю добавляют 1,5 мл смеси растворителя хлороI форм-метанол (1:1), содержащий смесь едкого кали и хлористого тетраметиламмония (каждый в концентрации

5 мг/мл). Смесь взбалтывают в течение 10 мин, отфильравывают силикагель. К раствору добавляют 0,4 мл хлороформ-метанольного раствора смеси едкого кали и хлористого тетраметиламмония {при необходимости раствор концентрируют под вакуумом) и аликвотную часть (1 мкл) вводят в испаритель хроматографа. "Вырухром" с пламенно ионизационным детектором.

Используют колонку длиной 2 м, заполненную силанизированным хромосорбом с 57. полидиетиленгликольсукцината. .Температура колонки 200 С, детектоо ра 300 С, иснарителя 330 С. Газ-носитель — аргон. Испаритель хроматографа заполняют на 1/3 кусочками мелкораздробленной проволоки из нержавеющей стали.

Количественный расчет проводят методом внутренней нормализации по площадям пиков.

Использование способа в биохимических исследованиях при определении жирнокислотного состава фосфолипидов позволит сократить время анализа до

25 мин. Способ прост в исполнении, исключает использование агрессивных реактивов.