Субстрат для закрепления бактерий и способ хранения неспорообразующих бактерий рода @

Субстрат для закрепления бактерий и способ хранения неспорообразующих бактерий рода @

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

1. Субстрат для закрепления бактерий , содержащий песок, о т л йчающийся тем, что, с целью удлинения сроков хранения неспорообразующих бактерий рода Pseudomonas, субстрат дополнительно содержит рыбную муку при соотношений компонентов, об.%: рыбная мука 80-85, песок 15-20. 2. Способ хранения неспорообразующих бактерий рода Pseudomonas, предусматривающий адсорбцию бактерий в дисперсном субстрате, отличающийся тем, что, с целью упрощения способа и удлинения сроков сохранения биохимической активности бактерий рода Pseudomonas, адсорбцию осуществляют в процессе культивирования бактерий с субстратом, в качеi стве которого используют смесь рыбной муки с песком, взятых в соотно (/ шении 4:1-5,7:1, внесенную в среду в количестве 10 об.% с последующим отделением адсорбированной биомассы, с промыванием ее стерильным физиологическим раствором и помещением в стерильный 0,8-1,0%-ный растзор хлористого натрия при соотношении биоСО массы и раствора 1:8-1:10. СлЭ 05 СО 00

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛ ИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИН

09) (11) 3(5ц С 12 N .1/04

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ABTOPCHOIVIV СВИДЕ П=ЛЬСЧ ВУ (21) 3258386/28-13 (22) 22.09.81 (46) 23.05.84. Бюл. Ф 19 (72) В.П.Тульчинская, Г.А.Кожанова, Т.А.Беляева, Т.В.Васильева и Л.А.Калмазан (71) Одесский ордена Трудового Красного Знамени государственный университет им. И.И.Мечникова (53) 576.9(088.8) (56) 1. Методы хранения коллекционных культур микроорганизмов. M. "Наука", 1967, с. 141-144.

2. Авторское свидетельство СССР по заявке Ф 2781918/28-13, 1979.

3. Iuven В.I. A simple method

for longterm preservation of stock

cultures. of lactic acid bacteria."I.Appl. Bacteriol", 1979, 47, У 9, р. 379-381. (54) СУБСТРАТ ДЛЯ ЗАКРЕПЛЕНИЯ БАКТЕ РИЙ И СПОСОБ ХРАНЕНИЯ НЕСПОРООБРАЗУЮЩИХ БАКТЕРИЙ РОДА PSEUDOMONAS. (57) 1. Субстрат для закрепления бактерий, содержащий песок, о т л йч а ю шийся тем, что, с целью удлинения сроков хранения неспорообразующих бактерий рода Pseudomonas, субстрат дополнительно содержит рыбную муку при соотношении компонентов, об.X: рыбная мука 80-85; песок 15-20.

2. Способ хранения неснорообразующих бактерий рода Pseudomonas, предусматривающий адсорбцию бактерий в дисперсном субстрате, о т л и ч а ю. шийся тем, что, с целью упрощения способа и удлинения сроков сохранения биохимической активности бактерий рода Pseudomonas, адсорбцию осуществляют s процессе культивирования бактерий с субстратом, в качестве которого используют смесь рыб- Е ной муки с песком, взятых в соотношении 4:1-5,7:1, внесенную в среду в количестве 10 об.7 с последующим С отделением адсорбированной биомассы, промыванием ее стерильным физиологи- Я ческим раствором и помещением в стерильный 0,8-1,0Ж-ный раствор хлористого натрия при соотношении биомассы и раствора 1:8-1:10.

Изобретение относится к микраснюлогни и методам хра пения микр оорга низмов, прецназначенньм для очистки загрязненньм воц.

Известен субстрат для закрепления спор актиномицетов, содержащий песок в смеси с почвой(1), Недостатком указанного субстрата

) является то, что он предназначен для хранения спор и не пригоден для адсорбции клеток неспорообраэующих бактерий, например роца Pseudomonas без предварительной лиофилизации.

Известен также субстрат для закрепления спаровых бактерий Thiobacil1us ferrooxidans содержащий песок в смеси с пиритом Ц .

Однако известный субстрат не пригоден для хранения неспорообразующих 20 бактерий.

Цель изобретения — удлинение сро" ков хранения неспорообразующих бактерий рода Preudomonas.

Поставленная цель достигается 25 тем, что субстрат для закрепления бактерий, содержащий песок, дополнительно содержит рыбную муку при соотношении компонентов, об.X: рыбная мука 80-85; песок 15-20.

Известен также способ хранения неспорообразующих бактерий, предусматривающий адсорбцию микроорганизмов в дисперсном субстрате, согласно которому лиофилиэированные клетки бакте35 рий адсорбируют на гранулах пемзы (3) .

К недостаткам известного способа следует отнести необходимость использования специальной дорогостоящей аппаратуры для лиофилизации культур бактерий, для некоторых культур хранение в лиофилизированном состоянии иа гранулах пемзы не превышает 6 мес., что недостаточно.

Цель изобретения — упрощение способа и удлинение сроков сохранения биохимической активности неспорообразующих бактерий рода Pseudomonas

Поставленная цель достигается тем, что согласно способу хранения

50 неспорообразующих бактерий рода Pseudomonas предусматривающему адсорбцию бактерий в дисперсном субстрате, абсорбцию осуществляют в процессе культивирования бактерий с субстратом, в качестве которого используют смесь рыбной муки с песком, взятых в соотношении 4:1-5,7:I, внесенную в срецу в количестве 10 об.7 с последующим отделением адсорбированной биомассы, промыванием ее стерильным физиологическим раствором и помещением в стерильный 0,8-1,0Х-ный раствор хлористого натрия при соотноше нии биомассы и раствора 1:8-1:10.

Пример 1. Осуществляют закрепление на субстрате и хранение штамма бактрий деструкторов Ps.aeruginosa КИ, способных разрушать органические красители, и предназначенные для очистки сточных вод высокой цветности, В качестве субстрата для закрепления бактерий применяют рыбную муку, промытую в течение суток проточной

)водой и прокаленную при 200. С в течение 4 ч. Обработанная таким образом мука представляет собой порошок коричневого цвета. Для предупреждения комкования муку смешивают с песком, который подвергают аналогичной пред-. варительной обработке. Песок и рыбную муку смешивают при следующем соотношении компонентов, об.7: мука 80; песок 20. Для одного опыта берут

40 см муки и 10 см песка.

Суточную агаровую культуру бактерий в дозе 500 млн клеток/мл вносят в минеральную среду М-9 следующего состава: калий фосфорнокислый однозамещенный 3,0 г; натрий фосфорнокислый двуэамещенный 6,0; натрий хлористый 5,0.; аммоний хлористый

1,0 г,вода дистиллированная 1000 мл . рН среды устанавливают добавлением

10Х-ного, раствора кальция гидрата.

В минеральную среду дополнительно вносят субстрат для окислениякраситель кислотный черный С в концентрации 25 мг/л. Субстрат для адсорбции бактерий вносят в минеральную среду указанного состава в количестве 10 об.Ж, т.е. к 300 см среды добавляют 30 см субстрата.

Адсорбцию культуры на субстрате осуществляют в процессе культивирования в течение 48 ч при 30оС. Затем закрепленные на субстрате клетки бактерий отмывают дважды стерильным физиологическим раствором, после чего субстрат с закрепленными клетками переносят s 8 пробирок размером 25х х 1,5 см в количестве 3 см и заливают 24 см стерильного 0,87-ного раствора хлорида натрия (объемные соотношения субстрата и раствора

3 1093

1:8). Культуру хранят при 4 С и при комнатной температуре. По истечении определенных сроков хранения (6,9,12 и 24 мес) изучают жизнеспособность и деструктивную активность штамма Ps.aerugiпоза.

Проверку жизнеспособности и деструктивной активности бактерий после хранения в условиях периодического культивирования осуществляют следую- 1О щим образом.

Для реизоляции бактерий после хранения субстрат с закрепленными клетками промывают 3 раза стерильным .физиологическим раствором, растирают 15 в стерильной ступке, а затем используют как инокулят при посеве в минеральную среду М-9. После культивирования в течение 48 ч при 30 С про-. о водят рассев на поверхность мясо- 2О пептонного агара в чашках Петри для выделения чистой культуры. .При проверке окислительной (деструктивной) активности бактерий используют суточную агаровую культуру, 25 которую в дозе 500 млн клеток/мл вносят в минеральную среду M-9, содержащую загрязняющее вещество — краситель кислотный черный С в концентрации 100 мг/л.

ЗО

Микробиологическое окисление-осуществляют в процессе периодического культивирования при 30 С в течение.

48 ч в стационарных условиях.

Результаты деструкции учитывают 35 методом фотоэлектроколориметрии на

ФЭК-56 при h = 750-760 мм (красный светофильтр) после осаждения микробных клеток центрифугированием при

4 тыс. об/мин в течение 8 мин. 4О

Культура бактерий Ps. aeruginoss после 6,9,12 и 24 мес,хранения независимо от температурного режима сохраняет способность к росту в минеральной среде М-9 и вызывает 98-100 45 деструкцию красителя кислотного черного С (таблица) .

Пример 2. Осуществляют закрепление на субстрате и хранение штамма-бактерий деструкторов Ps fluo 50

rescens.2". Обработку рыбной муки и песка осуществляют как указано в примере 1.

Муку и песок смешивают при следующем соотношении компонентов, об.X: 55 мука 85; песок 15. Для опыта берут

43 см муки и 8 смз песка. Суточную агаровую культуру бактерий в дозе

698 4

500 млн клеток/мл вносят в минеральную среду М-9, в которую дополнительно вводят субстрат для окисления— краситель кислотный черный С в концентрации 75 мг/л. Адсорбцию культуры на субстрате осуществляют как ука. зано в примере 1. Хранение осуществляют в 8 пробирках под слоем стерильного 1,07-ного раствора хлорида натрия при объемном соотношении субстрата и раствора 1:1О (Зсм субстрата заливают 30 см раствора хлорида нат. рия), при 4 С и при комнатной темпе0 ратуре.

По истечении определенных сроков хранения (6,9,12 и 24 мес) изучают жизнеспоосбность и деструктивную активность штамма Ps fluirescens 2 как указано в примере 1 (загрязйитель — краситель кислотный черный С в концентрации 75 мг/л) .

Культура бактерий Ps.fluorescens 2 после 6,9,12 и 24 мес,хранения независимо от температурного режима сохраняет способность к росту в минеральной среде M-9 и вызывает 90-100Х деструкцию красителя кислотного черного С в концентрации 75 мг/л (таблица) .

Пример 3. Осуществляют закрепление на субстрате и хранение штамма бактерий †. деструкторов .Рs.

species 6,предназначенных для очистки от формальдегида сточных вод химических производств.

Обработку рыбной муки и песка осуществляют, как в примере 1. Муку и песок смешивают при следующем соотношении компонентов, об.X: мука 82,5; песок 17,5. Для опыта берут 41 cMs муки и 9 см песка.

Суточную агаровую культуру бактерий в дозе 50 млн клеток/мл вносят в минеральную среду М-9, в которую дополнительно вводят субстрат для окисления — формальдегид в концентрации 100 мг/л. Адсорбцию культуры на субстрате осуществляют как указано в примере

Хранение осуществляют в пробирках под слоем стерильного 1,07.-ного раст вора хлорида натрия при объемном соотношении субстрата и раствора 1:9 (3 см субстрата и 27 см раствора а хлорида натрия), при 4 С и при комнатной температуре.

По истечении определенных сроков хранения аналогично изучают жиэне1093698

Субстрат длл адс орбннн микроорганизмов, обЛЮ

Пример к кранебез нобиохим вской тивностя, кес. условна адсорбнни микроорганизмов на субстрате оорга ъвкн

oorno нил су трата

X3IOP нат6-24

Молочно- Молоко бактерия

Р.Leuconostoc р.Lactobacillue р.gtrepcococcua рад;варитвлвна» лиофилнз анин инкроорге низкое р.асс1аоаеусев

{саорм) .;

2 Сивсь пеавк с «вар» яввнк леской

48-60

Иредла»

Габюй

Вактернндеструкторм

p«Раеоеояонаа

Нука 80 Вез ляо@нлнзаЙесок 20 ннн

0,8

Рв.aeruginoва KH

1:8

Краситель кнслотнмй терний С

100

Краситель кислот ныа

Черньй С

Ра.fluoreeсена 2©

Нука Зэ

Песок 1$

1,0

1: 10

3 Мука 2 5

Песок 1?,5

Ре.ayeciee 6

Форкальдегид

500

S,0

ВНИИПК Заказ 3377/22 Тираж 522 Подписное

Филиал ППП "Патент", Р.Ужгород, уд.Проектная, 4 способность бактерий и деструкцию формальдегида в концентрации 500 мг/л колориметрическим методом с применением хромотроповой кислоты.

Штамм Рй.species 6 после 6,9, 12 5 и 24 мес.хранения независимо от температурного режима сохраняет способность к росту в минеральной среде

И"9 и вызывает 95-1007 деструкцию формальдегида (таблица).

Таким образом, после 24 мес.хранения предлагаемый способом на новом субстрате бактерии сохраняют высокую окислительную активность, что позволяет использовать их для микробной очистки водной среды от токсикантовзагрязнителей после длительного хране. ния.

Предлагаемое изобретение упрощает процесс хранения микроорганизмов.

Возможность .использования бактерий для микробной очистки водной среды от токсикантов-загрязнителей после длительного хранения обусловливает экологический эффект в аспекте борьбы за охрану окружающей среды.

Таким образом, реализация изобретения позволяет длительно хранить неспорообразующие бактерии рода Pseu.

domonas, используя упрощенный способ хранения, и обеспечить сохранение их биохимической активности.