Штамм @ @ 34-продуцент рибонуклеат (дезоксирибонуклеат )-3- нуклеотид-гидролазы

Штамм @ @ 34-продуцент рибонуклеат (дезоксирибонуклеат )-3- нуклеотид-гидролазы

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Штамм Staphylococcus aureus 34 (Коллекция Государственного научноисследовательского института стандартизации и контроля медицинских биоло ,гических препаратов им, Л.А. Тарасевича Министерства здравоохранения СССР)продуцент рибонуклеат (дезоксирибонуклеат )-З-нуклеотидгидролазы.

СОЮЗ. СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК ае (1!) ГОСУДАРСТ8ЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И OVHPbITHA (21) 3506800/28-13 (22) 05.08.82 (46} 23.07.84. Вюл. Ф 27 (72) В.В, Королева, Г.К. Дегтева, И.A. Шмите и И.А. Вина (71} Горьковский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микро биологии МЗ РСФСР (53) 576.8(088.8} (56) 1. Cunninghen L. et а1; Adeoxyribonuclease of Micrococcus pyogenes.

"J. Amer chem. Soc"., 1956, 78, 46424645.

3 С 12 N 9/00, С 12 Ю 1/20 (54) ШТАММ STAPHYLOCOCCUS AUREUS 34

ПРОДУЦЕНТ РИБОНУКЛЕАТ (ДЕЗОКСИРИБОНУК.

ЛЕАТ)-3-. НУКЛЕОТИД-ГИДРОЛАЗЫ. (57) Штамм Staphylococcus iaureus 34 (Коллекция Государственного научноисследовательского института стандартизации и контроля медицинских биоло, гических препаратов им. Л.А. Тарасевича Министерства здравоохранения СССР)продуцент рибонуклеат (дезоксирибоI нуклеат)-3-нуклеотидгидролазы.

1104

Происхождение

Количество

Активность фермента

Штамм

Фосфатаз

ПоотеРНКаза

ДНКаза аз

1,,0

74,0

30,3

399,3

134 и

Гн-септ.

33,6

1,0

68,3

388, 0

135 п

Гн-септ.

Кожа,псориаэ 4

24,0

1,0

88,7

343,8

28,0

44,0

412

1,0

345, 7

Гн.-септ

32,1

1,0

114 и

61,0

332,0

Гн.-септ.

Изобретение относится к микробиологической промышленности, в частности к производству ферментных препаратов.

Впервые фермент рибонуклеат (дезоксирибонуклеат) 3-нуклеатидгидролазу (стафилококковую или микрококковую нуклеазу) обнаружили в культуральной жидкости Staphylococcu

aureus (M. pyogenes) штамм SAB (1) .

Недостатком штамма S. aureus SAB 1о является низкая активность продуцируемой им нуклеаэы в культуральном супернатанте — 0,0283 ед/мг белка.

В настоящее время фермент стафилококковая нуклеаэа выпускается в США и ФРГ с использованием штамма Foggi, характеристика которого в литературе отсутствует ° В СССР этот фермент не производится.

Цель изобретения — обнаружение штамма — продуцента стафилококковой нуклеаэы.

Для этого изучено образование дезоксирибонуклеаэы 436 штаммами стаВыбранный штамм — продуцент 34 имел оптимальное сочетание активностей ДНКазы, самую низкую активность протеазы.

Обнаруженный штамм — продуцент

S. aureus 34, в 1980 r, вьшелен с кожи больного псориазом и не является этиологическим признаком заболевания.

Он обладает всеми признаками золотис" того стафилококка. 55

Биохимические признаки штамма.

Аэробно расщепляет глюкозу, анаэробно — маннит, имеет активность плаэмо156 2 филококков различного происхождения, музейных и свежевьщеленных .от людей и сельскохозяйственных животных. Нуклеазную активность определяли в экзопродуктах по методу Kunirr.

Экзопродукты получали по общепринятой методике, выращивая стафилококки по на целлофановых дисках. Активность ДНКазы колебалась в пределах

11,0-399,3 ед/мин/мг белка. Отобрано

16 штаммов с повышенной ДНКазной активностью. В экзопродуктах этих 16-ти культур быпа определена РНКазная активность, которая колебалась от 44,0 до 96,6 ед/мин/мг белка, а также активность загрязняющих ферментов протеазы (24,0-97,6 ед/мин/мг белка) . и щелочной фосфатазы (1-89 ед/мин/мг белка). Из названных штаммов отобрано пять, имеющих активности в пределах:

ДНКаэы 332,0-399,3 ед/мин/мг белка, РНКазы 44,0-88,7 ед/мин/мг белка. Уровень фосфатазы у всех культур низкий (1,0 ед/мин/мг белка). Данные исследования представлены в таблице. коагулазы, ДНКазы (качественное определение), вызывает гемолиз эритроцнтов кролика.

Морфологические признаки штамма.

Клетки круглые, располагаются гроздьями, кучками или короткими цепочками. На мясоцептонном агаре образует гладкие, блестящие, слегка выпуклые колонии с ровными краями. Образует лимонно-желтый пигмент.

Вьщеление штамма. Штамм вьщелен методом отпечатков с кожи. Дпя этого стерильное предметное стекло, покры1104156

Составитель В. Кузьмичев

Техред A.Кикемезей Корректор О. Билак

Редактор Н. Джуган

Заказ 5166/18

Тираж 522 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35 ° Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4 тое слоем среды Коростылева, прикладывали на разные участки кожи больного псориазом, в том числе на поверхность псориатической бляшки. Затем стекло в стерильной чашке Петри помещали в термостат при 37 на 18-20 ч. о

Со стекла собирали по 5 колоний одного вида и идентифицировали общепринятым способом.

Получение внеклеточного продукта стафилококка с нуклеазной активностью.

Фермент стафилококковая нуклеа является внеклеточным, поэтому его активность изучали в экзопродуктах, которые получали следующим образом.

В чашки Петри заливали мясо-пептонный агар, после застывания которого поверхность покрывали стерильной пластиной целлофана, на который помещали 0,1 мл 18-ти часовой бульонной культуры стафилококка и через 18-20 ч роста в термостате собирали экзопродукты. Рост смывали 1 мл физиологического раствора и полученную взвесь центрифугировали 20 мин при 15 тыс.об/мин, Клетки отбрасывали, в надсадочной жидкости определяли активности ферментов спектрофотометрически.

Активность нуклеазы в экзопродукте штамма S. aureus-34 при пересчете на единицы активности составляет

0,0644 ед/мг белка.