Способ количественного определения меланина

Способ количественного определения меланина

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ МЕЛАНИНА, включающий инкубацию меланина с химическим реагентом с последующим спектрофотометрированием , отличающийся тем, что, с целью сокращения времени определения , меланин инкубируют с 540i МОЗ М раствором нитросинего тетразолия в диметилформамиде, а спектрофотометрию проводят при 520 нм.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СО14ИАЛИСЧ ИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИН. i I зсЮ С 01 Н 33/48

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ABTOPCHOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 35821 21/28-13 (22) 16.04.83 (46) 07.08.84. Бюл. Ф 29 (72) В.А. Лапина, А.Е. Донцов и М.А. Островский (71) Ордена Ленина институт химической фиэики АН СССР (53) 616.07(088.8) (56) 1. К.S. Das, M.Â, Abramson, R. Katzman"J. of Neurochem, 1976, 26, Ф 4, р.р. 695-699 (прототип).. (54) (57) СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ МЕЛАНИНА, включающий ННКу6ацию меланина с химическим реагентом с последующим спектрофотометрированием, отличающийся тем, что, с целью сокращения времени определения, меланин инкубируют с 5 10 10 М раствором нитросинего тетразолия в диметилформамиде, а спектрофотометрию проводят при 520 нм.

11070

Вид

Меланин чернильного меш13,0

18,0

0,08

0,115 ка кальмара

0,175

27,0

0,05

0,12

4,0

9,0

ДОФА-меланин

15,0

0,20

ВЯИИПЯ Заказ 5751/31 Тираж 823 Подписное

Фщлиал ППП "Патецт", г.ужгород, ул.Проектная, 4

Изобретение относится к аналитической биохимии, а именно к способам определения концентрации пигментов меланинов,и может быть использовано в научно-исследовательской работе, а также в медицине для количественного определе-. ния синтетических и природных меланинов.:

Известен способ количественного определения меланина, включающий его выделение из биологического материала 0 инкубацию суспензии или раствора меланина с боргидридом натрия с последующим спектрофотометрированием при длине вопны 290 нм. Содержание меланина определяют по калибровочной кривой 15 в координатах: изменение оптической плотности — концентрация меланина в мкг сухого веса на 1 мл (I ).

Недостаток известного способа— длительность определения. 20

Это связано с тем, что при обработке пробы боргидридом натрия образуются газовые пузырьки, которые удаляют нагре ванием пробы в водяной бане при 40 С в течение 2, 5-3, 5 ч и лишь затем проводят 25 спектрофотометрические изменения.

Цель изобретения - сокращение времени определения.

Поставленная цель достигается тем, что согласно способу количест- 30 венного определения меланина, включающему инкубацию меланина с химическим реагентом с последующим спектрофотометрированием, меланин инкубируют с

5 -10 -10 M раствором нитросинего тетраэолия в диметилформамиде, а спектрофотометрию проводят при 520 нм.

1 Способ осуществляют следующим образом.

Пробу содержащую меланиновый пиг 40 мент, добавляют к 5 -10 — 10- М раствору нитросинего тетразолия в диметилформамиде и инкубируют в течение 1015 мин. Затем добавляют дистиллированную воду для пРекращения Реакции. 4

Полученный раствор может стоять в течение нескольких часов беэ изменения интенсивности окраски. Количество образовавшегося формаэана измеряют спектрофотометрически при длине волны 520 нм. Концентрацию меланина рассчитывают по калибровочной кривой зависимости изменения оптической плотности образца от концентрации в нем меланина в мкг сухого веса на 1 мл.

Контролем служит проба, не содержащая ме53 2 ланина. Время определения меланина предложенным способом составляет 15-20 мин.

Рабочий раствор нитросинего тетразолия в диметилформамиде готовят непосредственно в день опыта и хранят в темной посуде,так как он светочувствителен.

Пример 1. Определение концентрации меланина чернильного мешка кальмара. Исследуемый образец меланина (4 мкг/мл) суспендируют в дистиллированной воде, 0,3 мл полученной суспензии добавляют в 1,5 мл 5 ° 10 М нитросинего тетразолия в диметилформамиде и инкубируют при периодическом встряхивании 15 мин. Затем добавляют

1,0 мл дистиллированной воды для прекращения реакции. Контроль — проба, содержащая 0,3 мл дистиллированной воды и 1,5 мл нитросинего тетразолия в диметилформамиде.

Результаты нескольких определений концентрации меланина кальмара приве- дены в таблице.

Пример 2.Определение концентрации синтетического ДОФА-меланина.

2 мкг/мл синтезированного ДОФАмеланина суспендируют в дистиллированной воде, 0,3 мл полученной суспензии добавляют к 1,5 мл 10 M нитросинего тетразолия в диметилформамиде и все последующие операции проводят как в примере 1.

Результаты определений приведены в таблице.

Предлагаемый способ позволяет ускорить определение меланина более чем в 19"."Раз по сравнению с известным.