Способ определения са-связывающих белков

Способ определения са-связывающих белков

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ Са-СВЯЗЫВАЮЩИХ БЕЛКОВ путем насьпцения полиакриламидного геля ионами кальция в щелочных системах с последующим промыванием геля от несвязавшегося с белками кальция и выявления зон Са-связывающих белков, о тличающийся тем, что, с целью ускорения способа, после промывания гель насыщают оксалатом кальция.

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИН

„„SU„„1108357

gall G 01 N 33/48

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

flO ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И OTHPblTHA

4 ф; к;,„-з,л,, Ф . .,-:, » р

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ,„, - 1

К ABTOPCHOMY СВИДЕТЕХЗЬСТВУ (? 1) 340506 9/28-13 (22) 09 ° 03.82 (46) 15.08.84. Бюл. N 30 (72) А.А. Синичкин и Б.В. Страдомский (71) Ростовский ордена Трудового

Красного Знамени государственный университет (53) 616.07 (088,8) (56) 1. Sohibeci А., Martonosi А.

Defection of Ca binding proteins

on poIijacryIamide geIs Ьу Са

autoradiography. — "AnaI. Biochem"., 1980, 104, Ф 2, р. 335-342 (прототип). (54) (57) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ Са-СВЯЗЫВАЮЩИХ БЕЛКОВ путем насыщения полиакриламидного геля ионами кальция в щелочных системах с последующим промыванием геля от несвязавшегося с белками кальция и выявления зон Са-связывающих белков, о тл и ч а ю шийся тем, что, с целью ускорения способа, после промывания гель насыщают оксалатом кальция .

1108357 2 щих белков и для количественной оценки гели сканируют на денситометре. При этом на денситограммах вы1О

15 пиков денситограмм.

2S

40

ВНИИПИ Заказ 5854/30

Тираж 823 Подписное

Филиал НПП "Патент", г. Ужгород. va.Ïþîåêòèàÿ,4

Изобретение относится к биохимии, а именно к определению Са-связывающих белков, и может быть использовано при изучении их роли в метаболических процессах организма.

Известен способ определения

Са-связывающих белков — радиоиэотопный (1 ).

Недостатком радиоизотопного метода является сложность процесса эа счет применения специальных радиоактивных реактивов, аппаратуры, длительного времени экспозиции радиочувствительной пленки (до

30 дней).

Цель изобретения — ускорение способа, упрощение технологии за счет применения доступных безопасных реактивов, использования широкораспространенной аппаратуры, кратковременности, простоты операций .

Указанная цель достигается тем, что согласно способу определения

Са-связывающих белков путем насыщения полиакриламидного геля ионами кальция в щелочных системах с последующим промыванием геля от несвязавшегося с белками кальция и выявления зон Са †связывающ белков после промывания гель насыщают оксалатом кальция.

Способ осуществпяют следующим образом.

Полиакриламидные гели с разде35 ленными в них белками, в том числе Са — связывающими белками, насыщают Са-ионами, помещая гели в 17-ный раствор Са(О,), на 40 мин.

Затем гели отмывают пятикратной сменой 27-ной уксусной кислоты по

10-12 мин.

Отмытый гель помещают в 107-ный раствор оксалата натрия íà 10 мин, в результате чего в гелях выявляются

45 белые полосы оксалата кальция в местах локализации белков, связывающих Са. Экспозиция в течение 10 мин приводит к развитию максимального светорассеивания зонами . 0

Затем гели отмывают от избытка оксалата натрия трехкратной сменой дистиллированной воды по 15 мин. Пос— ле отмытия гелей визуально опреде— ляют выявившиеся зоны Са-свнзываюявляют эоны Са-связывающих белков.

Чувствительность предложенного способа 1 — 10 мкг ионов Са + в зоне. Время осуществления способа 2,5 часа.

Пример 1. Кислый Са-связывающий белок молока (каэеин) выделяют из цельного молока известным способом и разделяют методом дискэлектрофореза в 7,57.-ном полиакриламидном геле в 1-й (щелочной) системе по Мауреру. После дискэлектрофоретического разделения казеина гель подвергают указанным процедурам.

В геле идентифицируют 6 зон Са-связывающих белков. Интенсивность зон определяют по весу соответствующих

Пример 2. Водорастворимые белки сыворотки крови крыс подвергают дискэлектрофоретическому разделению в 7,57.-ном полиакриламидном геле в 1-й (щелочной) системе по Мауреру.

В гелях идентифицируют Са-связывающие белки описанным способом.

Обнаруживают 8 зон Са-связывающих белков среди 15 зон водорастворимых белков.

Пример 3. Методом дискэлектрофореза в 7,57.-ном ПААГ разделяют водарастворимые белки головного моз— га крыс в 1-й (щелочной) системе по

Мауреру. Идентифицируют Са-связывающие белки предложенным способом.

Обнаруживают 13 зон Са-связывающих белков иэ 18 зон водорастворимых белков.

Таким образом, предложенный спо- соб позволяет определять Са-связывающие белки в полиакриламидных гелях с помощью метода дискэлектрофореза в щелочных системах, а также упрощает определение и ускоряет его в несколько десятков раз (2,5 ч вместо 30 сут по известному способу). Предлагаемый способ прост и доступен, так как не требует специальной аппаратуры и радиоактивных реактивов, снижает требования к технике безопасности.