Способ получения микрокапсулированной липазы

Способ получения микрокапсулированной липазы

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

1. СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ МИКРОКАПСУЛИРОВАННОЙ ЛИПАЗЫ путем диспергирования ее порошка в растворе ацетилфтапилцеллюпозы в органическом растворителе, добавления дисперсионной среды и испарения органического растворителя из полученной эмульсии, отличающийся тем, что, с целью повышения стабильности фермента, используют липазу, предварительно смешанную с водораст воримым высокомолекл лярным наполнителем при соотношении 1:0,25 0 ,75 соответственно. 2.Способ по п, 1 , о т л и ч а ю щ и и с я тем, что в качестве наполнителя используют желатин или эфиры целлюлозы, или крахмал, или поливиниловый спирт. 3.Способ по п. 1, о т л и ч а rout и и с я тем, что, с целью упрощения процесса, в качестве органического растворителя используют ацетон. 4.Способ по пп. 1 и 3, отли чающийся тем, что в качестве С дисперсионной среды используют жидкий п ар афин.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

ФЛМ

РЕСПУЬЛИН

„„SU„„11 i 2056

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

q rg a

И АВТОРСКОМУ(СВИДГГЕЛЬСТВУ

Ы6АКдтЕКР

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

AO ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (2 } ) 3581644/28-13 (22) I8.02.83 (46) 07.09.84. Бюп. №- 33 (72) P.Б.Айсина, H.Б.Демина, Н.Ф.Казанская, В.Я.Лебеденко, А.И,Тенцова, М.М.Рахимов и К.Давранов (71) МГУ им. N.В.Ломоносова (53) 577. 15(088.8) (56) I . Патент -США № 3943063, кл. 252-316, 1976.

2, Патент США ¹ 3691090, кл. 252-316, 1972. (54)(57) 1. СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ МИКРОКАПСУЛИРОВАННОЙ ЛИПАЗЫ путем диспергирования ее порошка в растворе ацетилфталилцеллюлозы в органическом растворителе, добавления дисперсионной среды и испарения органического растворителя из полученной эмульсии, отличающийся

ЗЩ1 С 12 11 9 18 С 1 И 11/02 тем, что, с целью повышения стаб mbности фермента, используют липазу, предварительно смешанную с водорастворимым высокомолекулярным наполнителем при соотношении 1: О, 25

0,75 соответственно.

2. Способ по и, 1, о т л и ч а юшийся тем, что в качестве наполнителя используют желатин или эфиры целлюлозы, или крахмал, или поли виниловый спирт.

3. Способ по и. 1, о т л н ч а юшийся тем, что, с целью упро— щения процесса, в качестве органического растворителя используют ацетон, 4. Способ по пп. 1 и 3, о т л и ч а ю шийся тем, что в качестве дисперсионной среды используют жидкий парафин.

1112956

Изобретение относится к биохимии... а именно к способу получения микракапсулированной липазы, которая может найти применение B медицине при заместительной терапии болезней, «<

Обусловленных дефицитОм фермента, ПОскОльку липаза инактивируется при кислых значениях рН, а действие фермента гроисходит в кишечнике, где значение рН составляет 7-8, IG для медицинского применения необхо-димо иметь препараты линазы, микрокапсулированной в оболочке, которая предохраняла бы липазу от действия желудочного сока. но растворялась в кишечнике.

Известен способ получения микро-капсулированной липазы, согласно которому путем высаживания полимера из раствора получают микрокапсулы с обо-..;:0 лочкой из этилцеллюлозы E1)Однако такая оболочка не растворя. ется ни в желудочном соке, ни в ки— шечнике, поэтому действие фермента может происходить очень медленно за счет диффузии.

Наиболее близким к предлагаемому по технической сущности и достигаемому результату является способ получения кикрокапсулированной липазы путем диспергирования ее порошка г растворе ацетилфтапилцеллюлозы в органическом растворителе, добавления дисперсионной среды и испарения органического растворителя из полученной эмульсии, при этом в качестве органического растворителя используют изопропанол, а в качестве дисперсионной среды — 30%-ный раствор хло.рида кальция.

Оболочка микрокапсул формируется

4О испарением изопропанола при 35 С и пониженном давлении (2) .

Недостатком известного способа является невысокая стабильность фермента, который при инкубации в желу15 дачном соке рН 1„2) при 37 С в течение 30 мин сохраняет 5-10% первоначальной активности.

Цель изобретения — повышение стабильности фермента. указанная цель достигается тем, что согласно способу получения микро-: капсулированной липазы путем диспергирования ее порошка в растворе ацетилфталилцеллюлоэы в органическом растворителе, добавления дисперсионной среды и испарения органического растворителя иэ полученной эмульсии используют липаэу, предварительно смешанную с водорастворимым высокомол.. купярным наполнителем при сооТ ношении 1:0,25-0,75 соответственно.

При этом в качестве наполнителя используют желатин или эфиры целлюл -.::, Илн крахмал; или ноливинилоьый спирт.

Целесообразно с целью упрощения гроцесса В качестве органического растворителя использовать ацетон.

Б качестве дисперсионной среды

Обычно используют жидкий парафин °

Способ Осуществляют следующим образом.

Порошок фермент= B соотношении

1."0 „25-0„75 смешивают с водорастворимым наполнителем, в качестве котар Ого -::спользуют желатин, эфиры целлюлозы., крахмал, поливиниловый сгнрт, растворяют B небольшом количестве Воды и высушивают. Полученную пластинку измельчают и диспергируют В растворе ацетилфталилцеллюлозы

В ацетоне. К полученной суспенэии приливают жидкий парафин и растворитель испаряют при комнатной температ; ре и нормальном давлении. Полученные микрокапсулы отделяют, промывают и сушат. В ре"=óëüòàòå липаэа полнодтью сохраняет свою активность.

Обо;- очка из ацетилфт алилцеллюлозы устойчива к действию желудочного co .à и pacTBopHIà в кишечном соке.

Использование дпя капсулирования смеси липазы с напопнителем приводит

K тому, что наполнитель защищает липазу от инактивации В процессе получения кикрокапсул, а также от действия кислой среды. При инкубации при

3 7 0 В течение 30 ин липаз а, микрокапсулированная с наполннтелем, сохраняет 54-б5% активности, в то

Время как липаза, микрокапсулирован.Иая без наполннтеля сохраняет 5-10%, а нативная липаза полностью теряет акти внос -=» з а 20 мин. !! —;; и к е р 1. Липазу и метилцсплюпозу В соотношении 1:0,25 растВор. ют В ьа",никапьном количестве ,«и тнллир ованной ВОды и Высушивают

IpH 4 С. Полученную однородную смесь измельчают до частиц диаметром меньше 250 мкм. 2 г. э — îãî порошка дис— пергируют в 15 мп 13,3%-ного раствора ацетилфталилцеллюпозы в ацетоне.

Е суспенэии приливают 30 мп жидкого парафина и систему перемешивают в течение 1,5 ч при комнатной темпера11!2056

Составитель О.Скородумова

Т хред Т.Фанта

Редактор С.Пекарь

1(орректор В. Синицкая

Заказ 64!9/18 Тираж 521

В1!ИИНИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

1 3035, Москтта, >К вЂ” 35, Раушская наб., д. 4/5

Подписное

Филиал ЛП11 "11атент", r. Ужгород, ул. Проектная, 4 туре до полного удаления ацетона и отверждения оболочек микрокапсул.

Готовые микрокапсулы отфильтровывают от дисперсионной среды, протывают гексаном и сушат при комнатной температуре в течение 6 ч. Липаза после капсулирования полностью сохраняет свою активность. При инкубации микрокапсулированной липазы в желудочном соке при 37 С .в течение

20 мин сохраняется 807 первоначальной активности, в течение 30 мин—

657., в то время как нативная липаза в этих условиях полностью теряет активность за 20 мин.

Пример 2. Липазу и желатин в соотношении 1:0,5 растворяют в небольшом количестве дистиллированной воды и далее поступают, как описано в примере 1. Препарат сохраняет 98/ активности после микрокапсулирования и 557 активности после инкубации в желудочном соке в течение 30 мин.

Пример 3. Липазу и поливи-! ниловый спирт в соотношении 1:0,75 растворяют в небольшом количестве дистиллированной воды и далее поступают, как описано в примере 1. Препарат сохраняет 987. активности после микрокапсулирования и 657 активнос— ти после инкубации в желудочном соке в течение 30 мин.

tl р и м е р 4. Липазу и растворимый крахмал в соотношении I:0,25 растворяют в небольшом колич c7 ве дистиллированной вота: и по..тупают, 5 как описано в примере 1, Препарат сохраняет полпсстью фермента":":: аную, активность после микрокапсулиронания и 607 активности после ит:кубации B желуцачисм сске в тече1О ние 30 мин.

Пример 5, Липазу и натрийкарбоксиметилцеллюлозу в соотношении 1:0 4 растворяют в небо. ттшом количестве дистиллирс заттттотт воды и далее поступают, как описано в примере 1. Препарат после микрокапсулирования сохраняет 997. активности и 577 активности после инкубации в желудочном с-:ê:е в течеттие 30 тин.

Пример 6 (котттроттт.ттыш т.

Иикрокапсулирование проводят, исттоль.зуя липазу без наполнителя. 2,0 г липазы диспергируют в 15 мл 1 3,37нога раствора ацетилфталилцсллюлозы в ацетоне и далее поступают, как описано в примере 1.

После капсулирования липаз а сохраняет 64,67 активности. После инкубаттии липаза сохраняет 64,67.

3!! активности. После инкуб ации микро— капсулированной липазы в же.туточттотт соке в течение 20 мин сохраняется

10Х активности, через 30 митт — 5".,.