Штамм @ . @ вкм @ , @ для изучения природы @ -плазмид и факторов вирулентности

Штамм @ . @ вкм @ , @ для изучения природы @ -плазмид и факторов вирулентности

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Штамм E.Coli BKM (Коллекция микроорганизмов при Институте биохимии и физиологии микроорганизмов АН СССР) для изучения природы в-плазмид и факторов вирулентности.

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

3(51) С 2 N 15/OO (54) ШТАММ Е.CQLI BKM R

ВИРУЛЕНТНОСТИ. (21) 3454747/28-13 (22) I8.06.82 (46) 07.09.84. Бюл. У 33 (72) А.И.Коротяев и О.В.Дорохина (73) Кубанский государственный медицинский институт им. Красной Армии (53) 575. 113(088.8) (56) 1. Prskov I. et al.-"Ас а Pathol. Nicrobiol. Scand.", 1961, V. 53, р. 404-422.

2. Evans D.С., Evans D.J.-"Infect.

and Immun", 1978, V.21, р.638-647 (прототип). (57) Штамм Е.Cali BKM R

Я-плазмид и факторов вирулентности. б

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ

У

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н ABTOPCNOINV аВИаитВЪстви

1112059

Изобретение относится к микробиологии, а именна к характеристике генетических особенностей штамма

Е. Coli 353Nal, которому передана

1 конъюгативная плазмнда, кодирующая не только антибиатикарезистентнастh,. но и патогенные свойства бактерий, и может быть испальзавонс> при выяв-лении и изучении возбудителей остря:х

М ::! кишечных заболеваний, вирулентные свойства которых определяются плозмидами.

Известна плазмица К88.,обнаруженная в энтеропатогенных, штаммах ки—

1 шечной палочки, выделенных ат поросят 111 .

Плазмида К88 вызывает маннозорезистентную агглютинацию эритрацитав поросят, содержит белковые субъединицы с молекулярным весам 2200029500 дальтон, которые образуются только при температуре выше 18 С, Молекулярный вес плазмиды 50 МД.

Наиболее близкой к изобретению

Г по технической сущности и достигаемому р езульт ать я вля ет ся лл аз мида

CPA/ l, обнаруженная в штаммах кишечных папочек серагрупп 078, 015, Об3, 025 выделенных ат людей, боль-, ных диарреей L2 1. 36

С%А/l дает положительную реакцию маннозарезистентной агглютинации человеческих эритроцитаь группы крови A при комнатной температуре.

Плазмида, кодирующая антиген 1 факто- -„. ра колонизации, часто контролирует и продукцию термостабильнага энтеротоксина. Молекулярный вес ее 60 Q

Она может переноситься к реципиентным бактериям Е.coli К-12 с помощью

R-факторов (RtsI, RT.-19К) либо плаз— мидами типа Ent. CFA/1 подавляет фертильность бактерий, связанную с наличием Й -фактора 1с — 1 — 19К и явля— ется

j$

Применение плазмиды СГА/1 не всег-да позволяет изучить генетические и биологические свойства факторов вирулентности, контролируемых плазмидами, так как она является неконъюЯ) гативной, способна к мобилизации

1с-фактораму или Ent-плазмидами, ведет себя как fi, не определяет устойчивости бактерий к антибиотикам, а также синтез колицина.

Цель изобретения — выявление у штаммов энтеробактерий конъюгатввной плазмиды, применение которой позволит более ладно изучить биолс-ические и генетические свойства з .orn клас са плазмид.

Плозмида обнаружена у штамма кишечнс;й палочки, выделенного ат больного знтераколитом, и получила об-значение рИЯ211. Вновь выявленная плазмида придает штамму-хозяину устойчивость к ампициллину (Ар), стрептомицину (Sm), тетрациклину (Тс)., хлорамфениолу (Cm), канамицину (Km), способность синтезировать антиген колонизации, калицин. Для изучения плазмиды рКМР.2!1 ана была передана методом конъюгации штамму Е Сo li 353с1а1+ (Штамм депонирован в Институте биохимии и физиологии микроорганизмов AH СССР пад номером ВКМР,Ъ 1

Морфологические и. изнаки. Клетки Е.,са1i ВКМ R„D имеют вид прямых полоче к величиной 1., 5-3, 0 х О, 30,,5 мкм, слабо подвижны, перетрихи, слар и капсул не образуют, по Граму не окрашиваются.

Культуральные признаки. На мясопентаннам агаре Е.coli BIQI К,D дает сссегка зсыпуклые полупрозрачные колонии диаметром i 3 мм, на среде

Энда — круглые ко,oнии, окрашенные в темно — красы:)й цвет с мет аллическим блеском, диаметром 1-3 см, í". кравя— ком агаре — круглые колонии без гемализа, пагупрозрачные. На мясапеп" тоннам бульоне Е.сoli ВКМ R„D абра=-ует равномерное пому" íåíèå и асадак. физиологические признаки. Е.coli

БКИ Б/Б желатин не расжижает, образует индал, сероводород, восстанавливает нитраты в нитриты, фермеHTH рует с. образованием кислоты и газа глюкозу, лактозу, мольтазу, маннит, арасбиназу, .галактозу.

l åнетнческие особенности. Штамм

E.co1.i ВКМ 2 D применяется в качестве реципиента при конъюгацианнай передаче с!, -плазмид, Конъюг.;с, ионные скрещивания штамма Е. со1 8!GI R< D, соцержащега в своем сос-. аве канъюгативную пл аз миду рКМ 211, проводили по известному методу. В качестве реципиентов использовали Е .coli С600 Ri Ьг eu lос, Е.coli СбОО Nal" thrleu

1ас. Во всех случаях были выявлены трансконъюганты, антибиотикарезистентнасть, а также способность синтезировать антиген колонизации и калнцин которых соответствовали

1 l 2059!

ВНИКНИ Заказ 6419/18

Тираж 521 - всвое

Филиал ППП "Патент", r.Óèòopoä, ул.йроек-ная, 4 таковым у донориого штамма, Коньюгационный перенос плазмиды реципиентным клеткам происходил через 20 ч с частотой 2 О, В отличие От известной CFA/I-плязмиды,выделенной от людей, больных диарреей, ид нтифицированная плазмида рКИ 221 контролирует антибиотикорезистентность и способность продуцировать колицин, не угнетает F-опосредованную конъюгацию, имеет fi-фенотип. Плязмида рКИЙ2!! не способна наделять клетки хозяина чувствительностью к донороспецифическим фагам !42, fI, Ы, NS2,QP (IncF) IKe (IncN) РМ (Inc8, IncW), IfI (IncI).Ñëeäoâàтельно, вновь выявленная плазмида не относится к группам несовместимости F, Ы, P, W, I.

Пример. Б11гологические свойства. Штамм Е.coli ВКИ RqD, которому в результате конъюгационного скрещивания с клиническим изолятом Е.coli была передана плазмида рКИЙ211, инкубировяли на агаре, содержащем 0,5Е дрожжевого экстракта, 1Ж триптона, !7 хлористого натрия, в течение 20 ч при 3? С. Бактерии суспендировали в О,!5 И хлористом натрии (1О ч кл/мгг ). Реакцию гемагглютинации проводили на стекле, смешивая бактерияльную культуру с 0,1 М 3 -маннозой в О,!5 И хлористом натрии и 37 †н суспензией отмытых человеческих эритроцитов.

Реакцию учитывали через 10 мин при

20 С. Штамм Е.coli ВКИ R D давал ! положительную реакцию гемагглютинации человеческих эритроцитов групп крови А, В, AB в присутствии г -маннозы, что свидетельствовало о наличии у него антигенов колонизации.

Штамм Е.coli ВКИ P!D инкубировали на чашках с мясопептонным агаром в течение 20 ч при 3?г С. Колонии исследуемого штамма убивали путем обработки парами хлороформа в течение

20 мин при комнатной температуре.

Затем на чашки с убитыми колониями штамма Е.coli ВКИ R D засевали индикаторные штаммы Е.coli К-12 arg u

Е.coli ф, инкубировапи 20 ч при 3? С.

Штамм Е.coli BKN R D вызывал ингибирование роста бактерий индикаторных штаммов Е.coli K-12 arg и г

ЧТО СВНДЯТEЛ :С - с 1О O ЕГО CHOO нос.i" и ироду!;иро в". 1 ь калицин . ф„.1 -, и ч е с к и е с -„О и с- т в,-,,"; -, ш -, я !.1,!

Е, О i ВКг Р и °,у .1;.:1,р м.я 1 О Ч -1м

КО11ъю яц1иг бь :: Я .:;:едя:.1Я :..=- <-:,:Я

РГг! Р21 . была:=-.ле.!e. -, Я и —.аз!11-п,яя

Д!1К. Злектрофор"--- плазм!дно .. ДП" в 17-ИО1. Ягяэо =.!с -;=:!å !!! Яволил вь:ЯВИТЬ i!Я:.И:,ИŠ—.ИО Л 1;

1гре .! Яр Ят плЯ = "..-:диo:й . .1К был !!э

ЧЕН В ОПЫТЯХ ИО ТРЯНСфОРМЯЦИИ КЛЕ ;.

Е. со11 К-12 802 !ге-:1яс. Выход трянс"формяитов сос-. Явил I . !б " 0 ня мкг Д!1К. В резу !ьтяте были выделены трянсформянты,,антибиотикорезистеитиость и —.=.--.рулентные свойства (способность и-.;.дуц:гpoв ать Янтиген колонизации которых соответствовали т ако вым у и сходно го шт яммя.

ИО1гекуляpный вес плазмиды pK!IR2 I I был Определен с помощью электрофорезя 3 ягарозном геле при использовании в качестве свидетелей рГЛ -илазмид с известньгм молекулярным весом.

Злектрофоретический анализ показал наличие илазмиды с молекулярным весом 98 P.

Вы;-. -:!ение иля"-мид. контролирующих

or,::- oüременнО устой.-.ивость бактерий

K ле«я:стгениьи веществам, я также способность сиг;.:.езиooHBTh янтиген колоииэяции и кол11ции, ирецставляет особь1й интерес., тяк как такое сочетание свойств, определяемых плязмидай, делает культуры более опасными, повышяет их патогенность, сОздяет труднОсти д, я лечения заболеваний. В связи с эTH.*.! 1" тямггг с. Илязми" ями кодирую щимг- свойства яитибиотикарезистент ности и вирулентиости, Y!oróò быть

ИСИОЛЬЗОВЯггь ПPH ВЬ)ЯВ1г эНИ1г -; ИЗ У ЧЕ нии возбудителей острых кишечных инфекций. Зто расширит наше погпгмянне механизмов инфекционных болезней и откроет новые -uegc aa для диагноза, ле-.eнHиHя и предупреждения бактериапьных инфекций. Кроме -.îãî,,штямгы с такими глазмидами пригодны для изучения генетики и биологии Я-плаэмггд и факторов нирулент сти. В частности ани позволят доло.:.-:.:-!ить существующую кляссифг!кяцигэ плазмид,