Способ ферментативного превращения водонерастворимых субстратов

Способ ферментативного превращения водонерастворимых субстратов

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

СПОСОБ ФЕРМЕНТАТИВНОГО ПРЕВРАЩЕНИЯ ВОДОНЕРАСТВОРИМЫХ СУБСТРАТОВ в водно-органической системе, содержащей водный буферный раствор фермента, водорастворимые компоненты реакции и раствор субстрата в органическом растворителе, несмешивающемся с водой, отличающийся тем, что, с целью ускорения и упрощения процесса, в водно-органическую систему дополнительно вводят поверхностно-активное вещество, а затем осуществляют диспергирование до достижения оптической прозрачности системы. (Л

СОЮЭ СОВЕТСНИХ

СОЩЕЛИСТИЧЕСНИХ

ГЕСПУЬЛИН

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ HOMHTET СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ (21) 3537069/28-13 (22) 10.01.83 (46) 15.09. 84. Бюл. К 34 (72) К.Мартинек, А. В.Левашов, И.В.Березин, Б.И.Курганов, Н.Л.Клячко, N.Ë.Хмельницкий, В.И.Пантин и Е.Г.Абакумова (71) Московский ордена Ленина, ордена Октябрьской Революции и ордена

Трудового Красного Знамени государственный университет им. M.B.Ëîìîíîсова (53) 577.15(088.8) (56) 1. P.Cremonest, G. Carrea, L. Теггага, E.Antonini ÅUr. J. Biochem", 1,974, 44,401-405.

2. Е.Antonini. G.Саггеа, P.Cremonesi. — "Enz. Microb. Techпо1.", 1981, 3, 291-296.

Рц11 С 12 N 9/00 С 12 P 1/00 (54)(57) СПОСОБ ФЕРМЕНТАТИВНОГО ПРЕВРАЩЕНИЯ ВОДОНЕРАСТВОРИ1ЫХ СУБСТРАТОВ в водно-органической системе, содержащей водный буферный раствор фермента, водорастворимые компоненты реакции и раствор субстрата в органическом растворителе, несмешивающемся с водой, отличающийся тем, что, с цельЬ ускорения и упрощения процесса, в водно-органическую систему дополнительно вводят поверхностно-активное вещество, а затем осуществляют диспергирование до достижения оптической прозрачности системы.

Составитель В.Муронец

Редактор Л.Пчелинская Техред Т,Фанта Корректор Л. Пилипенко.

Заказ 6528/20 Тираж 521 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

1 1 3035, Москва, Ж-35, Раушская наб ., д . 4 /5

Филиал ППП "Патент", r.Óæãoðoä, ул.Проектная, 4

3 11

Способ применим к реакциям, катализируемым ферментами, относящимися к различным классам: оксидоредуктазам, гидролаэам, транферазам. Экспериментально показано, что в коллоилных системах, получаемых по предлагаемому способу, ферменты полностью сохраняют свою каталитическую актив— ность. Выход целевого продукта во всех случаях составляет 1007 и достигается за 1,5-2,5 ч.

Пример 1. !!ерастворимый в воде и-нитрофениловый эфир И-карбобензокси-L-тирозина растворяют в октане, содержащем 0,1 М Аэрозоля ОТ (дииэооктилсульфосукцианат натрия) . К 2 мл этого раствора добавляют 0,1 м мМ раствора d — химотрипсина в 0,02 М

РРис †буфе с рН 8,0 (содержание воль в сис геме задается количествами вносимых водных растворов и может достигать нескольких десятков обьемных процентов). Смесь встряхивают

2 мин до образования однородного оптически прозрачного раствора. 3а

1 протеканием реакции следят спектрофотометрически на длине волны 400 нм по образованию П -нитрофенолят иона (1007-ная конверсия субстрата достигается за 2 ч).

Пример 2. Процесс ведут аналогично примеру 1, но в качестве субстрата, испбльзуют нерастворимый в воде п -нитроанилил 11-бензоил-Lтирозина. За реакцией слепят по образованию tl--нитроанилина на длине волны 380 нм (1007-ное превращение субстрата достигается за 2 ч).

Пример 3. В октане, содержащем 0,1 М Аэрозоля ОТ, растворяют октиловый альдсгид, нерастворимый в воде. В 2 мл этого раствора в спектрофотометрической кювете вносят

О, 1 мл 10 М раствора алкогольдегидрогеназы и 10 М НАДИ в фосфатном буфере с р11 8,8. Смесь встряхивают дс образования оптически прозрачного

1 3406 4 раствора 2 мин. За реакцией восстановления альдегида в спирт следят по образованию HMI (расходу НАДН) на длине волны 340 нм (100 7.-ное пре5 вращение субстрата достигается за

1,5 ч) .

Пример 4. Процесс, аналогичный примеру 2, ведут в циклогексане в присутствии 0,3 Бридж 5б (цетилполи-10-этилен-гликоль) или в смеси хлороформ — октан 1:1 в присутствии бромистого цетилтриметиламмония.

1007.-ное превращение субстрата достигается за 2,5 ч.

Г! р и м е р 5. K 1 мл 0,1-0,05 М раствора Аэрозоля ОТ в октане, содержащем 0,01 — 0,1 М триолеина (нерастворимого в воде субстрата), добавляют

4-80 мкл водного растлора панкреатической липазы с концентрацией 5 мг/мл

".,месь встряхивают в течение 30 с до образования оптически прозрачного раствора. Продукт реакции — олеиновую кислоту определяют экстракцией и тит25 рованием щелс чью. 1ОО.-ное превращение субстрата за 4 ч.

Таким образом, использование изобретения приводит к значительному

30 ускорению способа (в 10-30 раз) а

t также к его упрощению. Упрощение способа заключается в его универсальности (так как нет необходимости подбора ферментов и соответствующих орга— нических растворителей), а также в возможности постоянного контроля за ходом ферментативной реакции. Эти преимущества основаны на получении практически гомогенной системы в результате образования ассоциатов типа

40 обращенных мицелл, содержащих ферменты в водном окружении. Ускорение процесса может являться следствием стабилизации ферментов в такой системе, а также увеличения поверхности

45 границы раздела водной и органической среды.