Способ идентификации субпопуляций @ и @ -лимфоцитов крови

Способ идентификации субпопуляций @ и @ -лимфоцитов крови

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

СПОСОБ ИДЕНТИФИКАЦИИ СУБПОПУЛЯЦИЙ Т- И В-ЛИМФОЦИТОВ КРОВИ путем обработки мазков крови химическими веществами с последующим флюоресцентным исследованием, отличающийся тем, что, с целью упрощения и ускорения способа, обработку нефиксированных мазков крови ведут инкубацией в парах формальдегида в течение 25-30 мин.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (19? (11?

3(51? G 01 ?1 33/48

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

H ABTOPCHOMV СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Р сО

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ (21) 3377116/28-13 (22) 07.01.82 (46) 15.09.84. Бюл. ?? 34 (72) Л.П.Царевский, М.С.Байжомартов, Л.A.Öàðåécêàÿ и Т.Д.Укбаева (71) Казахский научно-исследовательский институт эпидемиологии, микробиологии и инфекционных болезней и

Алма-Атинский государственный институт усовершенствования врачей. (53) 616.07(088.8) (56) 1. Авторское свидетельство СССР

9 682229, кл. G 01 N 33/16, 1979 (прототип). (54)(57) СПОСОБ ИДЕНТИФИКАЦИИ СУБПОПУЛЯЦИЙ Т- И В-ЛИИФОЦИТОВ КРОВИ путем обработки мазков крови химическими веществами с последующим флюоресцентным исследованием, о т— л и ч а ю шийся тем, что, с целью упрощения и ускорения способа, обработку нефиксированных мазков крови ведут инкубацией в парах формальдегида в течение 25-30 мин.

1113742

Составитель С. Котелевцев

Редактор. Н.11выдкая ТехредМ.Надь Корректор A.Oáðó÷àð

Заказ 6612/37 Тираж 822 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП"Патент", r. Ужгород, ул. Проектная, 4

Изобретение относится к области медицины, а именно к экспериментальной и клинической иммунологии и аллергологии.

Известен способ изучения Т- и

В-лимфоцитов с помощью окрашивания 5 изучаемых клеток флюоресцентным зон дом З-метоксибенэантроном,маркирующим конформационные изменения мембранных макромолекул активированных клеток. Измерение интенсивности флюоресценции позволяет выделять

"яркие", условно относимые к В-лимфоцитам, и "неяркие", условно относимые к Т-лимфоцитам клетки 111 .

Этот метод достаточно длителен и трудоемок, так как для точной идентификации требуется длительная подготовка образЦов и использование микроцитофлуориметра.

Целью изобретения является упрощение и ускорение способа.

Поставленная цель, достигается тем, что согласно способу идентификации субпопуляций Т- и В-лимфоцитов крови путем обработки мазков крови химическими веществами с последующим флюоресцентным исследованием, обработку нефиксированных мазков крови ведут инкубацией в парах формальдегида в течение 25-30 мин.

Способ осуществляют следующим образом.

Нефиксированные мазки крови помещают в сосуд с притертой пробкой емкостью 0,5-1 л, на дно которого на 35 сыпают 15-20 r порошка формальдегида (или орто-фтальальдегида . Сосуд плотно закрывают и помещают в термостат (80 С1 на 25-30 мин. Извлеченные препараты просматривают в сине- 4О фиолетовом спектре люминесцентного микроскопа МЛ-2 (фильтры СС 1,5, (ФС-1), что позволяет определить флю- оресценцию мембран клеток различного цвета (желтого, желто-зеленого, зеленого .

Меньшая часть лимфоцитов (20-25%) имеет четко очерченное округлое несветящееся ядро, а цитоплаэматическая мембрана флюоресцирует зеленым светом. Определяется свечение только цитоплазматической мембраны, слабое, мелкое, гнеэдно-гранулярное.

Это Т-лимфоциты.

Большую часть популяции лимфоцитов (40-60%) составляют клетки с желтой по цвету, расплывчатой, пятнистой флюоресценцией, охватывающей свечением ядернуюи цитоплаэматические мембраны. Свечение яркое и однородное — В-лимфоциты.

Пример . Из крови больных инфекционно-аллергической формой бронхиальной астмы приготовляют мазки.. Инкубируют в парах формальдегида в течение 28 мин. Мазки анализируют под люминесцентным микроскопом.

Количество T-клеток составляет 25%, количество В-лимфоцитов — 604. Контрольное сопоставление с изолированной популяцией Т- и В-клеток этой крови с помощью реакций роэеткообразования подтверждает полученный результат.

Использование предлагаемого способа идентификации субпопуляции лимфоПитов по сравнению с известными дает возможность заменить дорогостоящийt флюоресцентный 3-метоксибензантрон на формальдегид, упростить обработку исследуемой популяции лимфоцитов (не окрашивание клеток, а инкубация в парах формальдегида,), чем достигается значительная экономия расрасхода реактива, идентифицировать субпопуляции в мазках крови без трудоемкого выделения лимфоцитов иэ клеток периферической крови.