Штамм @ @ 3/2000-продуцент кофермента коа

Штамм @ @ 3/2000-продуцент кофермента коа

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Штамм Streptomyces lavendofuseus 3/2000 (коллекция культур микроорганизмов Всесоюзного научно-исследовательского института антибиотиков,коллекционный номер 1689) - продуцент кофермента КоА.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

0% 01) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИИ (21) 3595546/28-.13 (22) 20.05.83 (46) 07.10.84. Бюл. Р 37 (72) Д.Я.Павловича, А.А.Зелтиньш, Ю.О.Якобсон, Я.А.Кузманис и Л;К.Жогота (71) Институт микробиологии им.Августа Кирхенштейна АН Латвийской CCP (53) 579.6 ° 15(088.8) (56) 1. De Vries W.. Giovier W., Hovans 1., Gregory I., Novelli G., Lipmann F., Soodak М., Purification

of coenzyme А from fermentation sources and its further partial identification. I. Ameiic. Chem. Soc., 1950, vol. 72, р. 4838.

SCSdC )2 N 15/00 // С 12 N 9/00;. С 12 P 1/06 С 12" R-4 65 (54) ШТАММ STREPTOMYCES LAVENDOFUSEUS

3/2000-ПРОДУЦЕНТ КОФЕРМЕНТА КОА. (57) Штамм Streptomyces lavendofuseus

3/2000 (коллекция культур микроорга" низмов Всесоюзного научно-исследовательского института антибиотиков,коллекционный номер 1689) - продуцент кофермента КоА.

1 11173

Изобретение относится к микробиологии и касается изолирования нового штамма — продуцента кофермента КоА.

Наиболее близким техническим решением к предлагаемому является культу- ра Streptomyces fradiae, которая может продуцировать кофермент А )1), Однако в пределах вида не определена способность к биосинтезу кофермента КоА, а у известного штамма, f0 выделенного Ваксманом (S.Vaksman), не определена внеклеточная продуктивность.

Целью изобретения является выделение и изучение продуцента кофермен- 1 та КоА среди культур рода Streptomyces способного расти на минеральной среде с дешевым источником углерода.

Штамм Streptomyces lavendofuseus

3/2000 получен от исходной культуры 20

St.гeptomyces lavendofuseus 1/586, выделенной из окультуренной дерновоподзолистой почвы Латвийской ССР путем естественного отбора.

Штамм Streptomyces lavendofuseus 25

3/2000 хранится в коллекции культур микроорганизмов ВНИИ антибиотиков под номером 1689 и характеризуется следующими признаками.

Морфология. Спороносцы прямые, З0 длинные с примитивными спиралями

{RA), имеют два-три слегка растянутых завитка. Споры овальные, продолговатые, с гладкой оболочкой, размером 1,3-1,4х0,9 мкм.

Культуральные свойства. На среде

СР1 колонии бесцветные, воздушный мицелий цвета лаванды. Органическая среда (мучная) темнеет, воздушный мицелий розово-сиреневый.

Физиологические свойства. В качестве источников углерода ассимилирует фруктоэу, мальтозу, сахарозу, крахмал, слабее - ксилозу, глюкозу, глицерин. В качестве источников азота хорошо усваивает мочевину, по сравнению с солями аммония лучше усваивает соли нитратов.

Тирозиназа отрицательная. Меланоиды не образует. Среда Треснера-Данга чернеет. Желатину разжижает, наблюдается слабое побурение среды. Нитраты восстанавливает до нитритов. Пептонизирует молоко.

Антагонистические свойства проявляются слабо. Не патогенен.

Использование штамма Streptomyces

lavendofuseus 3/2000 для биосинтеза кофермента КоА.

Пример 1. Штамм выращивают на косяках среды СР с крахмалом и глюкозой (1: 1) в качестве источника углерода в течение 7-8 дней при 2627 С. Смыв конидий с одного косяка

0 переносят в колбу, содержащую 50 мп среды. Для получения более монокони-.. диальной суспенэии смыв конидий Измельчают в ступке или дезинтеграторе

MSE в течение 15 с (62,5 Ч/см ).

Состав посевной среды, Ж: крахмал 2,0; NaN0q 0,2; К НРО1 0,1

КС1 0,05; MgSO). 0,05; смесь микроэлементов — 1 мл, вода дист. 1 л,, рН 7,0-7,2. Продолжительность выращивания 30-34 ч.

Посевной материал в количестве

10Х от объема вносят в ферментационную среду, состав которой следующий, X: крахмал 3,0, NaNOq 0,4; К2НРО 1,0;

КС1 0,05; MgS04 0,05; смесь микроэлементов 1 мл, вода дист. 1 л, рН 7,07,2. Емкость колб 750 мл, среда в колбах 50 мл. Скорость вращения качалки 220 об/мнн. Продолжительность ферментации 96 ч.

Накопление КоА в клетках и в ферментационной среде определяют через каждые 24 ч. Максимальное накопление

КоА как в клетках, так и в ферментационной среде наблюдается через 96 ч.

Полученные данные отражены в табл.1, 1117318

Таблица 1

КоА мкг/мг сухой биомассы

КоА, мкг/мл среды

Время культивирования, ч

Метод определения КоА

В клетках

В среде

Каплана-Липмана

250

1500

7,0

310

3600

7,4

5050

490

11,2

910

5900

12,9

Метод ацилтиокиназы

108

530

2,3

42

2200

4,4

2200

4,9

2800

6,0

П р и м е ч а н и е. Методом Каплана-Липмана, наряду с коферментом КоА, определяют и дефосфо-КоА, и 4-фосфопантотеноилцистеин, и тем самым получают увеличенные результаты по сравнению с методом ацилтиокиназы, которым определяют содержание истинного КоА.

КоА меКоА меВремя ферменИсточник углерода тодом

Каплана-ЛипКультура из рода

Streptomyces, выделенная иэ почвы

Латвийской CCP тации, ч мана, мкг/мл среды

Крахмал

3%-ный

Str. lavendofuseus 3/2000

12,1 58

12,9

10,2

Str. fulvoviridis

Мальтоза

3%-ная

10,2 5,3

Str. olivochromo55

ferus

Str. violaceus

9,0

6,0

Глюкоза

2%.-ная

2,5

96 5,1

Str. sporoclivatus

7 8. Пример 2. Штамм выращивают аналогично примеру 1, однако в ферментационной среде используют различные источники углерода. Сравнительные результаты отражены в табл.2.

Таблица 2 тодом ацилтиокиназы, мкг/мл 45 среды

Пример 3. Способность синтезировать кофермент КоА культурой

Streptomyces 1ачепс1ойизецз 3/2000, ло сравнению с другими культурами рода Streptomyces, выделенными из почвы Латвийской CCP и выращенными в условиях, аналогичных примеру 1, отражена в табл ° 3. ,,Таблица 3

Количество накопленного КоА в ферментацион" ной среде, мкг/мл (методом

Каплана-Липмана) В дальнейшем препарат КоА выделяют иэ ферментационной среды по схеме, включающей следукицие этапы: нагревание, центрифугирование, поСоставитель В.Голимбет

Редактор Н.Егорова Техред 3.Палий Корректор А.Обручар

Заказ 7152/17 Тирюк 521 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Иосква, Ж-35, Раушская наб., д.4/5

Филиал ППП "Патент", г.ушгород, ул.Проектная, 4

S 1117318 d

Таким образом, предлагаемый штамм . вторную адсорбцию на колонках и элюиобладает способностью на среде с рование, последующую лиофилизацию крахмалом в качестве источника угле- элюата с последующим растворением, рода за 96 ч синтезировать кофермент преципитацией, адсорбцией на ионооб»

КоА в количестве 12,9 мкг/мл (по Кап- 5 менной смоле и повторной лиофилизалану-Липману) или 6,0 мкг/мп (по цией элюата. Полученный препарат методу ацилтиокиназы). представляет собой белый порошок.

Таким образом, штамм Streptomyces

lavendofuseus 3/2000 продуцирует

12,9 мкг/мн КоА. его использование позволит создать отечественный препарат КоА.