Способ диагностики деструкции ткани мочевыводящей системы

Способ диагностики деструкции ткани мочевыводящей системы

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ДЕСТРУКЦИИ ТКАНИ МОЧЕВЫВОДЯЩЕЙ СИСТЕМЫ путем исследования мочи, отличающийся тем, что, с целью установления деструкции в кортикальном слое почечной ткани, определяют содержание лизофосфатидилхолина и гидроперекисей липидов, активность трансамидиназы и щелочной фосфатазы , и при появлении в моче лизофосфатидилхолина и трансамидиназы, активности щелочной фосфатазы от 1,5 до 37,5 нмоль/ /мл/мин и содержании гидроперекисей липидов от 1,08 до 4,86 нмоль/сут диагностируют деструкции почечной ткани в кортикальном слое.

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

„„SU,, 118352 3(5D А 61 В 1000

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПO ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ фОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ!

К А ВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (2! ) 3474505/28-13 (22) 19.07.82 (46) 15.10.84. Бюл. № 38 (72) В. А. Жмуров, В. И. Крылов, 3. Г. Ревенко и А. Н. Дурыгин (7l) Тюменский государственный медицинский институт (53) 612.07 (088.8) (56) I. Авторское свидетельство СССР № 800878, кл. G Ol N 33/48, 1981 (прототип) . (54) (57) СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ДЕСТРУКЦИИ ТКАНИ МОЧЕВЫВОДЯЩЕЙ

СИСТЕМЫ путем исследования мочи, отличаощийся тем, что, с целью установления деструкции в кортикальном слое почечной ткани, определяют содержание лизофосфатидилхолина и гидроперекисей липидов, активность трансамидиназы и щелочной фосфатазы, и при появлении в моче лизофосфатидилхолина и трансамидиназы, активности щелочной фосфатазы от 1,5 до 37,5 нмоль/

/мл/мин и содержании гидроперекисей липидов от 1,08 до 4,86 нмоль/сут диагностируют деструкции почечной ткани в кортикальном слое.

1118352

Изобретение относится к медицине, а именно к педиатрии, в частности к способам диагностики деструкции тканей мочевыводящих путей у детей.

Известен способ диагностики деструкции ткани мочевыводящей системы путем исследования мочи.

Указанный способ диагностики основан на определении активности эндогенных фосфолипаз А и С в сыворотке крови и моче при помощи реакции экстрактов с яично-агарозной пластинкой с образованием различных классов фосфолипидов. В норме (у здоровых детей) активность фосфолипазы С не обнаруживается, имеется незначительная активность фосфолипазы А. Повыщение активности фосфолипазы С в моче позволяет диагностировать активный деструктивный процесс в мочевыводящих путях.

Способ является безопасным для больных, позволяет диагностировать мембранодеструктивный процесс в мочевыводящих путях, что является важным для уточнения характера заболевания (1) .

Однако, выявляя активный деструктивный процесс в тканях мочевыводящих путей, способ не позволяет уточнить локализацию 25 воспалительно-деструктивного процесса в мочевыводящем тракте (гломерулярный или тубулярный отдел нефрона, чашечно-лоханочная система, мочевой пузырь). Способ не позволяет также установить механизмы (причины) развития деструктивного процесса в тканях мочевыводящих путей, что затрудняет выбор наиболее рационального метода терапевтического воздействия.

При значительном бактериальном загрязнении мочи, что наблюдается при некоторых заболеваниях мочевыводящего тракта, трудно исключить присутствие экзогенной (бактериальной) фосфолипазы А и С в моче, что может приводить к ошибкам в диагностике деструктивного процесса.

Цель изобретения — установление деструкции в кортикальном слое почечной ткани.

Поставленная цель достигается тем, что согласно способу диагностики деструкции ткани мочевыводящей системы путем исследования мочи определяют содержание лизофосфатидилхолина и гидроперекисей лилидов, активность трансамидиназы и щелочной фосфатазы, и при появлении в моче лизофосфатидилхолина и трансамидиназы, активности щелочной фосфатазы от 1,5 до

37,5 нмоль/мл/мин и содержании гидроперекисей липидов от 1,08 до 4,86 нмоль/сут диагностируют деструкцию в почечной ткани в кортикальном слое.

Способ осуществляют следующим образом.

Мочу, взятую из суточного количества, центрифугируют для удаления клеток мочеЗО

55 вого осадка при 3000 об/мин 15 мин. Содержание лизофосфатидилхолина в моче определяют методом тонкослойной хроматографии на силикагеле. Липиды экстрагируются из

20 мл мочи смесью хлороформ — метанол.

Затем 0,2 мл экстракта подвергают восходящей хроматографии в системе растворителей: хлороформ — метанол — аммиак — вода (в соотношении 30:8,8:1,0:0,4). После хроматографии пластины проявляют в парах йода. Пятно лизофосфатидилхолина элюируют и пробирку помещают на песочную баню для перевода органического фосфора в неорганический. Содержание фосфора в пробе определяют по реакции с малахитовым зеленыМ путем фотометрии комплекса при длине волны 650 нм.

Расчет содержания лизофосфатидилхолина в моче проводят по формуле:

Х= аХ0,016Х0, где Х вЂ” содержание лизофосфатидилхолина в моче в мкмоль/сут; 1. — содержание фосфора в пробе, найденное по калибровочному графику;

0,016 — коэффициент пересчета в мкмоль;

37 — суточный диурез в мл.

Определение активности щелочной фосфатазы в моче производят оптимизированным методом.

Определение активности трансамидиназы проводят следующим образом. К 1 мл буферного раствора с субстратом (0,1 М фосфатный буфер с рН 7,4, содержащий 17-10 М

Л-аргинина и 0,1!4 М глицина) добавляют

0,5 мл мочи. Смесь инкубируют !20 мин при комнатной температуре. Затем добавляют

1 мл раствора нингидрина (2,5 /о-ный раствор нингидрина в метилцеллюлозе) и 3 мл, ледяной уксусной кислоты. Смесь инкубируют 60 мин в кипящей водяной бане. Охлаждают при комнатной температуре и определяют оптическую плотность раствора при длине волны 546 нм.

Расчет активности фермента производят . по формуле:

Х— где X — активность трансамидиназы в н мол ь/мл/мин;

Ео — экстинция опыта; экстинция контроля; конечныи объем реакционнои смеси в мл;

18 10 — коэффициент молярной экстинции раствора орнитина в нмоль/см ;

120 — время инкубации в мин;

0,5 — объем мочи.

Содержание гидроперекисей липидов в моче определяют методом амперометрического титрования.

Липиды экстрагируют из 20 мл мочи смесью хлороформ — метанол. Липидный экст1118352

Лизофосфатидилхолин, мкмоль/сут.

Щелочная фосфатаза, нмоль/мл/мин

Не определяется

1,!2+0,29

Не определяется

0,39+0,01

Трансамидиназа, нмоль/мл/,ин

Гидроперекись липидов, нмоль/ сут ракт инкубируется с 50 мг йодистого калия в темноте 1 ч. Выделившийся под влиянием перекисей липидов свободный йод связывают добавлением 1 мл 0.0001 н р;.створа тиосульфата натрия, избыток которого оттитровывают амперометрически 0,0001 н раствором йодноватокислого калия в ячейке полярографа.

Расчет содержания гидроперекисей липидов производят по формуле

Х = 4,055 X А X D X IO, Биохимические показатели мочи у здоровых лиц (Х +- м) и = 20.

У здоровых лиц отмечается лишь незначительная активность щелочной фосфатазы в моче и очень низкий уровень экскреции пе- 25 рекисей липидов с мочой. При появлении в моче лизофосфатидилхолина, повышении активности щелочной фосфатазы выше

1,5 нмоль/мл/мин, появлении трансамидиназной активности мочи и увеличении экскреции с мочой гидроперекисей липидов выше

1,0 нмоль/сут диагностируют активный деструктивный процесс в почках, преимущественно в проксимальном отделе нефрона, обусловленный активацией процессов свободнорадикального окисления липидов почечных цитомембран.

Пример 1. Больной П., 14 лет. Поступил в клинику с жалобами на отеки, слабость, изменения в анализах мочи (протеинурия до

2 — 4%). Болен в течение 10 лет, обострения почечного процесса 2 — 3 раза в году. В кли4О нической картине заболевания доминирует выраженный отечный синдром, значительная протеинурия. Учитывая длительность заболевания, отсутствие эффекта от проводимой терапии, с целью диагностики развития дест- 4 руктивного процесса в почках проведены специальные биохимические исследования мочи: содержание лизофосфатидилхолина в моче 0,74 мкмоль/сут, активность щелочной фосфатазы 6,90 нмоль/мл/мин, трансамидиназы 2,77 нмоль/мл/мин, содержащие гидроперекисей липидов в моче — 1,82 нмоль/сут

На основании клинической картины заболевания и результатов биохимических исследований мочи диагностирован активный деструктивный процесс (повышена экскреция с мочей лизофосфатидилхолина), преимущественно в проксимальном отделе нефрона (высокая активность щелочной фосфатагде )(— содержание гидроперекисей липидов в моче в нмоль/сут; разница (мл) раствора йодноватокислого калия, пошедшего на титрование контроля и опыта;

4,055 — расчетный коэффициент для пересчета в нмоль;

D — суточный диурез в мл.

Контрольные (нормативные) показатели содержания продуктов перекисного окисления, мембранолиза и ферментативной активности мочи следующие: зы, трансамидиназы) в результате активизации процессов свободно-радикального окисления липидов (повышена экскреция с мочой гидроперекисей липидов) .. Проведенное в последующем прижизненное морфологическое исследование почечной ткани обнаружило и подтвердило изменения в гломерулярном и тубулярном отделе нефрона, с преимущественным поражением эпителиальных клеток проксимального канальца в виде дегенеративно-деструктивных изменений, что свидетельствует о достоверности полученных данных.

Пример 2. Больная М. 12 лет. Больна в течение 3 лет. В клинике доминирует незначительный отечный синдром, умеренная протеинурия (до 2 г/сут), незначительная гематурия. Обострения процесса 1 раз в год. С целью диагностики возможного деструктивного процесса в почках проведены специальные биохимические исследования мочи. Получены следующие результаты: содержание лизофосфатидилхолина 1,30 мкмоль/сут, активность щелочной фосфатазы 37,5 нмоль/

/мл/мин, трансамидиназы — 6,75 нмоль/мл/

/мин, экскреция гидроперекисей липидов

4,86 нмоль/сут. В результате проведенных исследований диагностирован активный деструктивный процесс (значительно увеличена экскреция с мочой лизофосфатидилхолина), преимушественно в проксимальном отделе нефрона (высокая актрвноСть щелочной фосфатазы, трансамидийазы) в результате активизации процессов свободно-радикального окисления липидов (значительно повышена экскреция. с мочой гидроперекисей липидов). Проведенное в последуюшем прижизненное морфологическое исследование почечной ткани обйаружило мембранозный тип гломерулонефрита с изменением базальных мембран капилляров клубочка, с признака1118352

Составитель Б. 11угаьев

Ре.фактор.1. Авраменко Техред И. Верее Корректор A. Знмокосов

Заказ 7311/3 Тираж 687 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж вЂ” 35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП «Патент», г. Ужгород, ул. Проектная, 4 ми дистрофии эпителия проксимального отдела нефрона (деструкции кортикального лоя почки).

Таким образом, клинические примеры и результаты морфологического исследования почечной ткани свидетельствуют о том, что использование предлагаемого способа диагностики деструктивного процесса в почечной ткани позволяет с высокой степенью достоверности диагностировать деструкцию почечной ткани в кортикальном слое, даже при незначительных клинических проявлениях заболевания определить локализацию и выяснить механизмы деструкции. Выяснение локализации деструктивного процесса и механизмов деструкции необходимо для уточнения характера патологического процесса в почках, что расширяет диагностические возможности способа и является основанием для проведения целенаправленных терапевтических мероприятий с использованием препаратов с антиоксидантным и мембранопротекторным фармакологическим эффектом.