Способ определения резистентности организма

Способ определения резистентности организма

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

1. СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ РЕЗИСТЕНТНОСТИ ОРГАНИЗМА, включающий инкубацию лейкоцитов крови с тестмикробной взвесью с последующим подсчетом живых и мертвых микроорганизмов, отличающийся тем, что, с целью повышения точности определения, взаимодействие лейкоцитов с тест-микробной взвесью осуществляют в присутствии аутосыворотки. 2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что в качестве тест-микробов используют B.lisodecticus в количестве 80 клеток на 1 лейкоцит , а сыворотку добавляют в количестве 2,5 мл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

A 6l К 10/00

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К A BTOPCHOIVIY СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

llO ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3429045/28-13 (22) 11.03.82 (46) 30.10.84. Бюл. № 40 (72) М. И. Ухаль и В. И. Трофанчук (71) Запорожский институт усовершенствования врачей им. М. Горького (53) 615.375 (088.8) (56) 1.Èâàíîâ А. И., Чуховин Б. А. Лабораторное дело. № 10, 1976, с. 610.

ÄSuÄÄ I i2IOO4 А (54) (57) 1. СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ РЕЗИСТЕНТНОСТИ ОРГАНИЗМА, включающий инкубацию лейкоцитов крови с тестмикробной взвесью с последующим подсчетом живых и мертвых микроорганизмов, отличающийся тем, что, с целью повышения точности определения, взаимодействие лейкоцитов с тест-микробной взвесью осуществляют в присутствии аутосыворотки.

2. Способ по п 1, отличающийся тем, что в качестве тест-микробов используют В.1isodecticus в количестве 80 клеток на 1 лейкоцит, а сыворотку добавляют в количестве

2,5 мл.

1121004

34+2 Å â .туг

fgO

С-т тК

Изобретение относится к медицине, преимущественно к лабораторной диагностике и может быть использовано при любых локализациях инфекционно-воспалительных процессов (в урологии, в хирургии, в гинекологии и т.д.).

Известен способ определения резистентности организма, включающий инкубацию лейкоцитов крови с тест-микробной взвесью с последующим подсчетом живых и мертвых микроорганизмов (1).

Однако известный способ недостаточно то u и, uocKo.1üê, l ч иты ваетс я ТОЛ ько Одн а сторона им мунологического состояния — реакции клеточного иммунитета и не учитывается антимикробная активность сыворотки.

Цель изобретения — повышение точности определения резистентности организма.

Поставленная цель достигается тем, что согласно способу определения резистентности организма, включающему инкубацию лейкоцитов крови с тест-микробной взвесью с последующим подсчетом живых и мертвых микроорганизмов, взаимодействие лейкоцитов с тест-микробной взвесью осуществляют в присутствии аутосыворотки.

В качестве тест-микробов используют

В.lisodecticus в количестве 80 клеток на

1 лейкоцит, а сыворотку добавляют в количестве 0,5 мл.

Способ осуществляется следующим образом.

Для получения 0,5 мл сыворотки у больных с инфекционно-воспалительными процессами в мочеполовых органах, в жел .ном пузыре, в легких и в других органах производят забор в пробирку около 2-3 мл венозной крови. Лейкоциты получают из надосадочного слоя цитратной крови больных.

С этой целью в пробирку набирают 0,7 мл

3,8 /A раствора лимонно-кислого натрия и 3 мл венозной крови. Пробирки центрифугируют при 1000 об/мин в течение 5 мин и вместе с надосадочной жидкостью отделяют лейкоциты от эритроцитов. Лейкоциты отмывают от цитрата 0,9% раствором хлористого натрия путем центрифугирсвания при

3 тыс. об/мин в течении 5 мин. При попад нии в пробирку во время отделения лейкоцитов некоторого количества эритроцитов и тромбоцитов (мешающих учету бактерицидной активности), последние разрушают добавлением 3%-ного раствора уксусной кислоты. После разрушения эритроцитов лейкоциты сразу же отмывают путем центрифугирования от уксусной кислоты. К осадку отмытых лейкоцитов добавляют 1,0 мл 0,9%ного раствора хлористого натрия и смешивают их с 0,5 мл cblBopoTKH крови. К приготовленной смеси добавляют одномиллиардную взвесь суточной культуры В.lisodecticus из расчета до 80 микробных клеток на один лейкоцит, обычно это составляет 0,2

5 10 i5

G,3 м микробной взвеси. Смыв В.lisodecticus и титрование культуры производят 0„9%-ным раствором МаС1. Приготовленную смесь инкубируют в термостате в течении 3 ч при

37 . По окончании срока инкубации пробирки центрифугируют при 3 тыс. об/мин в течении 5 MHH. Надосадочную жидкость сливают, осадок встряхивают и из последнего готовят на стандартных стеклах мазки. После высушивания на воздухе мазки фиксируют в течении 5 мин в метиловом спирте или в смеси этилового спирта с формалином в соотношении 19:1. Фиксированные мазки окрашивают по методике Spitznagel в модификации В. Е. Пигаревского, т.е. в течении

15 мин зеленым прочным и в течении 30 с азуром А. При приготовлении растворов красителей (зеленого прочного и азура А) придерживаются рекомендаций В. В. Пигаревского. Так, рН раствора зеленого прочного составляет 8,1; готовят 0,25%-ный раствор азура А. При этом методе окраски живые микроорганизмы окрашиваются в сиреневый или в темно-синий цвета, а неживые - в зеленый цвет или определяются в виде теней, а также сферопластов. Для учета активности антимикробных факторов лейкоцитов и сыворотки крови впервые использован метод полуколичественной оценки в виде среднего цитохимического коэффициента (СЦК). С этой целью модифицирована формула Астальди и Берга: где а --тени бактерий;

Π— бактерии„окрашенные в зеленый цвет; ь — сферопласты; — бактерии, окрашенные в сиреневый цвет; ко -- общее число подсчитанных микробных клеток.

i 1 а основании полученных v различных групп больных данных впервые разработаны критерии оценки активности антимикробных факторов лейкоцитов и сыворотки крови, а следовательно, и резистентности организма к инфекции. При этом активность антимикробных факторов лейкоцитов и сыворотки крови расценивалась как высокая при

CIj,K 1,0 и выше; 0,6 — 0,9 — средняя; 0,3—

0,5 — низкая и 0 — 0,2 — очень низкая.

Лрилер 1. =îëüíîé Д. 56 лет находился на стационарном лечении в урологическом отделении областной хлинической больницы.

Диагноз: обострение хронического левостороннего пиелонефрита, хронический ростатит.

Клинические проявления заболевания: боли в поясничной области слева, озноб с повышением температуры до 38-39 С, дизурические расстройства акта мочеиспускания.

Указанные явления отмечались в течении

1121004 четырех дней. 3а это время больной наблюдался и лечился у врача — уролога поликлиники.

Краткие данные анамнеза. Семейный анамнез не отягощен. В 1980 г. перенес левостороннюю уретеролитотомию, а в 1981 г— левостороннюю пиелолитотомию. Послеоперационный период протекал гладко. Рана зажила первичным натяжением. Пассаж мочи из левой почки восстановился. С 1981 г по март 1983 г перенес три атаки строго левостороннего пиелонефрита. Дважды находился на стационарном лечении в урологическом отделении областной больницы.

По данным рентгеноурологического об"следовании рецидива камней в почках и в мочеточниках нет. Слева имеются признаки острого пиелонефрита. По данным изотопной регографии функция левой почки снижена в фазе секреции и экскреции. Проба

Реберга-Тареева не изменена. Анализы при поступлении. Общий анализ крови 10.04.83 г.—

Эритр. 3910 гемоглобин 130 г/л; лейкоцитов - 3,9.10 (эозинофил. 1, палочки 10, сегмент 54, лимфоцит 25, моноцит 10), СОЭ22 мм/ч. Общий анализ мочи: белка 0,066О/о, лейкоцитов на 1/2 поля зрения, соли — ураты. Из мочи высеян протей в титре до

100 тыс. в одном мл мочи. По данным коагулограммы имеет место гиперкоагуляция.

Печеночные пробы и электролиты в норме.

Общий белок 70 г/л, -глобулин 19О/o.

Иммунологические исследования при поступлении.

Индуцированная активность лейкоцитарного лизоцима 0,0028 мкг/л.

Бактерицидная активность лейкоцитов крови (CUK) 0,5. Бактерицидная активность сыворотки крови (СЦК) 0,3. Суммарная бактерицидная активность лейкоцитов и сыворотки крови (СЦК) 1,0. Содержание иммуноглобулинов в сыворотке крови (Jg) — Jg200; Jg М 140 и JgA 80 МЕ/мл. Интенсивность фагоцитоза лейкоцитов крови (ИФ)

48О/о, фагоцитоз незавершенный.

Лечение больного.

Антибактериальная терапия: биссептол

480 по 2 таблетки два раза в день, карбенициллин по 500 тыс. ед. внутримышечно четыре раза в сутки (1 курс), фуразолидон

0,05 гр четыре раза в сутки, эритромицин

0,25 гр три раза в день (11 курс).

Для повышения активности антимикробных факторов организма использовали: метандростенолон 0,005 rp три раза в день внутрь; левомизол 150 мг один раз в три дня и витамин А по 500 тыс. МЕ три раза в день. Указанные препараты больному назначены с третьего дня после поступления на стационарное лечение. Курс лечения проведен в течении 15 дней.

Кроме указанной терапии проводилось симптоматическое лечение и гальваногрязевые апликации на область предстательной

55 железы (в связи с хроническим простатитом).

Диета — стол № 7, седативные препараты (родедорм) утром и вечером. Режим — полупостельный. Дважды внутривенно введено по 120 мл нативной плазмы и по 200 мл гемодеза.

По окончании курса лечения состояние больного улучшилось. Болевой синдром и дизурические явления прекратились. В удовлетворительном состоянии выписан на амбулаторное лечение. Койко-день в стационаре — 17 дней. Больной после выписки из стационара приступил к труду.

Исследования проведены у 102 больных с инфекционно-воспалительными процессами в почках 55 человек; в мочевом пузыре

10 человек, в предстательной железе 15 человек; в яичках 5 человек; в яичниках и в матке 12 человек и в желчном пузыре

10 человек. Кроме того, исследования также проведены у 20 здоровых людей (доноров).

Наряду с одновременным изучением активности антимикробных факторов лейкоцитов и сыворотки крови у больных и у доноров, также изучали раздельную антибактериальную активность сыворотки крови и лейкоцитов. С этой целью к 0,5 мл сыворотки крови добавляли 0,2 мл миллиардной взвеси суточной культуры В.lisodecticus. Живую суточную культуру В.lisodecticus добавляли раздельно к отмытым лейкоцитам из расчета до 80 микробных клеток на один лейкоцит. Препараты с раздельным исследованием окрашивали зеленым прочным и азуром А по указанной методике. Живая суточная культура В.lisodecticus взята в качестве тест-микроба в связи с тем, что она в отличии от других тест-микробов (стафилококков, энтеробактерий, стрептококков и многих штаммов кишечной палочки) обладает высокой чувствительностью к сывороточным и лейкоцитарным защитным факторам. Кроме того, более крупные по сравнению с 209 лабораторным штаммом стафилококка размеры микробных клеток В.lisodecticus позволяют более точно определить их состояние после взаимодействия с защитными факторами лейкоцитов и сыворотки крови.

В результате проведенных исследований установлено, что у здоровых доноров средний цитохимический коэффициент (CUK) при одновременном определении активности антибактериальных факторов в лейкоцитах и в сыворотке крови составляет

2, 1+0,2:

СЦК при раздельном определении активности антибактериальных факторов в лейкоцитах и в сыворотке крови здоровых людей составляет 1,0 -0,06 и 0,8 — +0,01 соответственно. При суммировании данных раздельного исследования (1,0 -0,8=1,8) видно, что эти показатели значительно ниже, чем

1121004

О

50

Составитель Г. Крюкова

Редактор H. Воловик Техред И. Верес Корректор О. Луговая

Заказ 7603/4 Тираж 587 Поди и сное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий! 13035, Москва, Ж вЂ” 35, Рву шскай иаб., д. 4/5

Филиал ППП «Патент», г. Ужгород, ул. Проектная, 4 показатели, полученные при одновременном исследовании бактерицидной активности лейкоцитов и сыворотки крови (Р<0;001).

У больных с острыми инфекционно-воспалительными ароцессамн независимо от их локализации в различных органах (58 человек) СЦК при одновременном взаимодействии лейкоцитов и сыворотки крови больных с тест-микробной взвесью активность антибактериальных факторов составляет

0,8 0,02. В вариационном ряду эти показатели CUK колеблются от 1,2 до 0,7. При этом более высокие цифры СЦК (1,2-1,0) отмечаются у больных, заболевших острыми инфекционно-воспалительными процессами впервые. Низкие показатели СЦК (0,8-0,7) отйечаются у ослабленных больных с частыми обострениями инфекционновоспалительных процессов. На основании сопоставительного анализа клинических проявлений острых инфекционно-воспалительных заболеваний, а также результатов лабораторных, биохимических и функциональных исследований указанная закономерность в изменениях CLIK при одновременном определении активности антимикробных факторов в лейкоцитах и в сыворотке кРови отмечалась У 90о/в больных.

При раздельном исследовании активности антимикробных факторов лейкоцитов и сыворотки крови у больных с острыми инфекционно-воспалительными процессами

СЦК составляет 0,4+ 0,02 и 0,3 0,01 ссютветственно. Однако в вариационном ряду эти результаты не однородны. Так, при проведении сопоставительного анализа данных раздельного определения активности антимикробных факторов лейкоцитов и сыворотки крови с клиническими проявлениями заболевания, а также с результатами лабораторных биохимических и функциональных исследований закономерность в изменениях СЦК в зависимости от тяжести течения инфекционно-воспалительных заболеваний выявлены лишь у 60-52о/о случаев соответственно. При этом довольно часто (у 30о/о случаев) у ослабленных больных с рецидивными острыми инфекционно-воспалительными процессами СЦК антибактериальной активности лейкоцитов крови оставался высоким (0,5 — 0,6), что явно не соответствовало клиническим проявлениям заболевапий, а также данным лабораторного биохимического и функционального исследований. Эти неточные данные могут ввести в заблуждение врача при решении вопроса о назначении больным препаратов, содержащих защитные факторы (нативную плазму, " -глобулин и другие), а также иммуностимуляторов.

Следует отметить, что у шести больных с уросепсисом имело место повышение количества микроорганизмов после их раздельной инкубации с лейкоцитами или сывороткой крови. При одновременной инкубации в указанных больных микроорганизмов с лейкоцитами и сывороткой крови повышение количества микроорганизмов после окончания сроков инкубации не отмечалось, хотя СЦК бактерицидной активности у больных не превышал 0,1 и отмечалась выраженная декатионизация и дегрануляция лейкоцитов.

У больных с хроническими инфекционно-воспалительными процессами (44 человека) СЦК активности антимикробных факторов при одновременной инкубации микроорганизмов с лейкоцитами и сывороткой крови в среднем составляет 1,5 -0,03.

СЦК активности антимнкробных факторов у больных с хроническими инфекционно-воспалительными процессами при раздельной инкубации микроорганизмов с лейкоцитами и сывороткой крови составляет 0,6+

0,03 и 0,5+0,02 соответственно.

Одновременное определение активности антимикробиых факторов лейкоцитов и сыворотки крови (в отличие от ранее применяемых методов раздельного исследования) обосновано с физиологической и научной точки зрения. Так, в сыворотке крови имеется ряд защитных факторов (иммуноглобулины, комплемент, пропердин, В-лизины и другие), которые сами не обладают бактерициднОй активностью, нО прн взанмОдействии с микроорганизмами Образуют комплексы, резко усиливающие активацию и выход из лейкоцитов неспецифических бактерицидных факторов (лизоцима, катионных белков, миелоперокскдазы, лактоферррина и других). Этим можно обьяснить более высокие уровни СЦК у больных с инфекционно-воспалительными процессами и у здоровых доноров при одновременной инкубации лейкоцитов и сыворотки крови с В. Iisodecticus.

Таким образом„ одновременное воздействие на микроорганизмы антибактериальных факторов, содержащихся в лейкоцитах и в сыворотке крови дает ие суммарный, а качественно новый эффект, который более точно отражает состояние антибактериальной активности организма и повышает точность определения резистентности организма на 30 /