Способ получения липазы

Способ получения липазы

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЛИПАЗЫ из семян хлопчатника, включаюпщй их прорапрвание, измельчение проростков, обработку ацетоном, экстракцию белков из ацетонового порошка, осаждение липазы сульфатсм аммония, отличающийся тем, что, с целью увеличения каталитической активноети и выхода липазы, семена перед проращиванием вьщерживают в течение одних суток в 0,001-Oj03%-HOM растворе пирофосфата натрия, а затем проращивают в тех же условиях в течение 4-6 сут.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

«91 аг1

ЭС5гг С 12 гг 9 20

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР пО ДЕЛАМ ИЗОБ ЧТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ

ОПИСАНИЕ ИЭОБРЕ

Н АВТОРСКОМУ СВИДЕ ГЕЛЬСТВУ (21) 3318269128-13 (22) 17.07.81 (46) 07.11.84. Бюл. -Ф 41 (72) М..Н. Валиханов, М.N. Абдуллаева и М.М. Рахимов (71) Ташкентский ордена Трудового

Красного Знамени государственный университет им. В.И. Ленина (53) 577.15(088.8) (5á). 1. Авторское свидетельство СССР

У 560888, кл. С 12 И 9/20, 1976.

2. Рахимов N.N., Ьлдашев H.X.

Липолитические ферменты в прорастающих семенах хлопчатника. -"Химия природных соединений", 1970, и 6, с. 782. (54) (57) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЛИПАЗЫ из семян хлопчатника, включающий их проращивание, измельчение проростков, обработку ацетоном, экстракцию белков из ацетонового порошка, осаждение липазы сульфатом аммония, о т л ич а ю шийся тем, что, с целью увеличения каталнтической активнос- . ти и выхода липазы, семена перед проращиванием выдерживают в течение одних суток в 0,001-0,037-ном растворе пирофосфата натрия, а затем проращнвают в тех же условиях в течение 4-6 сут.

40

1 I 1226

Изобретение относится к способам получения ферментов из растительных источников и может найти применение в пищевой и фармакологической промышпенностях и медицине, 5

Известен способ получения липазы из поджелудочной железы методом аффинной хроматографии P1) .

Недостатком данного способа является необходимость использования !О дефицитного сырья.

Наиболее близким к предлагаемому по технической сущности и достигаемому положительному эффекту является способ получения липазы из семян хлопчатника, включающий. их. проращивание, измельчение проростков, обработку ацетоном,.экстракцию белков из ацетонового порошка и осаждение липазы сульфитом аммония (2) .

Недостатками известного способа являются низкий выход и невысокая каталитическая активность целевого продукта.

Цель изобретения . — увеличение 25 каталитической активности и выхода липазы.

Поставленная цель достигается тем, что согласно способу получения липазы из семян хлопчатника, включающему их проращивание, измельчение проростков, обработку ацетоном> экстракцию белков из ацетонового порошка и осаждение липазы сульфатом аммония, семена перед проращиванием выдерживают в течение суток

35 в 0,001-0,03Х-ном растворе пирофосфата натрия, а затем проращивают в тех же условиях в течение 4-.6 сут.

Способ осуществляют следующим образом.

Семена замачивают и проращивают в 0,001-0,03Х-ном растворе пирофосфата натрия. Время замачивания опреде. ляют но времени до начала прорастания семян (семена прорастают через сутки), затем семена отделяют друг от друга и помещают иа фильтровальную бумагу, смоченную пирофосФатом натрия. Через 2 сут их опять помещают в сосуд с раствором пирофосфа50 та натрия и через каждые сутки берут пробы и измеряют активность.

В табл. 1 представлена зависимость активности липазы от времени выдерживания семян в пирофосфате, 94 2 в табл. 2 — активность и выход липазы в зависимости от условий проращивания семян, в табл. 3 — активность очищенной липазы после сульфатного осаждения, в табл. 4 — влияние различйых фосфатов на активность липазы.

Данные табл.. 4 свидетельствуют, что использование вместо пирофосфата натрия других фосфатов не приводит к достижению максимального положительного эффекта.

Пример 1. 100 r семян хлопчатника сорта 108-Ф замачивают в

35 мл 0,003Х-ного раствора пирофосфата натрия в течение 24 ч остав о ляют в термостате при 25-27 С. Через

\ сутки наклюнувшиеся семена раскладывают между листами фильтровальной бумаги, увлажненной пирофосфатом натрия, и выдерживают еще 2 сут при 250

27 С. Затеи проростки помещают в сосуд с О,ООЗХ-ным раствором пирофосфата натрия. Через 6 сут семена раэмельчают в среде холодного ацетона, промывают ацетоном и высушивают на воздухе. Порцию приготовленного таким способом порошка суспендируют в 0,.1 И фосфатном буферном растворе в соотношении 1:10 при перемешивании в течение 1 ч при 0-5 С. Раство о римые белки отделяют центрифугированием в течение 15 мин.

Осадок отбрасывают, а к получен- . ному супернатанту добавляют сульфат аммония до концентрации 55Х от насыщения. Осадок липазы отделяют центрифугированием, растворяют в том же буфере и высушивают, активность 325,76 ед/мг, выход 172,3Х.

Полученная липаза белая, nopomковидная, без запаха. Состав: белок 93Х, вода 7Х.

Пример 2. Проводят по примеру 1, но берут .0,001Х-ньиве раствор пирофосфата и вццержнвают семена 4 сут.

При концентрациях ниже 0,001Х и выше О,ОЗХ стимулирующее действие пирофосфата незначительно.

Использование предлагаемого способа позволяет увеличить выход липазы в 1,2-2,2 раза, а удельную каталитическую активность в 1,63,4 раза.

1122694

Продолжение табл !

Таблица 1

Активность липазы, ед/шт

325,76

1237,6

286,7

97,47

125,5

18Î, 10

Та блица 2 онцентрлция ирофосфата натрия, Ж

1 1

Известный способ

Показатели.

0,001 0,003 0,01 0,03

32,0 40,72

19, 56

18,46

14,88

Общая активность, ед/мг

672

- 480

480

896

416

161, 5 215, 3

115,3

115,3

100

Таблица 3

Известный способ

Показатели

Каталитическая активность, ед/мг

95,04

256,0

332,0

Выход по отношению к исходной активности (416 ед/мг), .X., .172 3 93,3

129,0

92,3

Время нахождения семян в пирофосфате натрия концентрации О,ООЗХ, сут

Каталитическая активность, ед/мг белка

Выход по отношению к исходной активности, Я

Общая активность, ед/мг

Предлагаемый способ

Предлагаемый способ

Концентрация пирофосфата натрия, Ж

0,001 0,003 0,01 О,ОЗ

325э 76 156 72 147 68

357,6 716,8 384,0 384,0

1122694

Продолжение табл.4

Таблица 4

Триполифосфат натрия

0,0037

280,2

Полифосфат натрия

О, 001Х

Без фосфатов

241, 1

Ортофосфат натрия

О,ОООЗЖ

132

114,2

Пирофосфат натрия

О,ООЗЙ

386,2

Составитель В. Муронец

Техред 3.Палий Корректор А. Тяско

Редактор И. Николайчук

Филиал ППП "Патент", г. Уагород, ул . Проектная, 4

Заказ 8100/23 Тираж 521 Подписное

ВЯИИЙИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж-35,. Раушская наб., д. 4/5