Способ получения эритроцитарного диагностикума
Патент 1124975
Авторы
Способ получения эритроцитарного диагностикума
Иллюстрации
Реферат
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЭРИТРОЦИТАРНОГО ДИАГНОСТИКУМА путем выделения эритроцитов с последующей их фиксацией и сенсибилизацией, о т ли чаюц и и с я тем, что, с целью повниюния специфической активности продукта, в качестве целевого продукта иЪпользуют сенсибилизированные эритроциты с зарядом 3,3-Ю - 1,а1-10 Кл. 9
СОЮЗ СОВЕТСКИХ
»»I
РЕСПУБЛИК
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР
AO ДЕЛАМ ИЗОБРЕТШИЙ И OTHPblTHA
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ н автовснавм саидктюъствю (21) 3628557/28-13 (22) 18.07.83 (46) 23.11.84. Бюл. 943 (72) А.И.Мирошников, А.В.Темнов, О.В.Савицкая, М.В.Дулатова, A.Þ.Èâàêîç, Н.К.Призова и A.Ê.ÀHôèíîãåíîâà (71) Институт биологической физики
AH СССР (53) 612.115(088.8) (56) 1.Регламент производства вритроцитарных диагностнкумов В 81-77,. утверзденный 16.04.77 начальником главного управления по производству бактерийных и вирусных препаратов
Минздрава СССР Хлябнчем Г.Н.,с.85.
SU.„A
3(Я) A 61 К 35 18 G 01 и 33/48 (54)(57) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЭРИТРОЦИ»
ТАРНОГО ДИАГНОСТИКУМА путем выделения эрнтроцитов с последукицей их фиксацией и сенсибилиэацией, о т— л и ч а в шийся тем, что, с целью новыаения специфической активности продукта, в качестве целевого продукта используют сенсибилиэированные эритроциты с зарядом
3,3 10 И - 1,81-10 и Кл.
1124975
Изобретение относится к вакцинно-сывороточному делу и может быть использовано в технологии получеHBH эритроцитарных диагнастикумов медицинского и ветеринарного назйачения.
Известен способ получения эритроцитарных диагностикумав путем выделения эритроцитов с последующей их фиксацией и сенсибилизацией flj
Недостатками известного способа являются низкая специфическая активность целевого продукта вплоть до получения искаженных результатов при обследовании сывороток здоровых и больных людей, а также трудоемкость проверки специфичности диагностнкума, так как для этого необходимо предварительно отобрать 10-12 сывороток больных соответствующим заболеванием н столько же сывороток здоровых даноров.
Целью изобретения является повышение специфической активности целевого продукта.
Поставленная цель достигается согласно способу получения эритроцитарнога диагностикума путем выделения эритроцитов с последующей их фиксацией и сенсибилизацией, в качестве целевого продукта используют сенсибилнзированные эритроциты с зарядам 3,3 10 " -1,81 ° 10 Кл.
Способ осуществляется следующим образам.
После получения цельной крови (например, бараньей) эритроциты фиксируют формалином, сенсибилиэируют необходимым сенситином, затем жидкий препарат замораживают и после лиофильной .сушки получают сухой диагностикум. V жидкого или сухого препарата определяют заряд эритроцитсв, а в качестве диагнастикума используют эритроциты с зарядом
3,3 10 К вЂ” 1,81 10 Кл.
При технической реализации предлагаемого способа для повышения в
"". ïåöèôè÷íîñòè определенного эритроцитарного диагнастикума предварительно устанавливают граничное зна" чение величины заряда, при снижении которой у целевого продукта ведут выбраковку готового препарата. Граничные значения можно определить однократным определением заряда специфических и неспецифических серий целевого. продукта при параллельном их контроле с гипериммунными сыворотками животных и сыворотками здоровых доноров, т.е. путем градуировки, как проиллюстрировано в примере. Причем па существующим техническим условиям Регламента произ " водства диагностикум считается специфичным если титр его с сываротКой
l5
65 здоровых доноров в реакции РИГА меньше чем 1/100.
Пример. Контроль специфичности жидких и сухих эритроцитарных дизентерийных диагнастикумов Зонне.
1 мл жидкого эритроцитарного диагностикума Зоине (в случае контроля сухого препарата его предварительно в течение 1 сут вымачивают в дистиллированной воде) подвергают центрифугированию при d 350 в течение 5 ь мин. Полученный осадок, содержащий эритроциты, сенсибилизированные дизентерийным антигеном Зонне, обрабатывают измерительной средой с параметрами: ионная сила p = 0,02; рН = 7,3; t = 25 С, Концентрацию эритроцитов в пробе доводят разбавлением ее измерительной средой до 5 10 -5 10 клеток на 1 мл. Величину поверхностного заряда эритроцита рассчитывают по формуле g 3 10 М UG С SE 10 0рН5Кл, где измеряемой величиной является
u - электрофоретическая подвижность (ЭФП), мкм С " В см; — вязкость (для используемых растворов равна
10 II); К вЂ” величина, обратная толщине двойного электрического слоя, которая для водных растворов адновалентных солей (концентрация, CM) равна 3 » Гсм 3,06 108 см = 10 см
S — площадь поверхности эритроцита, среднее значение которой 1,65-10 см
ЭФП измеряют методом микроэлектрофореза на приборе Пармоквант-2 (Карл. Цейсс, Иена) в режиме автоматическЬго анализа подвижности
100 эритроцитарных клеток. Используемый измерительный прибор обеспечивает получение средних значений ЭФП.
В таблице приведены результаты контроля производственных серий дизентерийного эритроцитарного диагностикума Зонне по ЭФП и в РИГА с донорской сывороткой.
Из приведенной таблицы следует, что и для жидких, и для сухих препаратов нижним граничным значением
ЭФП, по которому следует браковать препарат, является ЭФП 1,10 (или
1,81- 10 Кл), так как препараты, ЭФП эритроцитов которых равен 1,10 и более (серии 5-8) имеют титр в
РНГА с донорской сывороткой ниже, чем 1/100, т.е. соответствуют техни ческим условиям. Препараты с ЭФП
1,04 и ниже (заряд 1,71 ° 10 Кл, серии 1-4) не соответствуют тЕх— ническим условиям, так как имеют титры с донорскими сыворотками
1/150 и более.
Верхняя граница значений ЭФП используемых.препаратов определяется . природой поверхности фиксированных несенсибилизированных зритроцитов " барана. Это значение оказалось равным 2 мкм С В см или 3,3 10. Кл, 1124975
Сухой препарат
Р р с доской ороткой
1/1200
1/1200
0,77
0,77
0,84
1/1200
1/1200
0,97
1/600
1/300
0,89
0,90
0,89
1/150
1/300
1,04
1/50
1/50
1,16
1,10
1 32
1,34
1,37
1,29
1;35
1,37
Составитель Е.ситникова
Техред Т.Маточка Корректор В. Синицкая
Редактор О.Черниченко
Подписное
Эаказ 8323/5 Тираи 687
ВНИИПИ Государственного комитета СССР
По.делам изобретений и открытий
113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д.4/5
Филиал ППП Патент, г.уигород, ул.Проектная, 4
Преимущества предлагаемого способа заключаются в повьвюнии специфической .активности диаз ностикума за счет отработки из готовых диагностикумов, препаратов с низкой специфической активностью. Кроме того, способ прост,так как отпала необходимость в донорских сыворотках, которые ранее было необходимо предварительно получать для постановки реакции РНГА.