Способ отбора эритроцитов для получения эритроцитарного диагностикума
Патент 1124976
Авторы
Способ отбора эритроцитов для получения эритроцитарного диагностикума
Иллюстрации
Реферат
COOS СОВЕТСНИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ
РЕСПУБЛИН,SU„„
1(5В A 61 K 35/1.8g G 01 N 33/48 с
Ь
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
К АВТОР СКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР
ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3628557/28-13 (22) 18.07.83 (46) 23.11.84. Бюл. 9 43 (72) А.И.Мирошников, A.В;Темнбв, О.В.Савицкая, М.В.Дулатова, A.Þ.ÈâàHîâ, Й.К.Призова и A.Ê.Aíôèíîãåíîâà (71) Институт биологической физики AH СССР . (53) 612.115(088.8) (54) 57) СПОСОБ ОТБОРА ЭРИТРОЦИТОВ .
ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ. ЭРИТРОЦИТАРНОГО ДИАГНОСТИКУМА, заключающийся в том, что эритроциты выделяют иэ донорской. крови, фиксируют, далее онределяют заряд фиксированных .эритроцитов и в качестве исходного сыръя иэиоль-12. эуют эритроциты с зарядом 4,12 10
3,3 10" Кл.
1124976
Изобретение относится к вакцинно-сывороточному делу и может быть использовано. в технологии получения эритроцитарных. диагностикумов медицинского.и. ветеринарного назначения.
В патентной и научно-технической литературе не известны способы отбора эритроцитов для получения эритроцитарного диагностикума.
Целью изобретения является создание способа отбора эритроцитов для получения эритроцитарного диагностикума.
Поставленная цель достигается тем что согласно способу отбора эритроцитов для получения эритроцитарного диагностикума, заключающемуся в том, что эритроциты выделяют из донорской крови, фиксируют, далее определяют заряд фиксированных эритроцитов и в качестве исходного сырья используют эритроциты с зарядом 4,12 10 — 3,3 10 Кл, Способ осуществляется следующим образом. После получения цельной крови (например, бараньей) из нее выделяют эритроциты, затем их фиксируют формалином и подвергают аналитическому или препаративному клеточному электрофорезу, определяют заряд, а в качестве частиц-.носителей антигенов в дальнейшем производстве днагностикумов из всей популяции используют эритроциты с зарядом 4,12 ° 10 — 3,3 10 Кл.
При технической реализации пред". лагаемого способа для отбора эритроцитов предварительно устанавливают граничное значение величины
"-aporia, при снижении которой у фиксированных эритроцитов ведут выбраковку эритроцитов. Граничные значения можно определить однократным определением заряда фиксированных эритроцитов: при параллельном контроле днагностикумов, изготовленных на этих эритроцитах. Согласно Регламенту производства контроль ка чества диагностикума осуществляется в реакции РНГА с гипериммунными сыворотками животных и сыворотками здоровых доноров, т.е. путем градуировки, как проиллюстрировано в примере. Причем по техническим условиям Регламента производства диагностикум считается специфичным если титр его с сывороткой здоровых доноров в реакции РНГА менее чем
1/100.
П р н м е р. Отбор фиксированных эритроцитов 1 мл формализированных эритроцитов барана, содержащихся в физиологическом растворе, осаждают центрифугированием при (= 350 в течение 5 мин с последующей двухкратной отмывкой и ресуспензированием в измерительной среде с параметрами: ионная сила (II =0,02; рН 7,3; t=25 C. Концентрацию зритроцитов в пробе доводят разбавлением ее измерительной средой до 5 10 ь
5 10 клеток на 1 мл. Величину поверхностного заряда эритроцита рассчитывают по формуле f -3-10 gé05
CG5Е 10 "gМ U5 Кл, где измеряемой величиной является U электрофоретическая подвижность (ЭФП), мкм С В см; () -вязкость (для используемых растворов равна 10 п); Ж -величина, обратная толщине двойного электрического слоя, которая для водных растворов одновалентных солей,(концент15 рации, См) равна к=Я/ ),оь-10 cM =
10 см ; S- площадь поверхности эритроцита, среднее значение которой равно 1,65 106 см .
ЭФП измеряют методом микроэлектрофореза на приборе Пармоквант-2 (Карл Цейсс, Иена) в автоматическом режиме. Используемый прибор обеспечивает получение средних значений ЭФП и статистическую обработку данных. Сопоставительные данные полученных ЭФП эритроцитов в сравнении с определением специфичности препаратов (изготовленных на этих эритроцитах) по реакции РНГА даны в табл.
Из приведенных данных контроля
ЭФП восьми партий формализированных эритроцитов (колонка 1) в сопоставлении с титрами РНГА диагностикумов, изготовленных на этих эритроцитах
ЗБ (колонки. 2 и 3), первые четыре партии и жидких., и сухих препаратов имеют титры больше, чем 1/100, т.е. по техническим условиям Регламента производства их надо забраковать.
У всех этих партий эритроцитов ЭФП меньше 2 мкм С В см. Препараты партий, 5-8 имеют титр меньше 1/100, т.е. соответствуют ТУ. ЭФП этих партий больше 2 мкм С В см. Причем препарат, эритроциты которого имеют
ЭФП 1,93 мкм С В см, имеют титр
1/150 и 1/300, т.е. являются плохими, а препарат, ЭФП которого 2,02 мкм
С В см имеют титр 1/50, т.е. являются хорошими. Таким образом, нижняя граница значений ЭФП, при которой необходимо проводить отбраковку эритроцитов, равна 2 мкм
С В см или 3,3 10 - Кл.
Верхняя граница значений ЭФП фиксированных эритроцитов определяется природой поверхности нативных эритроцнтов барана.Это значение окаэа-! -1 лось равным 2,5 мкм С В см или
4 ° 12. 10 2 Кл б() Визуальный контроль спонтанной агглютинации не позволяет выявить плохие эритроциты и диагностикумы бракуют после их изготовления, а .,использование предлагаемого спосо$5 ба предотвращает выпуск неспецифи1124976 дает необходимость длительного изготовления диагностикумов на этих эритроцнтах и постановки РНГА с донорскими сыворотками. диагностикума в РНГА с донорской сывороткой идкий
1/1200
1,41
1,47
1,59
1,93
1/50
1/50
2,02
1/50
1/50
2,13
2,23
2,31
Составитель Е.Житникова
Техред Т Маточка КоРРектоР В.Синицкая
Редактор О.Черниченко
Заказ 8323/5 Тираж 687
ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий
113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д.4/5
Подписное
Филиал ППП Патент, г.ужгород, ул.Проектная, 4 ческого диагностнкума. Кроме того, предлагаемый способ позволяет проводить отбраковку эритроцнтов быстро, сразу после их фиксации, т.е. отпа1/1200
1/1200
1/300
1/300
1/1200
1/600
1/150