Способ диагностики функциональной недостаточности печени при вирусном гепатите

Способ диагностики функциональной недостаточности печени при вирусном гепатите

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ФУНКЦИОНАЛЬНОЙ НЕДОСТАТОЧНОСТИ ПЕЧЕНИ ПРИ ВИРУСНОМ ГЕПАТИТЕ путем исследования холестериновых фракций сыворотки крови методом тонкослойной хроматографии , отличающийся тем, что, с целью упрощения и снижения травматичности способа, на хроматограммах определяют уровень свободного холестерина и его эфира - холестероларакидоната и при повьппении уровня холестерина с одновременным снижением уровня его эфира относительно нормы диагностируют функциональную недостаточность печени.

СООЭ СОВЕТСКИХ

ОСЮВЛ

РЕСПУБЛИК

ОЮ 61) 3(59 А 61 В 10/00

Н АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3357009/28-13 (22) 13.10.81 (46) 15.12.84. Бюл. Р 46 (72) Н.П.Одушко и Н.Ф.Муляр (71) Иркутский государственный медицинский институт (53) 616.07(088.8) (56) 1. Блюгер А.Ф. Структура и функция печени при вирусном гепатите.

Рига, 1964, с. 17 (аналог).

2. Оргель М.Я. Сочетанная газовая и тонкослойная хроматография липидов. в диагностике функциональной недостаточности печени.-"Вопросы медицинской химии", т. 36, У 4, 1980, с. 548-552

{прототип) . (54) (57) СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ФУНКЦИОНАЛЬНОЙ НЕДОСТАТОЧНОСТИ ПЕЧЕНИ ПРИ

ВИРУСНОМ ГЕПАТИТЕ путем исследования . холестериновых фракций сыворотки крови методом тонкослойной хроматографии, отличающийся тем, что, с целью упрощения и снижения травматичности способа, на хроматограммах определяют уровень свободного холестерина и его эфира — холестероларахидоната и при повьппении уровня холестерина с одновременным снижением уровня его эфира относительно нормы диагностируют функциональную недостаточность печени. 3

10 2 граммах определяют уровень свободного холестерина и его эфира — холестероларахидоната и при повышении уровня холестерина с одновременным снижением уровня его эфира относи-. тельно нормы диагностируют функциональную недостаточность печени.

Предлагаемый способ осуществляют следующим образом.

0 5 мл сыворотки крови вносят

l в пробирку с притертой пробкой с 10 мл смеси хлороформ-метанол (2:1) и периодически перемешивают в течение

1 ч. Осадок отфильтровывают, а к фильтрату добавляют 0,2 объема дистиллированной воды, интенсивно встряхивают и оставляют в холодильнике до разделения смеси на две фазы

Верхний водно-метаноловый слой отсасывают и удаляют, а нижнюю хлороформную часть смеси переносят в коническую колбу и выпаривают в вакууме при подогревании не выше

40 С. Липидный остаток растворяют в

0,5 мл хлороформ-метаноловой смеси (2:1). Полученный липидный экстракт наносят на 20 мкл в виде узкой полоски на пластинку Silufol UV-254, отступя на 1,5 см от нижнего края.

Используют пластинки размером 15 см, которые резрезают на две части и на каждую из них наносят два образца липидов. После нанесения экстракта липидов, хроматографическую пластинку помещают в камеру с системой растворителей, насыщенную их парами.

Камерой для хроматографии может служить стеклянная банка с притертой крышкой. В качестве системы растворителей используют смесь н-гептан-толуол (80: 20) . После прохождения системы растворителей.до верхнего края, пластинку извлекают из хроматографической камеры, высушивают на воздухе и вновь помещают в камеру.

Процесс разделения повторяют, 5 раз.

На каждое разделение затрачивают около 20 мин. Затем хроматограммы проявляют опрыскиванием 107-ным спиртовым раствором фосфорномолибденовой кислоты и нагревают в сушильном шкафу при 80 С в течение нескольо ких минут до появления интенсивно окрашенных синих пятен на желтом фоне. На хроматограммах обнаруживают

6 пятен. Первое пятно соответствует сложным эфирам холестерина с насышенными жирными кислотами, второе

1 11289

Предложенный способ относится к медицине и может быть использован для оценки функционального состояния печени при вирусном гепатите.

Известно несколько сот способов для оценки функционального состояния печени, но считают, что важнейших функциональных проб печени лишь немногим более 30 И .

Известен способ диагностики функ- 10 циональной недостаточности печени по определению холестериновых фракций в сыворотке крови хроматографическим методом.

Сущность этого способа заключается в том, что липиды, экстрагированные из сыворотки крови, разделяют на стеклянных пластинках в слое кремниевой кислоты в системе гексан

-эфир-уксусная кислота (90:10:1). 20

После проявления фракции липидов из хроматаграмм переносят в парные ряды пробирок, один из которых используют для прямого метанолиза и последующего. гаэохроматографического анализа, à 25 другой для количественной йодометрии и определения процентного соотношения фракций липидов по йоду. О функциональной недостаточности печени при остром холецистите, инфекционном З0 мононуклеозе, раке, циррозе печени и вирусном гепатите судят по процентному соотношению ряда жирных кислот, холестерина и других неидентифицированных фракций стеринов (2), 35

Однако известный способ трудоемок, включает ряд промежуточных этапов, таких как приготовление пластин для тонкослойной хроматографии, перенос фракций липидов из храма- 40 тограмм в парные ряды пробирок, проведение метанолиза и количественной

° йодометрии, газохроматографический анализ и не обеспечивает быстрой оценки фун цианального состояния пе- 45 чени вследствии того, что длительно идет подготовка проб к анализу.

Кроме того, для анализа требуется от 1,5 до 2,5 мл крови.

Цель изобретения — упрощение и у) снижение травматичности способа. Поставленная цель достигается тем, что способ диагностики функциональной недостаточности печени при вирусном гепатите проводят путем у исследования холестериновых фракций сыворотки крови методом тонкослойной хроматографии, при этом на хромато1128910 4 холестеродолеату, третье — холестероллинолеату, четвертый - холестероларахидонату, пятое — сложным эфирам холестерина с С -С жирными кислотами и шестое (на старте) — свободному холестерину. Интенсивность окраски пятен изучаемых фракций на хроматограммах оценивают на денситометре типа ВИАН в отраженном свете. Полученные количественные данные при 10 деситометрии каждой фракции суммируют и их сумму принимают за 100Х а из полученной суммы высчитывают процентную концентрацию каждой фракции.

Пример 1. Больная А, 28 лет. 15

Поступила в инфекционную больницу на 5-й день болезни, 2-ой день желтухи с жалобами на общую слабость, боли в эпигастрии, изменение цвета мочи. 20

При поступлении общее состояние удовлетворительное, кожные покровы и видимые слизистые желтушны. В легцих и сердце без изменений. Пульс

80 ударов в минуту, ритмичен, 25

АД 115/60 мм рт.ст. Язык влажный, обложен серым налетом. Живот мягкий, болезненный при пальпации в области эпигастрии. Печень выступает из подреберья на 1,0 см. Селезенка З0 пальпируется в положении на боку.

Во время пребывания в стационаре явления интоксикации держались 3 дня.

Определяют в крови больного процентное содержание холестероларахидо-g5 ната и свободного холестерина (при поступлении, т.е. до лечения, на фоне лечения, перед выпиской и через .

10 дней после выписки иэ стационара), которые соответственно равны: холе- 40 стероларахидонат 10,20-11,6910,15-8 127, норма — 14,367., свободный холестерин 20,40-1-6,88, 88-18,40-30,73Х, норма — 18,83Х.

Диагноз: у больной †. функциональ- 45 ная недостаточност печени. Допол- . нительные исследованил подтвердили диагноз.

Пример 2. Больная Г, 30 лет.

Поступила в инфекционную больницу . 50 на 7 день болезни, 3"й день желтухи с жалобами на слабость, головную боль, тошноту, потемнение мочи.

При поступлении кожные покровы, видимые слизистые и еклеры глаз уме- 55 ренно желтушны. В легких и сердце . без,изменений. Пульс 78 уд/мин, АД 110/70 мм рт.ст. Язык влажный, обложен серым налетом. Живот мягкий, безболезненный. Печень выступает иэ подреберья на 2,5 см, болезненна при пальпации.

В стационаре явления интоксикации держались 10 дней.

Определяют в крови больной процентное содержание холестероларахидоната, и свободного холестерина (при поступлении, т.е. до лечения, на фоне лечения, перед выпиской и через 10 дней после выписки из стационара), которые соответственно равны: холестероларахидонат 4,3210,00-11,40-9,627, норма -14,367, свободный холестерин 42,98-24,8624,63-28,46Х, норма 18,83Х.

Кроме того, общий билирубин крови изменяется в динамике заболевания и составляет 148,8-37,6-18,8Е

20, 5 мкмоль/л, норма — 149 мк моль/л.

Диагноз: несмотря на нормальное содержание билирубина и трансаминаз в крови перед выпиской из стационара и через 10 дней после выписки нормализации уровня холестероларахидоната и свободного холестерина не происходит, что говорит о функциональной недостаточности печени.

Пример 3. Больная Х, 39 лет. Поступила q больницу на 10-ый. день болезни, 3-й день желтухи с жалобами на общую слабость, отсутствие аппетита, тошноту, однократную рвоту, головокружение.

При поступлении кожа, видимые слизистые и склеры глаз ярко желтушные. В легких беэ изменений. Пульс

84 уд/мин. АД 100/65 мм рт.ст. Язык густо обложен серым налетом. влажный.

Живот мягкий, печень выст;пает на

3 5 см из подреберья, болезненна при пальпации. Пальпируется селезенка.

К 12 дня болезни ьаросли явления интоксикации, нарушился сон, рвота усилилась до 3-х раз в день, наросла желтушность. Явления интоксикации в стационаре держались 14 дней.

У больной берут 0,1 мл крови.

Определяют в крови больной процентное содержание холестероларакидо-ната, и свободного холестерина (при поступлении, т.е. до лечения, на фоне лечения, перед выпиской и через

10 дней, после выписки из стационара), Ь которые соответственно равны: холестероларахинонат 7, 14-13, 18, 13,00-11 747, норма — 14,367, сво1128910

Составитель Н. Хрусталева

Редактор А. Ревин Техред 3,Палий Корректор О. Луговая

Заказ 9268/4 Тираж 687 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП "Патент", r. Ужгород, ул. Проектная, 4 бодный холестерин 50,00-19, 76-31, 75-28,473, норма - 18,833.

Кроме того, в динамике заболевания общий билирубин 205,2-70,1-22,2- 5

11 ° 9 мкмоль/л, норма — 14,9 мкм моль/л.

Диагноз: функциональная недостаточность печени.

Способ позволяет обеспечить более быструю и менее травматичную оценку функционального состояния печени при вирусном гепатите.