Способ разрушения бацилл для получения элементов клеток
Патент 1140462
Авторы
Классы МПК
Способ разрушения бацилл для получения элементов клеток
Иллюстрации
Реферат
СПОСОБ РАЗРУШЕНИЯ БАЦИЛЛ ДНЯ ПОЛУЧЕНИЯ ЭЛЕМЕНТОВ КЛЕТОК путёН обработки биомассы химическими веществами с последукяцим выделением элементов клеток, отличаю- : щ и и с я тем, что, с целью упрощения способа и максимального сохранения структуры клеточной оболочки, обработку биомассы осуществляют солевой средой а, сконцентрированной в 4-10 раз.
СОЮЗ СОВЕТСНИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ
РЕСПУБЛИК
09) (11) Ш4 С12N106
ГОСУДАРСТ8ЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР
IlO ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Н ABTOPCHOMV СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 3581612/28-13 (22) 12.01.83 (46) 07.05.86. Бюл. N- 17 (71) Ордена Трудового Красного Знамени научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. почетного академика Н.Ф.Гамалеи (72) А.Г.Сабельников и Б.Н.Ильяшенко (53) 576.8.093.1(088.8) (56) Bernhard К, Schrepf H.,Joebel W.
Bacteriocin and. antibiotic resistance plasmids in Bacillus cereus
and Bacillus subtilis. — J. BacterioloSX, 133 (2), р. 897-903, 1978. (54) (57) СПОСОБ РАЗРУШЕНИЯ БАЦИЛЛ
ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ ЭЛЕМЕНТОВ КЛЕТОК путей обработки биомассы химическими веществами с последующим выделением элементов клеток, о т л и ч а ю— щ н и с я тем, что, с целью упрощения способа и максимального сохранения структуры клеточной оболочки, обработку биомассы осуществляют солевой средой а, сконцентрированной в 4-10 раэ.
40462
Техред О.Гортвай
Корректор Л.Патай
Редактор О. Кузнецова
Тираж 490
ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий
113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д, 4/5
Заказ 2715/1
Подписное
Производственно-полиграфическое предприятие, г.ужгород, ул.Проектная, 4
1 11
Изобретение относится к микробиологии.
Целью изобретения является упрощение способа и максимальное сокращение структуры клеточной оболочки.
Способ осуществляется следующим образом.. Ночную (18 ч роста) культуру бациллярного штамма засевают в свежий мясопептонный бульон (MIIB) и выращивают при 37 С до конца логариф" мической фазы роста (3-3,5 ч), Клетки осаждают центрифугированием, отмывают однократно 0,85 -ным раствором NaCl и ресуспендируют в растворе, по составу соответствующем среде а, сконцентрированной в 4 раза. Инкубируют 3 ч при 37 С или ночь (18 ч) при комнатной температуре. О степени разрушения клеток судят по несколь- . ким критериям: по визуально наблюдаемому лизису; исследованию клеточной массы под микроскопом; определению количества жизнеспособных. клеток .в лизатах путем высева на мясопептонный агар (выражают в по .отношению к исходному количеству); спектрометрическому анализу супернатантов после осаждения клеток.
Пример 1. 2 мл 17-часовой культуры Bacillus cereus штамма GP7, переносят в 40 мл свежего МПБ. Выра" щивают со встряхиванием (150 об/мин)
3 ч при 37 С. Клетки осаждают центрифугированием при 5000 g, однократно отмывают 0,85 -ным раствором NaC1 и ресуспендируют в 1 мл среды а, имеющей состав на 1 л, r:
К НРОц 10,5
KH PO 4,5 (ИН„) 80„ 1
Цитрат натрия 2Н О 0,5
Смесь инкубируют 1 ч при 37 С. По всем исследованным параметрам лизис клеток не наблюдается.
Пример 2. 2 мл 20-часовой культуры штамм GP7 переносят в 40 мл
10 свежего ИПБ, затем выращивают и отмывают, как в примере 1. Клеточную массу ресуспендируют в 1 мл среды а (см. пример 1), сконцентрированной в 4 раза (обозначение à х 4) я инкубиру15 ют 1 ч при 37 С. После инкубации визуально наблюдают появление значительной вязкости, что свидетельствует о лизисе клеток. Исследование ли" затов под микроскопом показывает на20 личие пустых клеточных оболочек, что говорит о выходе в среду клеточного содержимого.
Определение количества жизнеспособных клеток в лизатах показывает, 25 что после инкубации в среде а х 4 степень выживаемости бацилл значительно снижена по сравнению с исходной. Количество разрушенных клеток составляет 83 .
30 Дополнительным свидетельством лизиса клеток являются данные спектрофотометрического анализа супернатантов после, осаждения: клеток. Анализ спектров поглощения указывает
4 на наличие в лизатах материала нукле5 отидного и белкового происхождения и, возможно, полисахаридов.