Способ определения таксономической принадлежности кальмаров

Способ определения таксономической принадлежности кальмаров

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

1. СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ТАКСОНОМИЧЕСКОЙ ПРИНАДЛЕЖНОСТИ КАЛЬМАРОВ по морфологии и каталитическим свойствам конститутивных ферментов гомогенатов тканей кальмаров, определяемым по кинетическим параметрам скорости гидролиза субстрата ферментами , отличающийся тем, что, с целью повьшения чувствительности и упрощения, после определения скорости гидролиза одной концентрации субстрата в реакционную среду вводят ингибитор, инкубируют и определяют остаточную активность конститутивных ферментов при той же концентрации субстрата, причем для определения таксономической принадлежности СЛ кальмара используют бимолекулярную константу ингибирования. 2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что в качестве конститутивных ферментов используют фосфотазу и холинэстеразу.

„,SU 1142Î 9

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧ Р.1ИХ РЕСПУБЛИН 4(я),А 0

«аОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ (21) 3605503/30-15 (22) 12.04.83 (46) 28.02.85. Б . В 8 (72) Л.М. Эпштейн, С.П. Шевцова, N.È. Касьяненко, Г.А. Шевцов, Е.Б. Майзель, Е.В. Розенгарт и А.П. Бресткин (71) Тихоокеанский научно-исследовательский институт рыбного хозяйства и океанографии (53) 594.5:639.27(088.8) (56) 1. Рычков Ю.Г. Особенности серологической дифференциации народов

Сибири. — "Вопросы антропологии", 1965, У 21, с. 18-.44.

2. Медников Б.М. Геносистематика и типология. — "Зоологический журнал", вып. 9, т. IV, 1974, с. 1301-1310.

3. Авторское свидетельство СССР

Ф 1 001898, кл А 01 К 61/00, 1980 ° (54) (57) 1. СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ТАКСОНОМИЧЕСКРЙ ПРИНАДЛЕЖНОСТИ КАЛЬМАРОВ по морфологии и каталитическим свойствам конститутивных ферментов гомогенатов тканей кальмаров, определяемым по кинетическим параметрам скорости гидролиза субстрата ферментами, отличающийся тем, что, с целью повышения чувствительности и упрощения, после определения скорости гидролиза пфи одной концентрации субстрата в реакционную среду вводят ингибитор, инкубируют и опре-, деляют остаточную активность конститутивных ферментов при той же концентрации субстрата, причем для определения таксономической принадлежности кальмара используют бимолекулярную константу ингибирования.

2. Способ по п. 1, о т л и ч а юшийся тем, что в качестве конститутивных ферментов используют фосфотазу и холинэстеразу.

1142079

Недостатками известного метода являются относительная сложность и некоторая длительность„ так как для построения кривых гидролиза субстратной специфичности необходимо измерять активность (скорость) не при одной высокой, а при малых, средних и больших величинах концентраций (5-10 то;ек) субстрата, что в свою очередь, требует большого расхода реактивов. Кроме того, большое количество измерений и вычислений несколько снижает точность и воспроизводимость метода.

Цель изобретения — повышение чувствительности и упрощение способа;

Поставленная цель достигается тем, что после определения скорости гидролиза при одной концентрации

Изобретение относится к зоологии и морскому промыслу, а точнее к рациональному рыболовству и воспроизводству вида, в частности к уточнению систематики.малюсков с помощью биохимии.

Известны биохимические методы уточнения таксономии, например серологический метод Г13, основанный на связывании антигенных белков с анти- 10 телами, и геносистематичесиий 52 ), основанный на изучении свойств отдельных генопродуктов — последовательности аминокислотных остатков в белках и нуклеотидах в PHK. l5

Недостатками указанных способов являются длительность и сложность ,определения таксона.

Наиболее близок к предлагаемому по технической сущности энзимологический метод (3 J использующий для уточнения систематики субстратную специфичность ферментов. Согласно этому в качестве сравниваемого биохимического признака изучается суб-.. стратная специфичность ферментов класса гидролаз, действующих на сложные эфирные связи (КФ 3.1), и сопоставляются кинетические параметры энзиматического гидролиза. Кроме того, предусмотрено использование возможности взаимодействия высокоспецифических субстратов с фосфатазой (КВ 3.1.3.2) и холиэнэстеразой (КВ 3.1.1.7), т.е. с такими ферментами, каталитические свойства

35 которых не изменяются в процессе раз.вития особи (так называемые конститутивные ферменты). субстрата в реакционную среду вводят ингибитор, инкубируют и определяют остаточную активность конструктивных ферментов при той же концентрации субстрата, причем для определения таксономической принадлежности кальмара используют бимолекулярную константу скорости ингибирования.

Предлагаемый метод уточнения таксономии предусматривает взаимодействие высокоспецифичных ингибиторов с фосфатазой (КФ 3.1.3.2) и холинэстеразой (КФ 3.1.1.7).

Высокая сп цифичность предопределяет прежде всего самый минимальный расход ингибиторов, так как их ингибирующая деятельность на активность ферментор проявляется при очень низких концентрациях (10 моль и ниже).

Более того, для уточнения таксономической близости особей необходимо произвести только два измерения: измерение начальной активности Vä (без ингибитора); измерение остаточной активности фермента после ингибирования V<. Высокая чувствительность ингибитора, т.е. действие его в очень низких концентрациях, является основой высокой-воспроизводимости метода.

I

Предлагаемый способ осуществляется следующим о,"разом.

Готовят гомогенат соответствующей ткани для исследования: гомогенат оптических ганглиев кальмаров для определения свойств холинэстераз и фосфатаз или их гонад для изучения свойств фосфатаз. Готовят растворы соответствующих субстратов для каждого из ферментов: холиновые эфиры уксусной, пропионовой, масляной и т.д. кислот для холинэстераз;. фосфорные эфиры ортофосфорной кислоты для фосфатаз. Определяют начальную скорость гидролиза 7 этих субстратов под действием ферментов и скорость гидролиза V< этих субстратов после взаимодействия фермента с ингибитором в течение 2 мин. Рассчитывают бимолекулярную константу взаимодействия фермента с ингибитором К;,. Путем сравнения полученных данных, определяющих биохимический признак особи, уточняется таксономический ранг особи.

Гомогенаты тканей имеют различную концентрацию — от самой большой

100 мг/мл при низкой активности в

11420

3 ткани до самой низкой 10 мг/мл при высокой активности. Наиболее важным для данной стадии является приготовление при помощи гомогенизатора тонкодисперсной равномерной взвеси.

Раствор соответствующих субстратов готовят в любой концентрации (в пределах от 1 10- до 1 ° 10 M) например 1-10- M, при этой концентрации измеряют как Ч, так и V, 10

Метод определения холинэстеразной активности (скорости гидролиза 7о) основан на потенциометрическом титровании щелочью кислот, образующихся в ходе ферментативного гидролиза суб- 15 стратов: уксусной — из ацетилхолина, пропионовой иэ пропионилхолина, масляной из бутирилхолина и т-.д.

Метод определения фосфатазной активности основан на измерении образу- оп ющихся при ферментативном гидролизе эфиров ортофосфорной кислоты фосфатов, которые при взаимодействии с молибдатом аммония образуют соли гетерополикислот, восстанавливающихся амидолом до молибденовой сини.

На основе полученных данных К;, рассчитывают по формуле:

2,3 < о, < опытное

tfI3 V D1 "контроль

Бимолекулярная константа К;, является характерным биохимическим при- З5 знаком особи.

Предлагаемый метод позволяет определять более низкий токсономический ранг, вплоть до подвида, кроме того, упрощается способ определения ® и сокращается время получения ре1зультатов анализа в связи с тем, что, во-первых, измерение проводится только при одной высокой концентрации субстрата, во-вторых, для вычисле- 45 ния величины К не требуется вычисления величины V, поскольку в авязи с тем,.что она входит как в числитель, так и в знаменатель формулы, можно подставить значения скорости 56 реакции, измеренные в секундах, как

/ для н р (контроль) так и для опыта после ингибирования (i пь1 „о 1,, Для способа также характерны высокая воспроизводимость результатов, так 55 как значительно сокращены длительности подготовки эксперимента, приготовление лишь одной выбранной концентрации раствора субстрата, определенной концентрации ингибиторов, соли, гомогената фермента. Обработка результатов состоит лишь в определении К-. Метод обеспечивает повышеЯ ние точности определения, так как свойства изучают при одновременной реакции высокоспецифичных субстратов и высокоизбирательных ингибиторов.

Пример 1. Уточнение таксономии с помощью фосфатазы ганглиев.

Активность фосфатазы определяли по модифицированному методу Боданского, согласно которому образующиеся при гидролизе эфиров ортофосфорной кислоты фосфаты при взаимодействии с молибдатом аммония образуют соли гетерополикислот, восстанавливающиеся амидолом до молибденовой сини, обладающей ярко-синей окраской с максимумом поглощения в зоне 750 нм.

Оптическую плотность молибденовой сини определяли с помощью фотоэлектроколориметра ФЭК-60, светофильтр

Ф 7 или с помощью спектрофотометра

СФ-26 при- длине волны 750 нм. Калибровочную кривую строили, используя в качестве источника фосфата водный раствор КН РО+. Исходный раствор содержал в 1 мл 50 мкг P. Количество фосфата в пробе изменяли от Z,5 до

4,5 мкг. 3а единицу активности принято такое количество фермента, которое образует при гидролизе соответствующего субстрата за 1 ч при 30

Ь

1 мкмоль P.

Ткань гомогенизировали в 9 объемах 0,1 М хлористого калия; конечная концентрация ткани с= 100 мг/мл.

Активность определяли при рН 3,5, которое поддерживали буфером 0,2 М глицин — 0,2 МНС, содержащимсдля стабилизации фермента 1 10- М раствор хлористого магния. В качестве субстрата использовали алифатический эфир ортофосфорнойокислоты о -глицерофосфат.

Исходный раствор субстрата — elглицерофосфата (3 -10 " M) готовили на воде (с последующим доведением рН раствора до, соответствующего для опыта значения 0,2 М раствором НС1) .

Для каждого опыта готовили 3 пробы: первая (первый контроль) служит контролем на самопроиэводный (спонтанный) гидролиз используемого субстрата — к 0,5 мл буфера добавляли

0,5 мл воды; вторая (вторичный конт1142079 роль) является контролем на содержание фосфора в исходной ткани — к

0,5 мл буфера добавляли 0,5 мл Н 0 и 0,5 мл гомогената, третья (рабочая) — к 0,5 мл буфера добавляли 5

0,5 мл гомогената. Активность измеряли при концентрации субстрата 3 10 2 М .

Начальную скорость гидролиэа Ч„ рассчитывали по формуле:

4 содержание P мк-моль Р о 2.0,5;31 ч мл

4 — число,- которое по- 4О казывает какую часть бт общей смеси брали на фотометрирование после центрифугировании 4> (0,5 мл из 2 мл смеси); где содержание P — — — — — — - количество фосфора

31 неорганического, мк моль, образующе- о гося в процессе ферментативной реакции {рабочая проба) за вычетом суммы количества P первого и второго контроля;

2 — время инкубации,ч;

Пробы инкубировали 15 мин при 30 в термостате, а затем через равные промежутки времени (1 мин) в первый контроль и рабочую пробу добавляли

0,5 мл субстрата, предварительно нагретого до 30, и инкубировали далее все три пробы в течение 2 ч,после 15 чего реакцию останавливали введением в каждую пробу последовательно по

0,5 мл 30%-ной трихлоруксусной кислоты через те же промежутки времени (1 мин). Смесь центрифугировали на 20 настольной центрифуге ЦУМ-2 при комнатной температуре в течение 15 мин при n = 5000 об/мин, после чего к

0,5 мл надосадочной жидкости добавляли 3,5 мл воды и 0,6 мл 2,5 -ного 25 раствора молибдата аммония в 6 н.

Н2$0 и 0,4 мл 0,5 .-ного раствора амидола в 5 -ном растворе Na>$0>.

Амидол,добавляли в каждую пробу через равные промежутки времени(1 мин) Зр с тем, чтобы через это же .время после инкубации в течение 20 мин измерять оптическую плотность.

0,5 — количество внесенного гомогената,мл.

При работе с ингибитором — диизопропилфторфосфатом (ДФФ) при концентрации 8 10 М в первую пробу к

0 5 мл буфера добавляли 0,5 мл воды и 0,2 мл ингибитора; во вторую пробу к 0,5 мл буфера 0,3 мл воды;

0,5 мл гомогената и 0,2 мл ингибитора; в третью к 0 5 мл буфера 0 5 мл гомогената и 0,2 мл ингибитора.

После инкубации в течение 15 мин через равные промежутки времени в первую пробу (первый контроль) .и в третью пробу (рабочую) добавляли

0,3 мл субстрата. Дальнейшая методика работы осталась прежней.

Скорость гидролиза V. рассчитыва:1 ли аналогично Ч, причем содержание

P — - это количество неорганического фосфора (MK.моль), образовавшегося в процессе ферментативной реакции после взаимодействия ингибитора с ферментом.

Бимолекулярулт константу К; рассчитывали по формуле:

Таблица1

Вид кальмара

К6

Командорский Berryteuthis magister

Новозеландский Nototodarus sloani sl

3,4 -10

О, 7 -10Э

П р и м е ч а н и е. Субстрат— е -глицерофосфат, ингибитор ДФФ.

23 Чо

К- = - - lg

= ttrj v где 2,3 — коэффициент перехода от натурального логарифма к десятичному; — время инкубации (взаимоде :ствие ингибитора с ферментом, мин);

)I) — концентрация ингибитора, при которой наступает

50 -ное торможение, М;

V — начальная скорость гидроО лиза;

V — скорость гидролиза после

1 взаимодействия ингибитора с ферментом..

Бимолекулярная константа скорости К ингибирования активности фоси фатазы ганглиев командорского и новозеландского кальмаров приведана в табл.1 °. 1142079

Таблица 2

К,-, Вид кальмара

3,1; 10З 1 4,.10 20 из 7из

V = — —-Э

Пример 2. Уточнение таксономии с помощью фосфатазы гонад.

Субстратнуь специфично г. фосфатазы гонад определяли аналогично примеру 1.

Бимолекулярная константа скорости

К;, ингибирования активности фосфа-! тазы гонад командорского и новозеt ландского кальмаров приведена в табл. 2.

Командорский Berryteuthis

magistez

Новозеландский Nototodarus sloani sl

П р и м е ч а н и е. Субстрат— фенилфосфат, ингибитор ДФФ

Пример 3. Уточнение токсоно-25 мии кальмаров кинетико-энзимологическим методом путем изучения ингибиторной специфичности холинэстеразы оптических ганглиев Ommostrephes

bartrami семейства Ommastrephidae. З

Холинэстеразную активность определяли методом потенциометрического титрования (Яковлев, 1965) при рН

7,7 щелочью кислот, образующихся при ферментативном гидролизе следующих холиновых эфиров (субстратов): иоди35 ды ацетилхолина (АХ вЂ”

СНЗС(0) ОСН СН 6(СН ) у бутирилхолина (БуХ)-С СН2СН2С(0)ОСН СН И(СН ) бромид ацетил-у-метилхолина (МеХ)—

-СНзС(0)ОСН(СН )СН И(СНз)

Активность фермента при отсутствии ингибитора определяли в единицах начальной скорости V, для чего в стеклянную (t = 25 ), подключенную к термостату термостатируемую кювету, вносили последовательно 1 мл 7..10 "М фосфатного буферного раствора с рН

7,7.; 0,2 мл гомогената ткани оптичес-S0 кого ганглия; 1 мл 1 М раствора хло-. ристого калия; определенное количество дистиллированной воды до общего объема пробы 10 мл с учетом добавляемого в последнюю очередь объема субстрата. Смесь перемешивали магнитной мешалкой, проверяли рН реакционной смеси (не ниже 7,7), после чего вносили субстрат, количество которого рассчитывали таким образом, чтобы его конечная концентрация была равна принятой для опыта. Образующуюся в ходе ферментативного гидролиза карбоновую кислоту определяли титрованным раствором щелочи, которую добавляли из откалиброванной (1 см 46 мкм) бюретки небольшими порциями с таким расчетом, чтобы отклонения стрелки на шкале не превышали 7,.5+ 0,1 рН. Контроль рН осуществляли при помощи стеклянного и хлорсеребряного электродов и проточного электрода сравнения, подключенных к высокочувствительному потенциометру типа рН 262, рН 673, рН 340.

Величину активности фермента в единицах начальной скорости реакции рассчитывали по формуле где N — нормальность раствора щелочи, мкмоль/мл;

U„ - количество раствора щелочи, затраченной на титрование, млю с — продолжительность титрова- . ния мин.

Активность фермента в присутствии ингибитора определяли в единицах скорости реакции (Ч ), для чего в стеклянную термостатйруемую кювету вносили последовательно 1 мл 7 -10 И фосфатный буферный раствор с рН 7,7;

0,2 мл гомогената ткани оптического ганглия; 1 мл 1 М раствора хлористого калия; определенное количество дистиллированной воды до общего объема пробы 10 мл с учетом добавляемого в,последнюю очередь объема субстрата; смесь перемешивали магнитной мешалкой, проверяли рН реакционной смеси (не ниже 7,6),.затем вносили фосфорорганический ингибитор, объем раствора которого подбирали экспериментально таким образом, чтобы -его конечная концентрация в робе без субстрата вызывала точно 50Х-ное снижение Ч за строго определенное и измеряемое секундомером время инкубации (например, 2 мин) фермента с ФОИ.

Субстрат вносили в тот момент, когда время инкубации было равно заданному для опыта. Количество субстрата, должно быть равным количеству субстрата в контрольном опыте (по оп2079

1О

0-Этил-8-(3-метилбутил)-метилтиофосфонат (общесоюзный шифр ЛГ-62) 114

Сн

31

Р

3 с Н60 5- сн — СН вЂ” СН

2.6 2 2 9

0 -(1-Метил-2, 2-диме тилпропил) -S(2-этилмеркаптоэтил метилтиофосфонат (общесоюзный шифр ГА-102)

Г г0. (СН9) C С" 0 P -б-СН вЂ” СН -5 С H ! 2 2 2 9 снз снз

20 где V и Т вЂ” скорость холинэстеразо к

25 ного гидролиза субстратов без добавления ФОИ, соответственно мк моль/мин и с;

V и — скорость,холинэстеразt ат

ЗО ного гидролиза субстра- О тов после инкубации фермента с ФОИ соответственно мк моль/мин и с;

)I j — концентрация ингибито- .35 ра в пробе, М; — время инкубацин фермента с ФСИ, мин.

В качестве специфических ингибиторов использовали следующие фосфор- 40 органические соединения:

Диизопропилфторфосфат(ДФФ) -(СН. ) СНО

P (CH3)2CH0 F 45

Сульфометилат-0-этил-S-(2-этилметилсульфоний этил)-метилтиофосфата (общесоюзный шифр Гд-42) S0 ределению Ч или Г„) . Образующуюся в ходе ферментативной реакции карбоновую кислоту определяли титрованием щелочью как и в контрольном опыте.

Величину остаточной активности фермента в единицах скорости реакции или рассчитывали по формуле V

Ии9 Чиз

= †††- или измеряли в секундах

t д д „ое — время образования такого количества карбоновой кислоты из холинового эфира после взаимодействия фермента с ФОИ, которое оттитровывается одним сантиметром микробюретки.

Бимолекулярную константу (К;,) скорости взаимодействия фермента с ФОИ рассчитывали по формуле (Яковлев, 1965) для К- псевдомономолекулярной

íu реакции:

К

2 3 .Ve 2 3 "оп Ц Ig V tfI н60 р s-сн -cH -з-с н,50 сн, 25 Ф 3 снэ

0-н.Бутил-S-(2-этилмеркаптоэтил)метилтиофосфонат (общесоюзный шифр

ГА-59) С+Н О 0

4 9 ry

Р

СНЭ S СН СН 5 С2Н5

В качестве примера приведены данные по кальмару Ommastrephes bartrami из четырех частей. ареала: Южной

Атлантики, Большого Австралийского залива (БАЗ) юга Тихого океана, Северной Атлантики и северо-западной части Тихого океана.

Морфологические различия между северо- и южноатлатическими особями невелики и обнаружены в относительных размерахсперматофоров,а также в с составе паразитофауны. Однако они отно-, сятся к числу безразличных признаков и таксономического значениянеимеют.

На начальном этапе работ быпо показано очень важное свойство К;,, а именно: величина К;, для холинэстеразы не зави ит от физиологического состояния ocoE. .:: ни от пола, ни от стадии зрелости, так как сравнение

К;, всех групп образцов кальмара одного ареала (самок и самцов, I-IV стадий зрелости) не дало достоверных различий с вероятностью р = 75X. Эти . факты свидетельствуют в пользу конститутивности фермента (Ленинджер, 1975) и позволяют использовать величину К;, как биохимический признак сходства и различия особей.

Аналогичным образом было показано, что величина К;, холинэстеразы оптических ганглиев кальмаров Бартрама из"

Южной Атлантики и БАЗ юга Тихого океана не имеют различий в К;, с вероятностью р = 757., что позволяет сделать заключение о единой южной форме кальмаров данного вида О.bartrami.

Видимо, кальмары с течением проникают из Южной Атлантики в Индийский океан, а затем в БАЗ юга Тихого океана, который может слуяцлть местом нагула особей. По мере роста и созревания кальмары вновь возвращаются в

Индийский океан для размножения.

1142079 12 кальма- они приведены в единой граюга Ти- фе под названием "Малые фор" в табл.3 мы".

Так как величины К ров hydra Атлантики и БАЗ.Ю хого океана тождественны, ТаблицаЗ

Бимолекулярные константы (К-) М "мнн " скорости взаимодействия фосфор6 органических ингибиторов с холинэстеразой оптических ганглиев кальмаров Бартрама из различных частей ареала

Северо-западная часть Тихого

Северная

Атлантика

ФОИ

Субстрат океана

7,5. 10

3,5 10

1,1 ° 10

ДФФ

ЛГ-62

Гд-42

ГА-59

ГА-102

4,1-10

БуХ

ЛГ-62

Гд-42

ГА-59

ГА-102

МеХ

ЛГ-62

Гд-42

ГА-59

ГА-102

4,9. 10

Как показывают критерии различия (табл. 4) другие ингибиторы, например

ЛГ-62 и ГА-59, также дают различные величины К для холинэстераз кальмаров разных форм (для Южной и Северной

Атлантики с ГА-59 по бутирилхолину и с ЛГ-62 по ацетилхолину; для Khr.— ных форм и северо-западной части

Тихого океана с ЛГ-62 по бутирилхо1лину; для северо-западной части Ти-. хого океана и Северной Атлантики с

ЛГ-62 и ГА-59 по бутирилхолину) °

4,3 10

З,9 1О

4,4 1о

4,2 ° 10

3,1 10

4,2 ° 10

4,3.10

5, 2.10

1 э 1

4,8 .106

Сравнение величины К- для кальман ров четырех частей ареала, определен,ной по пяти ингибиторам и трем субстратам, показало, что уже один ингиби- о тор ДФФ дает очень большие различия.

Так например, по АХ К;, для южных форм намного вьппе (в 2,3 раза) К;, для

Севера Атлантики и еще вьппе (в 10 раз)

К;, северо-западной части Тихого океа-М на. Таким образом, налицо явное биохимическое различие всех .трех форм кальмаров.

7 104

4,6 10

1,4 .10

3,3 10

4,6-104

2,1 ° 10

8,3 ° 10

4,7..10

1,3 101

З,З.10

2,7 10

6,2 ° 10

1,2.10

4,4.10 г

5,5.104

1,8. 10

5.,7 10

1;5 10

3,3 ° 10

4,5 ° 104

1,7 101

5,Ç 10

4,5 .10

1,4.10

4,6 ° 10

6,6 10"

5,4.101

7,108

5,4..10

4,7 ° 10

1142079

Таблица4

Критерии различия при сравнении холинэстеразы ткани оптических ганглиев кальмаров трех различных районов ареала

Район

ФОИ

БуХ

МеХ

3,2

Южные формы и Северная Атлантика

3,3

2,9

° ЛГ-62

2,9

1,8

Гд-42

1,2

it0

ГА-59

ГА-102

0,9

3,3

0,9

1,2

0,9

Южные формы и северозападная часть Тихого океана

6,4

1,0

3,3

ЛГ-62

2,9

Гд-42

1,3

0,9

1,0

ГА-59

ГА-102

1,0

1,0

1,3

Северо-западная часть

Тихого океана и Северная Атлантика

4,9

3,0

2,9

1,2

ЛГ-62

3,0

1,0

Гд-42

1„0

1,0

ГА-59 .

ГА-102

1,0

3,3

1,3

1,0

Таким образом, кинетико-энзимологический метод исследования ингибиторных свойств холинзстеразы кальма- . ров. Бартрама из четырех частей ареала (севера Атлантики, северо-западной части Тихого, БАЗ юга Тихого и юга Атлантического океанов) пока-.=

45 зал, что совокупности особей, населяющих разные четыре части ареала,, представляют собой три подвида, т.е. три географические формы, обладающие генетически закрепленными морфо-физио50 логическими особенностями, в том числе и стабильными различиями струк турных характеристик функциональных медиаторных систем.

С помощью предлагаемого способа уточнено как систематическое положение командорского Serryteuthis

magister и новозеландского ИойоСоdarus sloani з1. кальмаров Ommastrep".hes bartrami из четырех частей аре- . ала (Севера Атлантического, северозападной части Тихого, БАЗ юга Тихого и юга Атлантического океанов).

Сравнение бимолекулярных констант К.11 определенно показало, что совокуп ность особей О.bartrami, населяющих эти разные четыре части ареала, представляют собой три подвида, следова- тельно, они не могут быть взаимозаменяемы при промышленном рыболовстве.

Этот факт следует учитывать для рационального ведения промысла.

Таким образом, результаты работ имеют практическое значение для правильного рационального воспроизводства вида.

Научное значение метода состоит в том, что он дает возможность правильно построить и уточнить систематику головоногих моллюсков.