Среда для разбавления и замораживания спермы хряков
Патент 1143413
Авторы
Классы МПК
Среда для разбавления и замораживания спермы хряков
Иллюстрации
Реферат
1. СРЕДА ДЛЯ РАЗБАВЛЕНИЯ И ЗАМОРАЖИВАНИЯ СПЕРМЫ ХРЯКОВ, включающая источник углерода - глюкозу, цитрат натрия 5,5-водный, этилендиаминтетраацетат двунатриевый двуводный , трис(оксиметил)аминометан, сульфат аммония, глицерин и липидньй компонент , отличающаяся тем, что, с целью лучшего сохранения выживаемости и оплодотворяющей способности сперматозоидов при замораживании , в качестве липидного компонента среда содержит водный экстракт подсолнечного масла, а в качестве источника углерода дополнительно содержит сорбит при следукяцем соотношении компонентов, мас.%: Сорбит2,5-3,5 Глюкоза0,6-0,8 Цитрат натрия 5,5-водный 0,2-0,3 Сульфат аммония 0,2-0,3 Этилендиаминтетраацетат двунатриевый двуводный 0,3-0,4 Трис(оксиметил) аминометан 0,04-0,06 (Л Глицерин 3,0-4,0 Водный экстракт подсолнечного маслаДо 100 2. Среда по п. 1, отличающаяся тем, что водный экстракт подсолнечного масла содержит подсол с нечное масло и воду в соотношении 0,4-0,6:1. iu
СОЮЗ СОВЕТСКИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ
РЕСПУБЛИК (39) (Н) 4(s)) А, 61 D 7/02
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Н ABTOPCHOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР
ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ (21) 3676199/30 — 15 (22) 27.09.83 (46) 07.03.85. Бюл. У 9 (72) В.А.Наук и А.И.Гуськов (71) Институт зоологии и физиологии
АН Молдавской ССР (53) 636.082.453.5(088.8) (56) 1. Авторское свидетельство СССР
N 549148, кл. А 61 D 7/02, 1977.
2. Авторское свидетельство СССР
У 626773, кл. A 61 D 7/02, 1978.
3. Кононов В.П., Голышев Н.А., Хачатуридзе Э.А. Среда для замораживания спермы хряков. — "Свиноводство",1975, Р 11, с. 25-26 (прототип). (54)(57) 1. СРЕДА ДЛЯ РАЗБАВЛЕНИЯ .
И ЗАМОРАЖИВАНИЯ СПЕРМЫ ХРЯКОВ, включающая источник углерода — глюкозу, цитрат натрия 5,5-водный, этилендиаминтетраацетат двунатриевый двуводный, трис(оксиметил)аминометан, сульфат аммония, глицерин и липидный компонент, отличающаяся тем, что, с целью лучшего сохранения выживаемости и оплодотворяющей способности сперматозоидов при замораживании, в качестве липидного компонента среда содержит водный экс" тракт подсолнечного масла, а в качестве источника углерода дополнительно содержит сорбит при следующем соотношении компонентов, мас.X:
Сорбит 2,5-3,5
Глюкоза 0,6-0,8
Цитрат натрия
5,5-водный 0,2-0,3
Сульфат аммония 0,2-0,3
Этилендиаминтетраацетат двунатриевый двуводный 0,3-0,4
Трис(оксиметил) аминометан 0,04-0,06
Глицерин 3,0-4,0
Водный экстракт подсолнечного масла До 100
2. Среда по. п. 1, о т л и ч а ющ а я с я тем, что водный экстракт подсолнечного масла содержит подсолнечное масло и воду в соотношении
0,4-0,6:1.
1143413
Изобретение относится к искусственному осеменению сельскохозяйственных животных, в частности к синтетическим средам для разбавления и замораживания семени преимущественно хряков.
Известны среды для разбавления и замораживания семени животных, включающие дисахара„ глюкозу, окись магния, окись кальция, этилендиамин- 10 тетраацетат двунатриевый двуводный, лимоннокислый аммоний, глицерин, желток куриного яйца и воду (3) .
Недостатком таких сред является отсутствие антиоксидантов, предотвра-15 щающих развитие в сперматозоидах перекисного окисления липидов.
Известна также среда для разбавления и замораживания семени сельскозозяйственных животных, например 2п хряков, содержащая дисахарид, моносахарид, этилендиаминтетраацетат двунатриевый двуводный, окись кальция, окись магния, аммоний лимоннокислый, глицерин, желток, воду и ан- 25 тиоксиданты (2,б-дибутил-п-крезол либо 2-(и 3)-бутил-4-гидрооксианизол) (2) .
Недостатком указанной среды является то, что входящие в ее состав антиоксиданты недостаточно эффективны для применения в составе криозащитных сред из-за нерастворимости в воде и дефицитности.
Известна среда для разбавления
5 и замораживания спермы хряков, включающая источник углерода — глюкозу, цитрат, натрия 5,5-водный, этилендиаминтетраацетат двунатриевый двуводный, трис(оксиметил)аминометан, суль. фат аммония, глицерин и липидный компонент j3) .
Недостатком известной среды является то, что она не обеспечивает устойчивость мембран сперматозоидов при замораживании и длительном хранении семени вследствие отрицательного влияния желтка, а также отсутствия природных антиоксидантов, предотвращающих вредные последствия перекисного окисления липидов. Желток к тому же является потенциальным носителем паталогии и отличается непостоянным химическим составом, что в свою очередь сказывается на стабильности получаемых результатов.
Морфофизиологические показатели замороженно-оттаянного семени в значительной степени связаны со ероком хранения яиц. Кроме того, желток куриного яйца повышает кислотность среды, что вызывает необходимость применения в составе сред дополнительных буферных систем и соответственно дополнительных затрат.
Введение в состав среды дефицитных дорогостоящих компонентов — желтка куриного яйца и фруктозы делает среду дорогой и труднодоступной.
Целью изобретения является улучшение сохранения выживаемости и оплодотворяющей способности сперматозоидов при замораживании..
0,3-0.,4
Поставленная цель достигается тем, что среда для разбавления и замораживания спермы хряков, включаю. щая источник углерода — глюкозу, цитрат натрия 5,5-водный, этилендиаминтетраацетат двунатриевый двуводный, трис(оксиметил) аминометан, сульфат аммония, глицерин и ли идный компонент, содержит в качестве липидного компонента водный экстракт подсолнечного масла, а в качестве источника углерода дополнительно содержит сорбит при следующем соотношении компонентов, мас. :
Сорбит 2, 5-3,5
Глюкоза 0,6-0,8
Цитрат натрия
5 5-водный 0,2-0,3
Сульфат аммония 0,2-0„3
Этилендиаминтетраацетат двунатриевый двуводный
Трис(оксиметил) аминометан 0,04-0„06
Глицерин 3,0-4„0
Водный экстракт подсолнечного масла До 100
Причем водный экстракт подсолнечного масла содержит подсолнечное масло и воду в соотношении 0,4-0,6:1.
Введение в среду водного экстракта подсолнечного масла вместо желтка куриного яйца обуславливает присутствие в растворе ненасыщенных жирных кислот (подсолнечное масло содержит
52-64 . линолевой и 2-5 линоленовой кислот)., которые способствуют увеличению выживаемости сперматозоидов и в конечном счете повышают оплодотворяющую способность семени.
Кроме того, экстракт подсолнечного масла богат природными антиоксиданта-.
13 4 кой зкономической эффективности.
Пример. Среду для разбавления и замораживания семени сельскохозяйственных животных готовят следующим образом.
В 1 л водного экстракта подсолнечного масла при комнатной температуре растворяют соответствующее количество компонентов среды (табл.1) для экспериментов взято 5 составов (сред). Затем среду доводят до температуры семени, предварительно выдержанного. в течение одного часа прн комнатной температуре, разбавляют семя средой в соотношении 1:1, выдерживают при +15оС в течение 4 ч, затем охлаждают до +4 С в течение о часа и замораживают при -100 С в пас рах жидкого азота на фторопластовой пластине, причем оттаивание ведут при +60 С.
11434
Таблица 1
Состав среды, мас.%
Трис(оксиметил) аминоГлице одный экстракт рин одсолнечного асла
ЭДТА натри евая соль
Цитрат Сульфат натрия аммония
Вариан Сорты бит
Глюко за метан
1 2,0 0,35 0,15 0,15 0,2 2,5, 2 2,5 0,6 0,2 0,2 0,3 3,0
3 3,0 0,7 0,25 0,25 0,35 3,5
4 3,5 0,8 0,3 0,3 0,4 4,0
5 4,0 1,0 0,4 -0,4 0,5 0,07 5,0
До 100
До 100
До 100
До 100
0,003
0,04
0,05
0,06
До 100
Для получения экстракта подсолнеч. ного масла последнее (ГОСТ 1129-73) 40 встряхивают в течение 1 ч с дистиллированной водой в соотношениях, представленных в табл. 2, затем центрифугируют при 1,5-2,0 тыс. об/мин в течение 15-20 мин, либо оставляют в сосуде экстрагирования на 1 ч для разделения слоев, верхний слой отсасывают водоструйным насосом, а нижний используют для приготовления син-
I тетической среды.
Т а б л и ц а 2
Продолжение табл. 2
Количество, ч.
0,5
0,6
Количество, ч.
0,25
0,4 ми (51 мг% альфа-токоферола) и следовательно, предотвращает вредные последствия перекисного окисления липи-: дов, что в свою очередь ведет к стабилизации мембран и сохранению целостности акросомы сперматозоидов при замораживании-оттаивании семени.
Снижение утечки ферментов в плазму . также ведет к повышению оплодотворяющей способности сперматозоидов ° 10
Эффективность от использования предлагаемой среды достигается за счет высоких криозащитных свойств ненасыщенных жирных кислот и присутствия природных антиоксидантов. 15
Сорбит значительно снижает себестоимость предлагаемой среды по сравнению с известной, что наряду со снижением себестоимости среды за счет применения водного экстракта подсол- 20 нечного масла помогает достичь высоПодсолнечного масла воды
Подсолнечного масла воды
Эффективность применения разработанной среды оценивают по подвижнос-. ти, выживаемости при 37 С, проценту
О интактных акросом и оплодотворяющей способности сперматозоидов после замораживания-оттаивания семени.
Результаты испытания пяти вариантов сред представлены в табл. 3 и 4.
K о
4с л ь
CO О
td
Ы
В 1
С0 И
Е
O л
t(A
Е
v о
2 о а
СГЪ л л ь
Н и л
Ch
О ) л
О1 л
О о
I л а0
С4 о
34с
Ф
С»4 л
C)
+I
Ю О
О i
С 4 л
Ю
+1
С4 л
Е (0
С 4 л ь
+I
СС л л
С»4 ь
+I ь л
Зф .! л
Ю н ь
00 т л ь Н
CO л О
I
tf о
И ж о
Е Р
О Е
Ф Ж ш о
С0 Ы
1 Р
1
1
3\»
»л
I Я
1 Р. о
1 3
I Е
1 Х
С0 ж
1
1
1
1
I IC 1 ! Ж !
I Rl
I а!
Е 1 о
1
1 Ж
1 и 1
1 е 1
1143413
00 ф
С»! О л л
+1 +1
00 л A
Ю
С 4 О
Ф
С»4 С 4 л л
Ю Cb .Н +1
Ю <Ч л л
СУ
МС
Ф .ф л ь ь, +1 -Н
O C0 л
С»4 С ) 4с
Ф б < 1 л ь ю н н ь а л а . л
Эф ф ъ4
00 43
»l ° I
+ I +I О О л A
ОЪ U1
Ifl СЧ
Ф
Ъ(М Ф
» (\
СЧ С 4 л л
Ю Ю
+! Н
Л Ю л л и
Ф ф ф
С» ) С»4 л ю ь
+ I .Н
СГ1 СЧ л л
СЧ ф ф л л ь ь н .н
Щ л л л Д л ь л
+I I
C0 I л О 1
Сл> 1 аь ьюь л л л ьюь ч l l.
Р Р Р л ю ф з(с 1 Ф зф
1143413 о
44
° Ф
° 1 со
«0
00 «О сч еч an и ° 1
+I Н +I о
СЧ «Ъ О
00 «О а
+! +1
1- о х v ъ Ф ф о !
» C«. о
«:!
«!« I а и
° о\
«ъ о ь я
-u е !« о а«
В и«««иЪ х е цvx
° ° сч (ч ФЧ я.я я а Я Я
«Л ЪО о
v 1
«I«1 р х ! х о
«о Р 1!
Ъ
С4 а ь
»« » ия° и» « л иь «а о о о
+! +I .Н
О Co an е а
«»I C»«а У ф! !
«« I х 1
z „l и о
t0 !
«Х о о х и
««Ъ «Ч
Р ° 1
° «! ФЧ
I а !
10 I
1-v!к
v o
«»Ъ
° ° ° а а а и а
«» а а а о е х 6 111 ,! о с l а
o g o о л о
° » а а
° «h! о
Ф! а 1 х I
1 а
1/Ъ
СЧ»2 ««Ъ а и\ ° 1
o o o о о а я
° Ф «бЪ
e o
A O а
CV «иЪ « иЪ х о
«: х х ае э ! 1-«Х Х!
1 ф
1 Х aal ! Р
1 Ф Ф ф ! 1 I I
О «
CV С»Ъ «»Ъ и ° и Я
o o
««Ъ а ь о о х Ф I л«» д!
Ю о
° n «/Ъ
° Си«СЧ
Ф Я Я о о о
МЪ «ГЪ
« 1 CLI
Ии а а о о о ф о
Фа) а а о о
00 о
««Ъ «О « » а ° 1 Я о о о о х
Ц о
И х
Х
5 о о ! х
I ! ! !
i ! о е
1 «:(М и«« оа1-! ао с« -х
1 1 а ц «. l
° аооф —: — "- пйхz х а
1 «а«
I х I ! -" — ! о
Я
1 1
1 Х !
3 !
1, an co о о о о о а а I1 а о о о о о
1143413
Составитель M.Áåëoóñoâà
Редактор О.Черниченко Техред С.Легеза Корректор В.Бутяга
Заказ 795/5 Тираж 722 Подписное
ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий
113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5
Филиал ППП "Патент", r.Óæãoðîä, ул.Проектная, 4
Оплодотворяемость свиноматок при использовании семени, замороженного в предлагаемом составе среды по сравнению с известным, повышается на 31,6Х, Ожидаемый экономический 5 э49ект от использования предлагаемой среды составляет Я 58 тыс. руб на 1000 свиноматок
Применяемые в предлагаемой среде компоненты являются дешевыми и неде4ицитными. Это позволяет получить дополнительный экономический э4@ект в сумме 245 руб. на 1000 свинбматок
sa счет сахаров и экстракта.
Применение водного экстракта подсолнечного масла в составе синтетических сред для разбавления и замо" раживания семени сельскохозяйственных животных позволяет заранее проверять пригодность больших партий масла к применению, что исключает нежелательные случайности в работе, имеющие место при использовании желтка куриного яйца.