Способ получения протаминов

Способ получения протаминов

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

СПОШВ ПОЛУЧЕНИЯ ПРОТАМИНОВ, включающий очистку гонад рыб от жира з . и соединительной ткани, гомогенизацию , фильтрование, центрифугирование, промывку осадка раствором Рингера и повторную гомогенизацию с последующим вьщелением целевого продукта, отличающийся тем, что, с целью сокращения времени получения и повышения чистоты целевого продукта , повторную гомогенизацию проводят в натрий-ацетатном буфере рН 4,6, содержащем 1,4 М натрия хлорида, полученный гомогенизат обрабатывают ультразвуком в течение 2-3 мин и выделяют целевой продукт сорбцией на катионообменнике. (О с

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИН

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ГЮ ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЦТИЙ

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ABTOPCHOhRV СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 3513380/28-13 (22) 12. 11. 82, (46) 15.03. 85. Бюл. Р 10 (72) В.К. Рыбин и Н.В. Какаров (71) Иосковский технологический институт мясной и молочной промышленности (53} 547.962.1(088.8) (56} 1. Авторское свидетельство СССР по заявке В 3339726/28-13, кл. А 61 Х 37/08, 1981.

2. Ando Т. Hashimoto С.3. Bi@chem.

45, 1958, р. 453. (54)(57) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРОТАИИНОВ включающий очистку гонад рыб от жира

„„Я0„„1144700 А

4(51) А 61 К 37 08 А 61 К 35 60 и соединительной ткани, гомогенизацию, фильтрование, центрнфугнрование, промывку осадка раствором Рингера и повторную гомогенизацию с последующим выделением целевого продукта, отличающийся тем, что, с целью сокращения времени получения и повышения чистоты целевого продукта, повторную гомогенизацию проводят в натрий-ацетатном буфере рН 4,6, содержащем 1,4 И натрия хлорида, полученный гомогенизат обрабатывают ультразвуком в течение 2-3 мин и выделяют целевой продукт сорбцией на катионообменнике.

1 1144

Изобретение относится к биохимии, может быть использовано для получения протаминов из гонад рыб.

Известен способ получения протаминов из молок рыб, заключающийся в экстракции сырья водным раствором неорганических кислот, сорбции протамина из полученного .экстракта при

+ рН 6-10 ионитом в БН форме, представляющем собой сополимер акрилонич10 рита и дивинилбензола с содержанием последнего t5-407 и десорбции целевого продукта раствором неорганической кислоты (1) .

Однако известный способ не обеспечивает получения полностью обессоленных белков.

Известен также способ получения протаминов, заключающийся в том, I что гонады рыб очищают от жира и соединительной ткани и гомогенизируют в растворе Рингера {0,657 NaC1, 0,014Х КС1, 0,012X CaCl» 0,012

NaBC0, 0,00!X NaH2 P0q ), фильтруют через хлопковую ткань и центрифугируют. Осадок промывают раствором

Рингера и повторно гомогенизируют в 2 М NaC1, К солевому раствору добавляют насыщенный раствор сульфата меди для осаждения ДНК. К раствору добавляют 1/8 M пикрата нат30 рия. Осадок пикрата протамина отделяют центрифугированием и растворяют в 67Х-ном водном ацетоне, Протамин-сульфат осаждают этиловым спиртом после добавления нескольких капель 2 М серной кислоты. Для очистки от пикрат-иона протамин-сульфат переосаждают несколько раз из водного раствора спиртом (2l.

Такой способ позволяет получить протамины в нативном виде, однако он трудоемок, требуется значительное время для получения протаминов; для получения пикрата натрия исполь- зуется взрывоопасная пикриновая кислота. Кроме того, необходимость очистки от избытка пикрата натрия приводит к большому расходу спирта.

Целью изобретения является сокращение времени и повышение чистоты целевого продукта.

Поставленная цель достигается тем, что согласно способу получения протаминов, включающему очистку гонад рыб от жира и соединительной ткани, гомогенизацию, фильтрование, центрифугирование, промывку осадка раствором Рингера и повторную гомо700 . 2 гениэацию с последующим выделением целевого продукта, повторную гомогенизацию проводят в натрий-ацетатном буфере рН 4,6, содержащем 1,4 М натрия хлорида, полученный гомогенизат обрабатывают ультразвуком в течение

2-3 мин и выделяют целевой продукт сорбцией на катионообменнике.

Пример 1. Гонады Acipenser

Aellatus очищают от жира н соединительной ткани, 5 r полученного материала гомогенизируют в 30 мл раствора Рингера и фильтруют через хлопковую ткань. Осадок промывают раствором Рингера и центрифугируют при

8000 об/мин в течение 10 мин, 100 мг полученного нуклеопротамина (сухой вес) повторно гомогенизируют в 10 мл

0,05 М натрий-ацетатного буфера рН 4,6, содержащеro 1,4 М NaC1, Полученный гомогенизат подвергают действию ультразвука на приборе УЗДН-1 с силой тока 0,4 А и рабочей частоте 22 кГц 2 мин и центрифугируют при 10000 об/мин в течение 20 мин.

Надосадочную жидкость наносят на колонку с катионообменником Амберлит

ЦГ-50 (1,5х5,0 см), уравновешенную

0,05 М натрий-ацетатным буфером рН 4,6, содержащим 1,4 M NaC1. Колонку промывают последовательно исходным буфером, 0,2 н.уксусной кислотой и водой. Протамины элюируют

0,1 н. НС1 и рН быстро доводят до

5-6 с помощью анионообменника Амберлит tPA-400 в ОН форме. Все операции проводят при 4 С. Полученные протамины высушивают лиофильно.

Аминокислотный состав выделенного протамина следующий, мольн.7:

Arg 51,8

Н18 9,4

Ly8 14,1

Glx 0,9

Thr 2,4

Ser 6,1

Pro 0,9

Gly 4,7

Ala 6,6

Len 2,8

Получилось 26 мг хлоргидрата протамина.

Пример 2. Осуществляют то же, что в примере 1, при этом время.озвучивания равняется 1 мин, сила тока 0,6 А. Получилось 20 мг хлоргидрата протамина.

Пример 3. Осуществляют то же, что в примере 1, при этом

1144700 4 переосаждение протаминов из водного раствора спиртом; полностью исключается использование взрывоопасной пикриновой кислоты и спирта.

Кроме того, сокращается время получения протаминов с 5-6 до 1,82,0 дней.

Составитель В. Брусиловская

Редактор Н. Швыдкая Техред Ж.Кастелевич

Корректор И. Эрдейи

Заказ 1018/4 Тираж 722

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Подписное

Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4

3 время озвучивания равняется З,мин, сила тока 0,8 А. Получилось 26 мг хлоргидрата протамина.

Пример 4. Осуществляют то же, что в примере 1, при этом время озвучивания равняется 5 мин, сила тока 0,8 А. Получилось 26 мг хлоргидрата протамина.

Таким образом, при осуществлении предлагаемого способа упрощается методика выделения протаминов, что позволяет исключить такие трудоемкие операции как осаждение ДНК сульфатом, меди осаждение протаминов пикратом натрия, разрушение пикрата протат мина водным ацетоном, многократное

Избирательное сорбирование на катионообменнике протаминов позволяет полностью освободиться от балластных белков и продуктов их деструкции и значительно повысить чистоту протаминов. Отсутствие операции переосаждения протаминов ведет к интенсификации процесса.