Способ определения дисперсного состава жировых эмульсий типа масло/вода

Способ определения дисперсного состава жировых эмульсий типа масло/вода

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ДИСПЕРСНОГО СОСТАВА ЖИРОВЫХ ЭМУЛЬСИЙ ТИПА МАСЛО/ВОДА, включающий помещение пробы эмульсии в консервирующую среду и ее оптическое микроскопирование ,о тличающийс я тем, что, с целью расширения диапазона измерений дисперсного состава, в качестве консервирующей среды используют отмытые эритроциты человека, смешивают их с 20%-ной эмульсией в соотношении

CO(03 СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИК

520 (19) ((1).

4()) G 01 N 15/04

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСНОМЪ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3659557/24-25 (22) 09.11.83 (46) 15.04.85. Бюл. У 14 (72) Б.И. Злькина, Н.В. Рябов, И.М. Думкин, Т.Ю. Коршунова, Ю.Г. Прозоров и В.И. Швец (71) Кировский научно-исследовательский институт гематологии и переливания крови (53) 543.275 (088.8) (56) 1. Авторское свидетельство СССР

9 828025, кл. С 01 N 15/04, t979

2. Заявка Франции У 2202593, кл, G 01 N 15/00, опублик. 1974 (прототип) . (54) (57) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ДИСПЕРСНОГО СОСТАВА ЖИРОВЫХ ЭМУЛЬСИИ

ТИПА МАСЛО/ВОДА, включающий помещение пробы эмульсии в консервирующую среду и ее оптическое микроскопирование,о т л и ч а ю щ и йс я тем, что, с целью расширения диапазона измерений дисперсиого состава, в качестве консервирующей среды используют отмытые эритроциты человека, смешивают их с 20Х-ной эмульсией в соотношении (3-4):1, после чего смесь наносят на предметное стекло, окрашивают суданом черным Б и определяют дисперсный состав частиц эмульсии сопоставлением их размеров с известным размером эритроцитов.

1150520

Цель изобретения - расширение диапазона измерений дисперсного

45 состава.

Поставленная цель достигается тем, что согласно способу определения дисперсного состава жировых эмульсий типа масло/вода, включающему по- 5О мещение пробы эмульсии в консервиРующую среду и ее оптическое микроскопирование, в качестве консервирующей среды используют отмытые эритроциты человека, смешивают их с 207-ной эмульсией в соотношении (3-4):1, после чего смесь наносят на предметное стекло, окрашивают

Изобретение относится к исследованиям физико-химических свойств веществ, а именно к определению дисперсного состава жировых эмульсий типа масло/вода, и может быть 5 использовано во всех случаях, когда чеобходимо оценить дисперсность в эмульсиях с размером частиц менее

7 мкм.

Известен седиментационный способ определения дисперсного состава эмульсий Р13.

Наиболее близким к предлагаемому по технической сущности является способ определения дисперсного 15 состава жировых эмульсий типа масло/вода, включающий помещение пробы в консервирующую среду и оптическое микроскопирование (2).

Недостатком известного способа является узкий диапазон измерений дисперсного состава. Размер частиц таких жировых эмульсий типа масло/вода различен, но значительно более 1 мкм. Известный способ за- 25 медляет движение частиц s консерванте (глицерине) и образец можно фо,тографировать,что позволяет установить размер частиц с минимальным диаметром 1-2 мкм (нижний предел). Зо

Однако несмотря на то, что движение частиц эмульсии замедляется, такая фиксация не является жесткой и мелкие частицы продолжают двигаться.

Кроме того, способ не обеспечивает никакого контрастирования бесцветных частиц эмульсии, в силу этого определение размеров мелких частиц затруднено. Используя этот способ, также невозможно создать в поле зре- 4g ния микроскопа монослой частиц эмульсии для изучения их дисперсного состава. суданом черным Б и определяют дисперсный состав частиц эмульсии сопоставлением их размеров с известным размером эритроцитов.

Установление размеров частиц эмульсии проводят следующим образом.

Эмульсию е. 207-ной концентрацией масляной фазы, размер частиц которой необходимо установить, приливают к отмытым эритроцитам человека. Подготовка отмытых эритроцитов. Берут

2-3 мл консервированной донорской крови любой группы и центрифугируют при 1500 об/мин в течение

15 мин. Плазму удаляют и полученные эритроциты трижды отмывают трехкратным объемом 0,9Å-ного раствора хлористого натрия. Режим центрифугирования при отмывании также

1500 об/мин, продолжительность

15 мин. 0,35 мл плотного осадка отмытых эритроцитов разбавляют 0,15 мл плазмы, полученной при первом центрифугировании крови, и затем добавляют 0,1 мл испытуемой эмульсии.

Смесь взбалтывают и из нее делают мазок на предметном стекле по общепринятой методике. Мазок фиксируют в парах формалина в течение 5 мин, окрашивают в течение 35-40 мин на липиды рабочим раствором судана черного Б. (Приготовление рабочего раствора судана черного Б, Смешивают 60 мл 0,3Ж-кого спиртового раствора краски судана черного Б и 40 мл раствора, приготовленного следующим образом: 16 г кристаллического фенола растворяют в 30 мл абсолютного спирта и смешивают со

100 мл 0,3 -ного водного раствора двухзамещенного фосфорнокислоro натрия). Мазок промывают в проточной воде в течение 3 мин и проводят докраску по Романовскому в течение

30 мин. (Эта операция не является обязательной. Азур — эозин окрашивает эритроциты в розовый цвет, делает мазок более контрастным,что облегчает его исследование и фотографирование). Готовый мазок анализируют с помощью оптического микроскопа МБИ-3 под иммерсией с увеличением 1х675. Все частицы эмульсии окрашены в черный цвет и хорошо различимы на фоне бледно-розовых эритроцитов, которые в данном случае служат объектом сравнейия. Таким образом, сосчитав не1150520

Количество отмытых

КоличестОписание мазка

Выводы во эмульсии, мл эритроцитов, мл

0,2

Частицы эмульсии полностью закрывают эритроцит, соприкасаясь друг с другом, образуют ложные агломераты

Анализ невозможен

0,25

0,1

На некоторых мазках наблюдаются ложные агломераты частиц эмульсии

Анализ не всегда достоверен

0,30

0,1

Эритроциты располагаются монослоем, не перекрывают друг друга.

Окрашенные частицы эмульсии отчетливо видны на фоне клеток

Соотношение обеспечивает достижение цели

0 35

0,40

0,1

На некоторых мазках наблюдается перекрывание границ клеток, что мешает оценке размера частиц

0,45

0,1

Анализ не достоверен

0 50

0,1

Анализ невозможен

Эритроциты полностью заполняют поле зрения, перекрывая друг друга, границы клеток расплывчаты обходимое число частиц на фоне эрит-роцитов и определив их размер относительно известного размера эритроцита (7 мкм), можно быстро, без сложного оборудования и достаточно точно определить дисперсионный состав эмульсии. Соотношение

Таким образом, из анализа табличных данных было выбрано оптимальное соотношение: 0,30-0,40 мл эритроцитов к 0,1 мл эмульсии. Оптимальное количество жировой эмульсии определяют из соображений расходования минимального количества образца эмульсии для приготовления мазка. Исходя из этого минимального (0,1 мл) количества эмульсии, проводили дальнейший подбор

" соотношения объема эритроцитов к объему эмульсии.

Причина выбора эритроцитов человека в качестве фона, подложки и объекта сравнения вызвана тем, что это очень удобный природный адсоробъемов отмытых эритроцитов и жировой эмульсии подобрано опытным путем.

Обоснование интервалов подобранных соотношений приведено в таблице. бент, который имеет точно установленный размер частиц (диаметр эритроцитов человека 7 мкм) и поэто.<у может служить объектом сравнения, 45 относительно которого расчитывается размео частиц эмульсии; эритроциты имеют средство к поверхностно активной оболочке эмульсии и поэтому фиксируют на себе ее частицы.

5О Это дает воэможность использовать эритроциты в качестве подложки,на которой окрашиваются частицы эмульсии, эритроцитная масса человекадоступный для любого медицинского

55 учреждения материал, тем более что для осуществления предлагаемого способа требуется минимальное ее количество.

1150520

Составитель Е. Карманова

Техред И.Асталош Корректор В. Бутяга

Редактор С. Лисина

Заказ 2133/32 Тираж 897 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП "Патент", r. Ужгород, ул. Проектная,4

Предлагаемый способ необходим, например, в области медицины при изготовлении жировых эмульсий для внутривенного введения. Одним из важнейших критериев годности таких препаратов является размер частиц дисперсной фазы, который не должен превышать 1 мкм. Предлагаемый метод позволяет контролировать качество жировых эмульсий при их изготовлении, в процессе хранения. Кроме того, расширяется диапазон возможностей оптического микроскопирования, так как частицы эмульсии фиксируются, контрастируются с помощью окрашивания и одновременно определяется их размер в сравнении с размером зритроцита °

Использование .предлагаемого способа позволяет применять метод оптического микроскопирования для определения дисперсного состава мелкодисперсных жировых эмульсий, что невозможно при использовании метода, 5 указанного в прототипе; быстро определять дисперсный состав жировой эмульсии (в сравнении с методом электронного микроскопирования) без использования дорогостоящего оборудования;испольэовать предлагаемый метод в качестве экспресс-метода для определения дисперсности эмульсий в производстве, оценивать размер частиц, сразу, так как объект сравl5 кения - эритроцит находится в одном ноле с объектом изучения — частей эмульсии, получать документированный в виде мазка образец эмульснии, не использую фотографиро20 вания.